合浦珠母贝源抗氧化肽的研究进展

合浦珠母贝是海水养殖生产珍珠主要经济贝类,合浦珠母贝源活性肽是近年来的研究热点。本文综述了国内外近年来在合浦珠母贝源抗氧化肽的酶法制备技术、分离纯化技术、功能性质和应用的研究现状,评述了目前开发合浦珠母贝源抗氧化肽的现状及存在的问题,深入分析了现代基因工程技术在合浦珠母贝源抗氧化肽中的应用前景,为今后高效开发利用合浦珠母贝源抗氧化肽和其他海洋活性肽提供参考。      

合浦珠母贝肉短肽的分离及其抗氧化活性研究

为制备具有抗氧化能力的合浦珠母贝肉活性肽,本文采用Sephadex G-25分子筛层析法对合浦珠母贝肉酶解产物进行分离,测定分离到的各活性组分分子量及其总抗氧化活性、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。结果表明,合浦珠母贝肉酶解产物经Sephadex G-25分离得到6个主要活性组分,相对分子量分别为1437.5、833.7、421.9、244.7、89.0、17.4u,其中功能短肽F1(1437.5u)、F2(833.7u)、F4(244.7u)的抗氧化效果较强,特别是F2(833.7u)短肽具有最强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。该研究为合浦珠母贝肉抗氧化活性肽的开发提供理论技术依据。     

合浦珠母贝肉酶解液中抗氧化肽的分离及活性研究

合浦珠母贝肉酶解液经膜分离后,采用葡聚糖凝胶G-25进行分离纯化,对分离组分的总抗氧化性、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力和在化妆品中的应用效果进行测定,结果表明:经分离得到10个有效组分F1-F10,其中F4组分的总抗氧化性最强,DPPH自由基清除能力44.1±0.3%,羟自由基清除率76.0±1.5%,将合浦珠母贝抗氧化肽(F4组分)添加到营养霜中,当添加量为1.0%时,抗氧化活性A700nm为1.599±0.004,能有效提高营养霜的抗氧化性,且营养霜的性状没有发生改变。该研究为合浦珠母贝肉抗氧化肽的结构和在化妆品中的应用研究奠定基础。     

合浦珠母贝肉抗氧化肽的结构分析

为探明从合浦珠母贝肉中酶法制备得到的抗氧化肽的结构,采用基质辅助激光飞行时间质谱技术测定反相高效液相色谱（reverse phase High-performance liquid chromatography,RP-HPLC）分离合浦珠母贝肉酶解产物所得各组分的分子量,并对其中具有较强抗氧化能力的组分进行了二级质谱结构解析。结果表明,水解液经RP-HPLC分离,得到抗氧化活性较强的五个肽段组分A、B、C、D和E,其对应的相对分子量分别为1022.54、1334.60、1494.75、1085.60、1288.82和1304.83u。其中对苯代苦味肼基自由基（DPPH·）具有最强清除能力的是C组分肽,其氨基酸序列为Val-Ala-Thr-Gly-Leu-Arg-Lys-Glu-Gly-Val-Val-Gly-Gly-Pro-Arg。以上研究结果初步揭示了合浦珠母贝肉抗氧化肽的结构与抗氧化活性的关系。      

合浦珠母贝糖胺聚糖的分离纯化及理化性质分析

研究合浦珠母贝糖胺聚糖粗品经分离纯化得到的精制品的理化性质,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定样品分离情况,并对样品进行红外分析。经枯草杆菌蛋白酶与胰蛋白酶双酶酶解提取糖胺聚糖粗制品后,将粗制品利用DEAE-52离子交换柱进行纯化,纯化时分别用0.5 mol/L Na Ac（p H=6.0）和1.5 mol/L Na Cl进行洗脱,得到精制品GAG₁和GAG₂。利用苯酚-硫酸法、Bradford法、明胶-氯化钡法、Orcinol法、Wagner法、红外光谱法分析GAG₁和GAG₂的理化性质。通过各实验结果,可以初步猜测GAG₁为肝素钠,GAG₂为硫酸软骨素。      

添加剂和光照对合浦珠母贝肉酶解液抗氧化活性的影响

为了探明合浦珠母贝(Pinctada fucata)肉抗氧化肽在应用中是否受到食品添加剂和光照的影响,文章以清除DPPH·、·OH和O2-·等自由基的能力以及可溶性蛋白质量分数(SPC)为指标,测定合浦珠母贝肉酶解液的抗氧化稳定性受食品辅料(Na Cl、蔗糖和葡萄糖)、不同浓度防腐剂(苯甲酸钠和山梨酸钾)、金属离子(K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+和Cu2+)等添加剂以及光照的影响。结果表明:Na Cl(0.5%~4.0%)和蔗糖(2.0%~10.0%)对合浦珠母贝肉酶解液抗氧化性影响并不显著,长时间保存,葡萄糖的影响较大;防腐剂对其抗氧化活性和SPC也有一定的影响,0.6%的山梨酸钾和0.4%的苯甲酸钠有益于其保存,且苯甲酸钠的作用效果大于山梨酸钾;K+、Ca2+、Mg2+对其清除自由基的能力影响较小,而Cu2+的影响最大,0.05mg·m L-1以上浓度的Cu2+和光照都会降低其抗氧化能力。     

添加剂和光照对合浦珠母贝肉酶解液抗氧化活性的影响

为了探明合浦珠母贝（Pinctada fucata）肉抗氧化肽在应用中是否受到食品添加剂和光照的影响,文章以清除DPPH·、·OH和O2-·等自由基的能力以及可溶性蛋白质量分数（SPC）为指标,测定合浦珠母贝肉酶解液的抗氧化稳定性受食品辅料（Na Cl、蔗糖和葡萄糖）、不同浓度防腐剂（苯甲酸钠和山梨酸钾）、金属离子（K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+和Cu2+）等添加剂以及光照的影响。结果表明:Na Cl（0.5%⁴.0%）和蔗糖（2.0%¹0.0%）对合浦珠母贝肉酶解液抗氧化性影响并不显著,长时间保存,葡萄糖的影响较大;防腐剂对其抗氧化活性和SPC也有一定的影响,0.6%的山梨酸钾和0.4%的苯甲酸钠有益于其保存,且苯甲酸钠的作用效果大于山梨酸钾;K+、Ca2+、Mg2+对其清除自由基的能力影响较小,而Cu2+的影响最大,0.05mg·m L-1以上浓度的Cu2+和光照都会降低其抗氧化能力。      

响应面法优化合浦珠母贝糖胺聚糖提取工艺

以合浦珠母贝全脏器为原材料,经解冻匀浆和热水浸提后,采用枯草杆菌中性蛋白酶和胰蛋白酶双酶酶解,sevage法除蛋白2次,清液醇沉得糖胺聚糖粗制品(GAG),粗制品经DEAE-52离子交换柱纯化后得精制品。在单因素试验基础上,以粗制品得率与糖胺聚糖含量的乘积Y/(×10-4)为响应值,加酶量、液料比、酶解时间为影响因子,利用响应面试验分析法优化GAG的粗提工艺,得最佳提取工艺:加酶量为1.14%(枯草杆菌中性蛋白酶与胰酶质量的比为7∶8);液料比为3∶1(m L∶g)酶解时间为4.1 h。在此条件下,糖胺聚糖粗制品得率为0.518%,糖胺聚糖含量为10.9%,经DEAE-52柱纯化后的糖胺聚糖含量为89%。     

栅栏技术制备高水分即食合浦珠母贝肉工艺的研究

以栅栏技术为指导,确定高水分即食合浦珠母贝肉的加工工艺。本研究通过烫煮时间、p H、卤制时间、烘烤温度、烘烤时间、低温处理、杀菌工艺等栅栏因子的交互作用,制备出具有良好感官品质和较长保质期的即食食品。结果表明,在将贝肉在沸水里烫煮6~7 min;沥干后在p H为4.6~4.8,温度为61~65℃的卤汁中卤制3 h;在烘烤过程中采取50、60、70℃三段升温方式,每段烘烤时间分别为1.5、1、1 h;将烤好的贝肉经真空包装后冷藏36 h(0~4℃),再进行巴氏杀菌(80~85℃,30 min)的条件下制备的即食贝肉的抑菌效果最好。且此时产品的感官综合评价值最高,水分含量为47.12%±0.95%,水分活度为0.90±0.01。研制生产高水分即食合浦珠母贝肉产品,较好的保持了产品的质地和风味。      

响应面法优化微波辅助酶解合浦珠母贝蛋白工艺

研究微波对酶解合浦珠母贝蛋白的影响,以水游离氨态氮含量和抗氧化活性为指标,选择较好的作用酶,通过单因素试验确定料液比、加酶量（E/S）、微波温度、微波功率及时间和后续水浴时间等因素水平,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,响应面法优化酶解合浦珠母贝蛋白工艺条件。结果表明,微波辅助蛋白酶酶解合浦珠母贝蛋白工艺条件为微波温度58 ℃、微波功率300 W、微波时间17 min、加酶量5 000 U/g,后续在58 ℃条件下再水浴1.5 h。预测响应值为0.224 4,水解度达到26.15%,验证实验证明与响应优化模型预测值误差不大,二次多元拟合度较好。     

重组大肠杆菌制备珍珠贝源抗氧化肽发酵条件优化

为进一步提高实验室前期构建的产抗氧化肽重组工程菌株DE3-p EGX6p-1-PFMAP制备珍珠贝源抗氧化肽的制备效率,通过摇瓶发酵过程中发酵条件包括诱导温度、诱导时间、IPTG浓度、培养基、摇床转速和接种量的单因素优化实验确定最佳发酵条件,并进一步利用正交实验优化50 L发酵罐发酵条件,结果表明摇瓶和50 L发酵罐最佳发酵条件一致,均为诱导温度30℃、诱导时间4 h、IPTG浓度0.2 mmol/L、培养基p H7、摇床转速220 r/min和接种量5%（v/v）。该工艺操作方便、过程简单、时间短,能高效制备出目的蛋白,为珠母贝源抗氧化肽的下一步工业化应用提供了有力技术支撑。      

马氏珍珠贝肉蛋白水解特征及其ACE抑制肽的筛选

为探索马氏珍珠贝肉的水解规律及快速鉴定血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性肽,本研究以不同时间(2、4、6、8、10h)的酶解物为对象,采用三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、分子质量分布、反相高效液相色谱(reversed-phase high...     

合浦珠母贝黏液细菌F35的鉴定及其抗菌物质分析

利用Zobell 2216E培养基从合浦珠母贝黏液中分离得到菌株F35,菌株对6种常见的食源性致病菌均有抑制作用。通过对菌株F35细菌形态观察、生理生化特性并结合16S rRNA基因序列分析,鉴定该菌为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。其发酵液排除酸类物质和过氧化氢的干扰后,分别经过4种蛋白酶处理,蛋白酶酶解发酵液对指示菌的抑制作用均有不同程度的下降,表明菌株F35抗菌成分为蛋白或多肽类物质,具有开发为新型天然食品防腐剂的潜力。     

风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉制备抗菌肽人工神经网络法优化工艺

利用具有自学习特点的人工神经网络可实现对酶解过程的模拟仿真,研究从合浦珠母贝肉中制备抗菌肽的最佳工艺条件。采用3层(5-9-3)人工神经网络法对风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉的工艺过程进行模拟和优化,并通过管碟抑菌法对产物的抑菌性质进行分析。结果表明：pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.6%、水解时间4h、料液比7:5,制备得到肽A,抑制鼠伤寒沙门氏菌最强,抑菌圈直径14.20mm,平均肽链长度2.6;pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.7%、水解时间4h、料液比3:2,制备得到肽B,抑制痢疾志贺氏菌最强,抑菌圈直径23.42mm,平均肽链长度2.8;pH6.5、水解温度60℃、酶添加量2.5%、水解时间4h、料液比7:5,制备得到肽C,对单核细胞增生李斯特菌的抑制效果最强,抑菌圈直径16.60mm,平均肽链长度2.5。3种抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌也具有较强的抑菌效果,抑菌率为74.3%～80.8%。本研究利用人工神经网络优化制备的贝肉抗菌肽克服了纯度低、提取率低等缺点,为合浦珠母贝肉抗菌肽的开发利用提供技术支撑。     

酶解蛋白制备抗氧化肽研究进展

从蛋白质酶解产物中制备抗氧化活性肽研究受到高度重视,对蛋白质资源开发利用具有重要意义。该文介绍近年来这一领域研究进展。