木瓜中纤溶活性蛋白的分离与鉴定

从木瓜中分离出能溶解纤维蛋白的活性蛋白。木瓜新鲜乳汁经浸提、盐析、透析得蛋白粗提物;SephadexG-75凝胶层析分离蛋白粗提物,收集蛋白质的洗脱液,依序集合为共1～10个样品,纤维蛋白平板法筛选纤溶活性蛋白;SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度及分子量;体外观察该蛋白对血凝块的溶解效果。木瓜蛋白粗提物有纤溶作用,经层析后得到的4、5、6号样品均有纤溶活性,5号样品SDS-PAGE电泳为单一蛋白条带,分子量为26ku,以尿激酶为标准标定该蛋白纤溶活性为17.85IU/mL。该蛋白在体外可通过激活纤溶酶原或直接降解纤维蛋白溶解血栓。木瓜中含有一种分子量为26ku的纤溶活性蛋白。     

少根根霉发酵液纤溶酶的分离纯化及部分性质鉴定

以产纤溶酶的根霉菌8B进行发酵,发酵液通过蒸发浓缩、(NH_4)_2SO_4分级沉淀、透析除盐、DEAE阴离子交换纤维素层析、Sephadex G—75凝胶过滤层析对该酶进行纯化,纯化浓缩后酶液活力达到3 978.5U/ mL。结果表明,该纤溶酶在-18～37℃,pH 5～7时性质稳定。该酶即能直接分解纤维蛋白,又能激活血纤维蛋白溶酶原,间接分解纤维蛋白。对家兔血栓的溶解实验表明,8B纤溶酶6h对血栓的溶解率达到52.4%,并且对兔血细胞没有明显损伤,在体外是安全有效的。     

纳豆激酶纤溶活性研究

通过制备纳豆提取液、纳豆激酶粗酶,对纳豆激酶纤溶活性进行研究。结果表明:纳豆激酶纤溶活性最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

一种新型纤溶酶SPFE-Ⅲ的分离纯化和纤溶机理研究

本实验室从亚洲传统发酵食品--虾酱中筛选到一株产纤溶酶能力较强的芽孢杆菌(Bacillus sp.nov.SK006),发酵液经乙醇沉淀、离子交换色谱(DEAE-Sepharose CL 6B)、凝胶过滤色谱(Superdex75)后分离纯化出一种电泳纯的纤溶酶SPFE-Ⅲ,分子量约为42.6 kDa,酶活为7.1 U/mg(以plasmin为标准).SPFE-Ⅲ对纤维蛋白原的降解过程为最先降解α链,其次是γ链,而对β链的降解最缓慢;利用加热纤维蛋白平板法研究纤溶酶SPFB-Ⅲ,结果发现该酶对纤维蛋白有直接降解作用,而对纤维蛋白溶解酶原的敏感性较低.     

带自身启动子的6gαB基因在枯草芽孢杆菌中的表达

将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的启动子连同β半乳糖苷酶bgαB基因经PCR扩增后，连接在T载体上，再取代枯草杆菌载体pZ01-bgaB的启动子，将其在枯草杆菌宿主WB600中表达．经摇瓶发酵20h，得到乳糖酶活力6．37U／mL，比活力3．814U／mg，SDS—PAGE电泳显示有明显重组蛋白质条带．证明了嗜热脂肪芽孢杆菌来源的启动子在枯草杆菌中是完全适用的．     

枯草芽孢杆菌纤溶酶的纯化及性质研究

以从牛肉酱中筛选的1株高产纤溶酶的枯草芽孢杆菌为材料,进行发酵产酶。其发酵液经过硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、C M SepharoseCL-6B离子交换层析和电泳制备,得到电泳纯的枯草芽孢杆菌纤溶酶;其分子质量为32.5ku;pI10.9～11.8;具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用;胰蛋白酶对此酶无降解作用,对其纤溶活性无影响;该酶在pH4.0～13.0稳定,对温度的适应范围较广。     

纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究

经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6～10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

有机溶剂二次沉淀法提取纯化酵母菌超氧化物歧化酶的研究

酿酒酵母BUV094经发酵培养后，离心收集菌体，将菌体用甲苯法破壁得到粗酶液，粗酶液经调节PH除杂蛋白，丙酮二次沉淀三步纯化工艺，得到纯化的SOD，其比活为1015U／mg，收率为65．2％。PAGE电泳后的活性染色显示，酵母超氧化物歧化酶具四条同功酶。该样品经KCN，H2O2，氯仿—乙醇抑制试验，酶类型为Cu／ZnSOD。     

牛乳纤维蛋白溶解酶体系及其对乳制品品质的影响

纤维蛋白溶解酶是牛乳中主要的内源酶,它与纤维蛋白溶解酶原、纤维蛋白溶解酶原激活剂、纤维蛋白溶解酶原激活剂抑制剂和纤维蛋白溶解酶原抑制剂等构成了纤维蛋白溶解酶体系。任何激活纤维蛋白溶解酶原的因素都可以提高纤维蛋白溶解酶的活性,从而对乳制品的品质产生影响,如-UHT奶的凝胶化、变苦及干酪成熟、风味变化等。除了热处理会使纤维蛋白溶解酶体系发生变化外,高压处理、外源蛋白酶都会对其产生一定的影响,从而对乳品品质产生作用。对纤维蛋白溶解酶体系动力学变化的研究,为纤维蛋白溶解酶的变性提供了理论依据,也为研究乳品品质变化提供了动力学参数。     

产纤溶酶的米曲霉筛选及测定方法的研究

利用平板透明圈法作为初筛方法，从不同的酿造曲样中筛选出1株产纤溶酶酶活较高的米曲霉菌株SA-6，其产纤溶酶酶活为25U／mL。通过比较发现，可以用自制纤维蛋白代替纤维蛋白原和尿激酶测定发酵液的纤溶酶酶活，在大通量的菌株筛选过程中可以节省大量费用。     

榆干离褶伞溶栓酶的纯化及酶学性质研究

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从榆干离褶伞菌丝体中纯化一种溶栓酶,并探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性。实验结果表明,其分子质量约为50 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 6.0,35℃,并对tPA底物S-2288最敏感。Mn~(2+)和Mg~(2+)激活酶活性,而Cu~(2+),EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。榆干离褶伞很有潜力成为治疗血栓的新的药物来源。     

淡豆豉提取物的体外溶栓特性研究

为了探讨各种因子对豆豉溶栓酶体外溶栓能力的影响，将豆豉溶栓酶放置于不同温度、酸碱度、金属离子强度及各种不同的化学物质中，测定其溶栓能力的大小。再加入各种类型的抑制剂，测定其溶栓能力的变化情况。以未经任何处理的同批次豆豉溶栓酶为对照组。结果豆豉提取物的最适存放温度为45℃以下，最适pH为8，Mn^2 、Ca^2 、Mg^2 显然对酶活有激活作用，添加明胶对溶栓酶活力起稳定作用。PCMB、TCLK、PMSF、胰酶抑制率几乎达100％。EDTAA、β-巯基乙醇对此酶活性影响不大。为工业化生产豆豉溶栓酶的下游工作提供可靠的依据。     

白黄侧耳溶栓酶的分离纯化及特性分析

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从白黄侧耳菌丝体中纯化一种溶栓酶,并进行酶学性质研究。实验结果表明,其分子质量约为18 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 7.0,40℃,并对糜蛋白酶底物S-2586最敏感。Co2+和Mg2+激活该酶活性,而Cu2+、EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅可直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。     

纤溶酶分离纯化的研究进展

对动物纤溶酶(蝮蛇抗栓酶、蚓激酶)及微生物纤溶酶(纳豆激酶、豆豉纤溶酶、链激酶、葡激酶)分离纯化技术进行了综述。     

豆豉纤溶酶生产菌发酵液功能性研究

豆豉是中国的一种传统食品,为证实其具有多种保健功能,对豆豉纤溶酶生产菌发酵液的抑菌作用、抗氧化性及溶栓活性进行了研究.试验结果表明：抑菌作用试验中,pH值在4.0～10.0之间均有抑菌活性,且抑菌效果基本保持稳定,当温度在4～80℃之间变化时,粗酶液的抑菌活性变化不很大,具有一定的热稳定性;抗氧化试验中,豆豉纤溶酶生产菌的发酵培养基和发酵液离心后的上清液都具有一定的抗氧化作用,其量不同抗氧化性也不同;溶栓作用试验中,豆豉纤溶酶在pH值4.0～10.0范围内都较稳定,酶活在碱性条件下比酸性条件下高,最适pH值为7.0,豆豉纤溶酶在冷藏和室温保存中较稳定,随着温度增高,酶活降低,豆豉纤溶酶粗酶液在贮存期中溶栓作用较为稳定。     

发酵豆制品中产溶纤酶菌株的筛选

血栓性疾病是严重危害人类健康的疾病，临床上应用的许多溶栓药物大多都存在着缺陷，溶纤酶作为一种新型的溶栓药物克服了许多溶栓药物的缺点正被广泛的研究与利用。本实验目的是从豆豉、腐乳等发酵豆制品中筛选出产溶纤酶活力高的菌株，为开发高溶纤酶活性的溶栓药物奠定基础。     

豆豉纤溶酶研究概况及进展

豆豉纤溶酶是从我国传统发酵食品豆豉分离得到一种具有强烈纤溶作用丝氨酸蛋白酶。该文对豆豉纤溶酶产生菌筛选与诱变、发酵工艺、酶分离纯化、理化性质、分子生物学研究进行综述;同时还简介豆豉纤溶酶活性测定方法和抗栓、溶栓作用,并对其应用前景进行展望。