超声对改性明胶固定化木瓜蛋白酶活力的影响

本文探讨了超声处理对戊二醛改性明胶包埋的木瓜蛋白酶酶解反应条件以及酶学特性的影响。采用均匀实验的方法优化超声处理固定化木瓜蛋白酶的反应条件。利用偏最小二乘回归法分析均匀实验结果,得到最优条件为:135 k Hz、0.05 W/cm2、20 min、40℃,此条件下实测相对酶活为221.25%,与理论值相对误差为3.58%。超声并没有改变固定化酶的最适p H和最适温度,即超声并不改变固定化酶的酶学特性。      

超声对包埋-交联法固定化木瓜蛋白酶催化活性的影响

研究超声对包埋-交联法固定化木瓜蛋白酶催化活性的影响。将醋酸纤维素铺制成膜,包埋木瓜蛋白酶;以戊二醛为交联剂,进行交联反应,制得固定化木瓜蛋白酶。分别研究超声频率、超声功率和超声时间对固定化酶活性的影响,再由均匀试验得到超声强化固定化木瓜蛋白酶催化活性的最优条件。经均匀试验确定最优超声条件为135kHz、0.05W/cm2、25min,相对酶活力为197.22%。验证实验证明最优的超声条件下测得固定化木瓜蛋白酶的相对酶活力为182.68%,相对标准偏差为7.37%,没有显著差异。     

超声对固定化木瓜蛋白酶化学动力学的影响

以固定化木瓜蛋白酶的表观酶活力为指标,探讨超声频率及功率对固定化木瓜蛋白酶化学反应动力学的影响。发现:固定化木瓜蛋白酶的酶解反应符合一级反应动力学特征,超声处理能明显降低此反应的表观活化能。超声功率为0.05 W/cm~2,超声频率为28、40、50、135 kHz时,表观活化能逐渐降低,在135 kHz,0.05W/cm~2时最低为38.23±0.53 kJ/mol;超声频率为135 kHz,超声功率从0.05 W/cm~2到0.45 W/cm~2时,表观活化能在135 kHz 0.25 W/cm~2的超声条件下最低为32.81±0.09 kJ/mol,比非超声条件下的表观活化能降低52.48%。     

超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶条件确定及其对凝胶载体结构的影响

为研究超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶酶活性与超声对凝胶结构影响之间的联系。在单因素实验基础上,通过均匀试验法优化得到超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶酶活性的最佳条件为:40 kHz、0.45 W/cm²、20 min、70 ℃,预测相对酶活力为342.64%。进一步研究不同超声频率、功率对海藻酸钠凝胶结构的影响,利用电子显微镜与图像数字化处理技术定量评价凝胶结构变化程度。发现超声处理对凝胶结构的影响趋势与超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶活性趋势一致,且在最佳超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶活性条件下,凝胶结构变化最显著。表明超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶活性与超声对凝胶结构的影响有着密切关系。     

木瓜蛋白酶无载体固定化研究

交联酶聚体(CLEA)是一种新型的无载体固定化技术.以木瓜蛋白酶为模型体系,系统地研究了木瓜蛋白酶的提取纯化方法,固定化制备CLEA的方法以及游离木瓜蛋白酶和CLEA的应用条件、稳定性和不同离子对其活力的影响.结果表明,最适催化温度游离酶为65℃,CLEA最适催化温度为75C;游离酶最适催化pH值为6.6,CLEA最适催化pH值为7.6;米氏常数Km游离酶为1.25μmol/mL,CLEA为0.44μmol/mL.与游离木瓜蛋白酶相比,CLEA的米氏常数Km减小,具有耐高温、活性强、稳定性好等特征,能耐受一定pH值和温度变化,对金属离子不敏感.     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,戊二醛作为交联剂,采用载体交联法制备固定化木瓜蛋白酶,并研究了固定化木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳固定化条件为给酶量为40～50mg/g,于pH7.5,25～30℃下,0.4%～0.5%的戊二醛溶液交联12h,所得的固定化木瓜蛋白酶的活力回收率平均达61.6%。     

应用固定化木瓜蛋白酶制备大豆肽的研究

以壳聚糖为载体,用戊二醛交联将木瓜蛋白酶固定化,研究水解大豆分离蛋白制备大豆肽的工艺条件,结果表明:固定化木瓜蛋白酶的表观米氏常数为8.9 mg/mL.固定化木瓜蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH为7.8,最佳底物浓度为2.0～3.0 mg/mL,大豆分离蛋白的最佳流速为0.2 mL/min,大豆分离蛋白的水解率达到42.6%,酶解液中大豆肽含量为1.453 mg/mL.酶解液多肽分子质量大部分在10 ku以下.     

海藻酸钠、卡拉胶联合固定化木瓜蛋白酶特性研究

以海藻酸钠、卡拉胶共混包埋制备固定化木瓜蛋白酶,并对木瓜蛋白酶固定化条件和固定化酶的部分性能进行了探讨。在海藻酸钠浓度1·5%、卡拉胶浓度0·8%、木瓜蛋白酶浓度1·0%、氯化钙浓度4·0%、固定化时间11h、固定化温度为35℃、固定化pH7·5的条件下,可以获得最佳的固定化效果,固定化酶活力回收率为56·27%。与游离酶相比,制备固定化酶的最适酶促反应pH由7·0降至6·5,最适酶促反应温度由40℃升至50℃,其作用温度范围、pH范围均比游离酶范围宽。      

固定化木瓜蛋白酶的研究进展

木瓜蛋白酶具有水解蛋白质能力强的特点,但游离的木瓜蛋白酶稳定性差,难以回收利用;固定化木瓜蛋白酶既保持了酶的催化性质,又克服了游离酶的不足,具有广泛的发展前景。     

ZIF-F原位合成法固定化木瓜蛋白酶

文章以新型ZIF-F为固定化载体,通过原位合成法固定木瓜蛋白酶,制备得到新型固定化酶Papain@ZIF-F,并采用傅里叶红外光谱、X射线衍射图谱、扫描电镜、BET比表面积分析、热重分析进行表征。此外,还制备了以ZIF-8为基质原位合成的Papain@ZIF-8并与Papain@ZIF-F在形貌结构及比活性、稳定性等方面进行对比。表征结果证明,木瓜蛋白酶被包埋于ZIF骨架中且酶的加入并未影响到ZIF骨架的结构特性,且采用ZIF-F包埋的酶粒径可达2μm,远超ZIF-8的500nm,这可能是因为ZIF-F合成过程中加入2-甲基咪唑量较少导致晶体生长较慢,颗粒尺寸偏大。比活性方面,Papain@ZIF-F的比活性较游离酶及Papain@ZIF-8均有显著提升,最高可达390 U/mg,较游离酶比活性提升了约200%。这可能是因为ZIF-F具有更大的比表面积,使其对底物的阻力更小从而有利于酶与底物充分接触,进而导致比活性提高。最后,Papain@ZIF-F在重复使用5次后活性仍高于游离酶,重复使用情况良好。     

固定化木瓜蛋白酶制备大豆肽的研究

采用固定化木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白,对大豆分离蛋白的最佳预处理温度进行了探讨,并对制备大豆肽的工艺条件进行了正交实验.结果表明:大豆蛋白的最佳预处理温度为90℃;在底物浓度2.7 mg/mL、温度55℃、pH7.8、流速0.6 mL/min的条件下,利用固定化木瓜蛋白酶制备大豆肽,酶解液中的可溶性蛋白含量为1.384 mg/mL,水解度43.65%;影响酶水解反应的因素主次顺序为:pH＞温度＞底物浓度＞流速.     

超声对木瓜蛋白酶酶解产物分子量分布的影响

本文探讨了超声对木瓜蛋白酶酶解产物分子量大小及分布的影响。以牛血清白蛋白为底物,采用高效液相色谱法测定游离酶和固定化酶在超声和非超声作用下的酶解产物肽分子量大小及分布情况。结果表明,游离酶和固定化酶在超声和非超声条件下,酶解产物肽分子量大小及分布有一定的差异。非超声条件下,游离木瓜蛋白酶酶解效果明显比固定化酶酶解效果要好。比较超声条件下游离木瓜蛋白酶和固定化木瓜蛋白酶酶解产物分子量大小及分布情况发现:游离木瓜蛋白酶超声条件下酶解肽主要分布在180~1000 Da、1000~5000 Da这两个范围内,而固定化木瓜蛋白酶超声条件下酶解肽在<180 Da所占比例比较大。      

固定化胰蛋白酶制备大豆肽正交实验的研究

采用固定化胰蛋白酶水解大豆蛋白,对大豆蛋白的最佳预处理温度进行了探讨,并对制备大豆肽的工艺条件进行了正交实验。结果表明:大豆蛋白的最佳预处理温度为90℃;固定化胰蛋白酶的表观米氏常数为12.5mg/mL。影响酶水解反应显著性的顺序为:温度,pH值,底物浓度,流速;在底物浓度2.7 mg/mL、温度60℃、pH8.7、流速0.6mL/min的条件下,利用固定化胰蛋白酶制备大豆肽,酶解液中的可溶性蛋白含量最大为1.414mg/mL,水解度41.51%。     

水滑石固定化木瓜蛋白酶性质的研究

以阴离子型层状材料——水滑石(LDHs)作为载体,经过戊二醛活化处理后采用共价结合的方法固定化木瓜蛋白酶。研究了溶液酶及固定化酶的催化特性,并进行了比较。结果表明:固定化酶的最适反应pH值为8.0~9.0,最适反应温度为65℃;固定化酶的pH稳定性、热稳定性、对尿素和有机溶剂稳定性、贮藏稳定性与溶液酶相比都有显著的提高,并且固定化酶具有较好的操作稳定性,连续反应11批后,酶活未见下降。     

木瓜蛋白酶的活力检测标准研究

分别按国家标准和企业标准中紫外分光光度法测定了两个酶制剂企业生产的木瓜蛋白酶酶活力,结果表明,企业标准与国家标准测定的酶活力两种方法测定的结果差别高达几十倍,原因可能与底物溶液的pH、反应条件和巯基还原剂半胱氨酸盐酸盐有关。      

超声强化固定化酶催化活性条件的优化

本文主要是在海藻酸钠-改性明胶包埋木瓜蛋白酶的基础上,优化超声对固定化木瓜蛋白酶催化活性的条件。采用单因素实验从超声功率、超声频率、超声温度、超声时间四个方面研究超声对固定化酶催化活性的影响,最后利用DPS软件设计均匀实验得到最优超声条件。结果显示最优超声条件:超声功率为0.35 W/cm²、超声频率40 kHz、超声温度60℃、超声时间40 min,相对酶活力为273.23%。验证实验测得相对酶活力为260.37%±12.23%,验证值与预测值相对标准偏差为2.41%,可信度高。通过本研究证明适宜的超声处理能提高固定化酶活力。     

明胶-壳聚糖-海藻酸钠凝胶包埋木瓜蛋白酶的研究

本文采用明胶和改性明胶,分别制备明胶-壳聚糖-海藻酸钠凝胶,采用其包埋木瓜蛋白酶。以硬度和酶活为指标,通过单因素实验研究明胶-壳聚糖-海藻酸钠质量浓度、CaCl₂浓度和pH因素的影响,并采用均匀实验优化工艺条件。通过单因素及均匀优化实验,获得固定化酶制备最佳条件:使用明胶优化结果:明胶浓度0.45%、壳聚糖浓度0.42%、海藻酸钠浓度2.55%、CaCl₂浓度0.8 mol/L、缓冲液pH7.5;使用改性明胶优化结果:改性明胶浓度0.45%、壳聚糖浓度0.15%、海藻酸钠浓度2.55%、CaCl₂浓度0.8 mol/L、pH6.5。均匀实验优化结果表明,与使用明胶相比使用改性明胶的酶活提高37%,硬度减少35%。使用改性明胶可提高固定化酶的酶活力,为提高固定化酶活力的研究提供一定的理论基础。     

改性树木纤维素固定化木瓜蛋白酶的研究

采用梧桐树、构树、槐树、枣树四种树木纤维素,经2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪改性处理后对木瓜蛋白酶进行固定化。考察了给酶量、pH以及固定化时间和温度等因素对固定化木瓜蛋白酶活力的影响,研究了固定化木瓜蛋白酶的酸碱稳定性、操作稳定性以及存储稳定性等性质。结果表明,树木纤维素是良好的固定化酶载体,其中以结构较为疏松的梧桐树树木纤维素固定化木瓜蛋白酶的效果最佳,固定化24h,其最佳给酶量为16mg/mL粗酶,最适pH为7.0,最佳反应温度为45℃。固定化酶活力回收为64.3%,重复使用六次后的相对酶活力仍保持在73%以上,同时酸碱稳定性等均明显增强。