酸-冷交互胁迫对保护冷冻干燥发酵乳杆菌活性的作用

为探究酸-冷交互胁迫对冷冻干燥发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)ATm的影响,考察酸-冷交互胁迫的处理方式对细胞存活率、滞后时间以及酸化速率的影响,同时测定交互胁迫对乳酸脱氢酶、ATP酶活性以及细胞膜完整性的影响。结果表明,pH 4.5、4℃酸-冷交互胁迫能够显著提高细胞冷冻干燥存活率及酸化速率,其中冷冻干燥存活率能够达到87.19%,优于单因素胁迫;pH 4.5、4℃酸-冷交互胁迫能够提高发酵乳杆菌ATm的冷冻干燥存活率保护其活性,提高酶活性,维持细胞膜完整性。     

不同生长阶段保加利亚乳杆菌关键蛋白酶基因表达变化规律

乳酸菌自身不能直接利用外源蛋白质,必须通过蛋白水解体系水解外源蛋白质,生成供菌体正常生长需要的短肽和游离氨基酸。该研究选择6株保加利亚乳杆菌(KLDS1.0207、1.0501、1.1007、1.9201、1.9203、1.0208)进行脱脂乳发酵,在mRNA转录水平上,应用实时荧光定量PCR技术,探讨保加利亚乳杆菌的蛋白水解体系中关键蛋白酶基因(prtB、oppD、pepC、pepF、pepQ、pepX、pepT)在菌体不同生长阶段表达的动态变化。结果表明,所有菌株生长曲线均呈S型。随着菌体在脱脂乳中的不断生长,蛋白水解活力极显著增强(P<0.01),7个目的基因相对表达量呈现总体上调。6株菌的prtB和oppD基因在对数期的相对表达量极显著高于对照组(4h)(P<0.01)。对数期的胞内肽酶基因(pepC、pepF、pepQ、pepX、pepT)的表达量与对照组(4 h)相比,呈极显著上调(P<0.01),但菌株KLDS 1.0207的pepQ基因在对数期下调,而稳定期上调。由此可见,蛋白水解活力较高的菌株,其生长和产酸特性也较高;发现在脱脂乳中培养保加利亚乳杆菌,其关键蛋白酶基因的表达量呈时间依赖性,且菌株间各蛋白酶基因表达量有较大差异。     

保加利亚乳杆菌冻干保护剂保护作用的研究

冷冻干燥前在菌液中加入保护剂,可提高乳酸菌的冻干存活率.研究比较多种保护剂的保护作用,其中海藻糖的保护效果最好;在扫描电镜下放大不同倍数观察了冻干后的保加利亚乳杆菌,并对海藻糖的保护机理进行了探讨.     

保加利亚乳杆菌的特性及其应用

保加利亚乳杆菌是乳酸菌中应用较广的一种,与人类的生活关系密切.文中介绍了保加利亚乳杆菌的生长特性、产酸特性、产香特性、产胞外多糖特性以及其在食品发酵、工业乳酸发酵、医疗保健和饲料行业等领域的应用.     

培养条件对保加利亚乳杆菌中胞外肽酶PrtB基因表达的影响

目的：选择实验室保藏的保加利亚乳杆菌,探究不同的培养条件对其关键酶PrtB基因表达的影响。方法：利用实时荧光定量PCR测定生长时期、氮源、初始pH值（5.6,5.9,6.2和6.5）和培养温度（30,37,42 ℃和45 ℃）对PrtB基因表达的影响。试验结果表明,保加利亚乳杆菌LB08012、LB08014和LB08016从对数初期到稳定期,PrtB基因的表达量显著下调（P<0.05）;N缺乏条件与正常MRS培养条件相比,PrtB的表达量呈现明显增加的趋势（P<0.05）,而添加酪蛋白胨与正常MRS培养条件相比,PrtB的表达量显著下调（P<0.05）;在初始培养pH值为5.9,6.2和6.5中的表达量与对照组（pH5.6）相比,LB08006、LB08007、LB08012和LB08016菌株的PrtB的表达量为增加（P<0.05）,而LB08014、LB08015和LB08017菌株为降低（P<0.05）;在37,42 ℃和45 ℃时,LB08007、LB08012、LB08014和LB08015菌株的PrtB的表达量为先上升后下降,而LB08006、LB08016和LB08017为先上升后下降的趋势,45 ℃时PrtB的表达量最低,趋于0,较对照组（30 ℃）下降10.7倍。     

不同处理的保加利亚乳杆菌对小鼠巨噬细胞的激活作用

用Lactobacillus bulgaricus的活菌体、热杀死菌体、不同发酵液pH值条件下收集菌体和4℃下储藏的菌体体外处理,测定其对小鼠巨噬细胞活性的影响,发现在适当的浓度下,各处理均能提高巨噬细胞的活性,但高浓度的菌体对巨噬细胞活性均有抑制作用。同时发现,热杀菌、降低发酵液pH值和4℃下储藏后,仍具有激活巨噬细胞的作用,但是作用剂量有所提高。     

海藻糖对保加利亚乳杆菌保护应用的研究

本文考察了不同工艺过程包括冷藏，冷冻，真空干燥，冷冻干燥以及喷雾干燥和室温下保存过程中不同保护剂对保护利亚乳杆菌存活性和产酸率的影响。结果发现，海藻糖具有最好的抗冷冻，抗脱水效果。浓度试验表明，海藻糖的最达添加量为5％－10％（w/v)。     

保加利亚乳杆菌冷冻干燥粉不同复壮方法的比较

保加利亚乳杆菌冷冻干燥粉用１０％番茄脱脂乳培养基复壮,菌种的产酸量高,发酵活力恢复较好。     

不同处理的保加利亚乳杆菌对 小鼠巨噬细胞的激活作用

用Lactobacillus bulgaricus的活菌体，热杀死菌体，不同发酵液pH值条件下收集菌体和4℃下储藏的菌体体外处理，测定其对小鼠噬细胞活性的影响，发现在适当的浓度下，各处理均能提高巨噬细胞的活性，但高浓度的菌体对巨噬细胞活性均有抑制作用，同时发现，热杀菌，降低发酵液pH值和4℃下储藏后，仍具有激活巨噬细胞的作用，但是作用剂量有所提高。     

保加利亚乳杆菌细胞壁蛋白酶基因克隆及结构分析

本文以保加利亚乳杆菌基因组为模板,利用PCR的方法扩增细胞壁蛋白酶基因(prtB),并且利用GeneBank数据库和生物软件对prtB进行对比和生物信息学分析,预测基因片段的相似性、表达出蛋白酶的蛋白大小、二级结构和膜结合性等性质。结果表明,测序后比对发现扩增片段与模板保加利亚乳杆菌prtB相似性为100%,证明基因片段未发生突变;prtB与德氏乳杆菌德氏亚种基因相似性为96%,与德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii)基因相似性为82%,具有一定的保守性和特异性。prtB基因G+C含量为47.49%,A+T含量为52.51%,编码1831个氨基酸,分子量为3338.7 kD,将此蛋白命名为PrtB,等电点pI为8.76。保加利亚乳杆菌的PrtB为亲水性稳定蛋白,总平均亲水性为-0.583,有28个Ser、9个Thr和25个Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化的作用位点,该蛋白为细胞外蛋白,其二级结构以不规则卷曲为主,其值为55.11%,α-螺旋和β-折叠仅占21.30%和23.59%。     

保加利亚乳杆菌关键糖代谢机制的研究

以五株德氏乳杆菌保加利亚亚种为出发菌株,通过高效液相色谱法对四株后酸化强弱不同的保加利亚乳杆菌发酵的酸奶中葡萄糖、乳糖、半乳糖及乳酸的含量进行测定,通过Carrez法处理沉淀蛋白,采用AminexHPX87H色谱柱,5mmol/LH2SO4溶液为流动相,流速0.6mL/min。结果表明,本实验中保加利亚乳杆菌室温贮存过程中产乳酸的途径为乳糖到葡萄糖,葡萄糖通过糖酵解生成乳酸,生成的半乳糖不被利用,一直处于累积状态;后酸化强的菌株代谢乳糖和葡萄糖的含量比后酸化弱的菌株代谢量更高,乳糖代谢途径为菌株贮存期产酸关键途径。     

弱后酸化保加利亚乳杆菌突变菌株的遗传稳定性研究

对从传统乳制品中筛选得到的德氏乳杆菌保加利亚亚种自发突变株KLDS 1.9201-4的遗传稳定性进行研究。将突变菌株进行连续传代,观察形态学变化,利用HPLC分析葡萄糖和乳酸的代谢情况,RAPD分析基因组DNA的稳定性。结果表明,突变菌株KLDS1.9201-4能够稳定遗传至第8代,在传代过程中菌落和菌体特征没有发生明显变化,KLDS 1.9201-4对初始葡萄糖的代谢率逐渐升高,终产物中乳酸的浓度也逐渐升高。KLDS 1.9201-4的基因组DNA相对稳定,没有发生明显变异。弱后酸化德氏乳杆菌保加利亚亚种的自发突变株KLDS 1.9201-4具有适宜的遗传稳定性,可被用于制作弱后酸化的酸奶发酵剂。     

保加利亚乳杆菌产酸关键酶的研究

以四株德氏乳杆菌保加利亚亚种为出发菌株,详细比较了四株菌产酸关键酶酶活的差异,从而找出菌株KLDS1.1006和KLDS1.1011后酸化较弱的主要原因及控制其产酸的关键酶。结果表明,H⁺-ATPase可以控制菌株的能量代谢,是产酸关键酶;β-半乳糖苷酶对于分解乳糖产酸的贡献非常大,是乳糖代谢关键酶;乳酸脱氢酶和蛋白酶与后发酵产酸过程并没有必然联系;H⁺-ATPase和β-半乳糖苷酶酶活性较弱是引起菌株KLDS1.1006和KLDS1.1011后酸化程度弱的根本原因。      

大豆异黄酮降解液中雌马酚纯化工艺

为从大豆异黄酮降解液中分离纯化雌马酚,以雌马酚的含量为指标,确定聚酰胺树脂为吸附剂纯化雌马酚。通过单因素试验和正交试验,确定最佳吸附条件为粗提液中雌马酚质量浓度2.40μg/mL、pH5、吸附时间6h,得雌马酚吸附率45.36%,最佳解吸条件为乙醇溶液体积分数80%、乙醇溶液用量45mL、乙醇溶液流速0.5mL/min,得解吸率60%。     

不同处理对Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus LB细胞膜脂肪酸的影响

研究了pH值为6.0(温度为32,37,42和42℃),pH值为5.0和5.5五种培养条件、两个不同生长阶段对Lb.delbrueckii subsp.BulgaricusLB细胞膜脂肪酸组成的影响,以及冷冻干燥过程中细胞膜脂肪酸组成的变化。实验菌株Lb.LB中主要检测到8种脂肪酸。不同处理条件下Lb.LB细胞膜脂肪酸种类一样,但质量分数存在差异。C12:0和C19cyc9质量分数差异最大,变化范围分别为0.86%~2.16%和4.03%~7.51%。冷冻干燥过程中Lb.LB细胞膜中各脂肪酸质量分数变化甚微。     

德氏乳杆菌保加利亚亚种耐酸机制

德氏乳杆菌保加利亚亚种是最具经济价值的乳酸菌之一,其耐酸能力是影响其发酵性能和发挥益生功效的关键因素。本文就该菌的耐酸能力调节进行阐述。     

德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原的表达及抗体制备

利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便用于Western blot分析.首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,利用大肠杆菌pQE 40原核表达系统表达重组atpA抗原,镍柱亲和层析纯化表达蛋白后,常规免疫两只新西兰长耳白兔.利用ELISA检测兔血清的效价来制备多克隆抗体,然后用Protein A纯化抗体.最后得到的atpA抗体进行Western blot检测验证抗体的特异性.结果表明,两只新西兰长耳白兔的血清效价分别为1∶20000和1∶80000;Western blot检测表明,制备的抗体能够与H+-AT-Pase蛋白进行特异性的结合.本研究成功的在大肠杆菌中表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种的atpA蛋白,并利用其制备了效价较高的多克隆抗体,该抗体可作为一抗用于Western blot分析.     

保加利亚乳杆菌LJJ自溶的影响因素分析

考察了不同生长阶段的保加利亚乳杆菌LJJ在不同温度及酸度环境中的自溶度变化,不同浓度SDS和Triton X-100对菌体自溶度和溶菌酶活性的影响,并采用扫描电镜观察菌体自溶中的形态变化,以确定LJJ自溶的最适条件并初步探讨溶菌酶在自溶中的作用。结果表明,处于对数生长期的LJJ菌体最易发生自溶。LJJ自溶度随环境温度(4⁵0℃)的升高,温育时间的延长而相应增大。LJJ自溶的最适温度为50℃,最适pH值范围为6.050℃)的升高,温育时间的延长而相应增大。LJJ自溶的最适温度为50℃,最适pH值范围为6.0⁸.0。0.50 g/L SDS对LJJ自溶和溶菌酶的抑制率分别为99.6%和97.4%。1.00 g/L Triton X-100分别将LJJ的自溶度和溶菌酶活性提升了20.7%和39.5%。扫描电镜观察表明,自溶细胞与正常细胞相比,细胞壁出现孔洞,细胞完整性遭到破坏而0.50 g/L SDS可抑制LJJ细胞的破坏。因此,环境pH、温度、温育时间、SDS浓度、Triton X-100浓度及菌体生长阶段可通过溶菌酶活性的作用显著影响LJJ的自溶,为调控乳酸菌自溶提供了初步理论基础。     

利用德氏乳杆菌全酶液水解牛乳酪蛋白

采用响应面法优化超声破碎工艺获取乳酸菌的全酶液,探讨超声破碎功率、超声破碎时间以及溶菌酶的添加量对超声破碎的影响,对获取的全酶液进行水解脱脂乳及酪蛋白的实验。结果表明：随着超声破碎功率的加大,超声破碎时间的增加,所得酶活力值均呈现先增长后下降的趋势,分析所得的回归方程确定最佳工艺修正参数为：超声破碎仪设定功率71%,超声破碎仪设定时间7.5 min,体系中溶菌酶的添加量290 μL/30 mL菌液。在此条件下获取的全酶液水解脱脂乳及酪蛋白显示,超声破碎的过程对酶活力有较大损失,分开处理其胞内和胞外酶液,水解脱脂乳和酪蛋白所获得游离氨基氮的含量分别提高了223.86%和324.11%,高效液相色谱分析结果也证明全酶液水解所得多肽含量及肽段大小多样性均有所提高。