不同对虾中多酚氧化酶的提取比较及在虾体的分布研究

用丙酮法和匀浆浸提法分别对南美白对虾和中华管鞭虾进行多酚氧化酶的提取,结果表明,在同样的提取条件下,中华管鞭虾的酶活大于南美白对虾,匀浆浸提法提取的酶活比丙酮法高1.5倍;同时对中华管鞭虾的提取条件料液比、缓冲液pH、浸提时间、水浴温度做了研究,通过正交实验得到当料液比1∶4,缓冲液pH8,浸提时间3h,水浴温度45℃条件下提取的酶具有最大的活性;进一步研究中华管鞭虾的多酚氧化酶在虾体中的分布情况,得出虾头部位多酚氧化酶含量较高,虾尾和虾身含量较低。     

甘蔗汁多酚氧化酶的提取研究

以磷酸盐缓冲液匀浆浸提法提取混合甘蔗汁多酚氧化酶(PPO),探讨缓冲液p H值、表面活性剂添加量和聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)添加量对甘蔗汁PPO提取效果的影响。结果表明,以邻苯二酚为底物时,获得甘蔗汁PPO的酶活性最适测定波长是230 nm。磷酸盐缓冲液提取甘蔗汁PPO最适p H值为6.2;在磷酸盐缓冲溶液中PVPP最适添加量为2%,提取甘蔗汁PPO的比活性最高。在缓冲液中加入表面活性剂Tween 80和Triton X-100时,提取甘蔗汁PPO的比活性较低。     

小麦多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质研究

为了减少多酚氧化酶(PPO)对产品所带来的负面影响,对从苏北红麦中提取的PPO粗提物进行分离纯化。经硫酸铵沉淀、DEAE阴离子交换层析和Superdex 200凝胶过滤层析,最终得到电泳纯化后只有一条条带的PPO,并对该纯化后的PPO进行酶学性质研究。试验结果为:纯化后PPO总酶活回收率为7.03%,纯化倍数22.35,比酶活为373.44 U/mg,电泳分析表明其相对分子质量约为30 000。测得其最适反应p H为6.5,最适反应温度为37℃;金属离子影响的研究表明,K~+、Na~+对其活性基本无影响,Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)略有激活作用,Zn~(2+)、Cu2+激活作用较强;小麦PPO对邻苯二酚的K_m值为6.90 mmol/L,对焦性没食子酸(三酚类)、邻苯二酚(二酚类)底物亲和性较强,对单酚类(苯酚、愈创木酚)、二酚类(对苯二酚、间苯二酚)底物亲和性很低。     

4-HR与抗坏血酸对中华管鞭虾多酚氧化酶的抑制动力学模拟分析

研究无硫复合抑制剂主要作用成分4-己基间苯二酚（4-hexylresorcinol,4-HR）、抗坏血酸对中华管鞭虾多酚氧化酶（polyphenoloxidase,PPO）活性的抑制作用,并从抑制剂化学结构及动力学模型出发分析推断其抑制机理。结果表明,4-HR、抗坏血酸均能抑制PPO活力,且对酶促反应有延滞作用,两者半抑制浓度分别为0.072、2.02?mmol/L,对中华管鞭虾PPO的抑制作用都表现为竞争性抑制;化学动力学模拟分析显示4-HR、抗坏血酸均可与PPO双铜活性中心结合,其中4-HR可生成一种高稳定的多酚氧化酶络合物,持续有效地消耗PPO。4-HR、抗坏血酸均能有效抑制中华管鞭虾PPO酶促反应,其中4-HR抑制效果更显著。本实验为无硫复合抑制剂在海水虾捕捞与加工过程中的应用推广提供理论依据。     

中华管鞭虾多酚氧化酶的分离制备

对中华管鞭虾中多酚氧化酶(PPO)的提取分离及其影响因素进行研究,讨论了新鲜管鞭虾的保藏温度、提取方法、浸提时间、缓冲液pH值、料液比和超声波提取等单因素影响,在此基础上采用正交法对各因素进一步优化。结果表明:在室温状态下,使用溶液浸提法,最佳时间为8h,最佳料液比为1:2,缓冲液最适pH值为8,超声时间为20min。     

蓝莓中多酚氧化酶的酶学特性

为分析蓝莓中多酚氧化酶的酶学特性,本文对影响蓝莓多酚氧化酶(PPO)的酶活力的主要因素:p H、温度、金属离子、抑制剂及热稳定性进行了研究。结果表明:蓝莓中PPO最适p H为6.5,最适温度为30℃,Ca~(2+)和Mn~(2+)对蓝莓PPO有抑制作用,Cu~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(3+)对蓝莓PPO有激活作用。柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸及亚硫酸氢钠能抑制PPO酶活,但柠檬酸抑制效果较差。热稳定性实验结果表明:蓝莓果PPO耐热性较差,高温短时可显著抑制PPO酶活性。     

大蒜多酚氧化酶的酶学性质及其在热加工中的变化

采用丙酮粉法提取大蒜中的多酚氧化酶(PPO),并对其酶学特性进行研究。结果表明,大蒜多酚氧化酶最适反应温度为40℃、最适反应pH值为4.0和7.0。邻苯二酚是大蒜PPO的最适底物。动力学实验表明大蒜PPO的米氏常数K_m 470 mmol/L、最大反应速率V_(max) 666.67 U/min。在10 mmol/L时,Cu~(2+)对PPO活性有明显抑制作用,Ca~(2+)和Mg~(2+)对PPO活性有轻微促进作用;Mn~(2+)对PPO活性有明显促进作用。在低浓度时,草酸对大蒜PPO的抑制效果大于L-半胱氨酸和柠檬酸亚锡二钠,高浓度时与后两者相当。热加工结果表明,在75℃、85%湿度条件下,大蒜PPO酶活保留时间较长。     

甘蔗多酚氧化酶的提取与应用试验

研究甘蔗多酚氧化酶(PPO)的提取及应用条件.实验得出甘蔗PPO提取的最佳工艺条件:甘蔗冷藏温度4℃,磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液的pH6.2,聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)的添加浓度2%,提取液与物料液比例为1.0.甘蔗原汁经抽提、离心、分级盐析、透析后制得部分纯化的PP0酶液,纯化倍数为2.51,酶活力回收率为34.9%;以儿茶酚为底物,甘蔗PPO的最大吸收波长为410nm.通过提前预灰并提高预灰pH值至大于7.5,可有效减缓蔗汁的酶促褐变,从生产源头上减少色素的形成.     

莲子多酚氧化酶的分离与纯化

由多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)导致的酶促褐变严重影响莲子的外观。本研究旨在探讨莲子PPO的提取纯化方法,为研究其蛋白结构、进一步探究莲子褐变机理提供理论依据。以酶活力和酶比活力为指标,对比了提取PPO的四种方法,发现匀浆吸附后丙酮沉淀法提取莲子PPO可获得较高的酶比活力,达289.04 U/mg;采用单因素实验对该提取方法进行优化,得最佳提取参数为:料液比1∶5、提取时间2 h、p H=7、含2%PVPP和0.8%Triton X-100提取溶液,优化后PPO粗酶液酶比活力为294.40 U/mg;采用DEAE Sepharose Fast FLow阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶柱层析对粗酶液进行纯化,得到分子量大约为58 ku莲子PPO,酶比活力为7926.68 U/mg,纯化倍数为26.92,回收率为38.48%。     

温度、pH及金属离子对丹东对虾消化酶活性影响

以丹东对虾为原料,从肌肉及消化腺中提取消化酶(蛋白酶和淀粉酶),研究其酶学性质。结果表明:(1)丹东对虾肌肉中蛋白酶最适温度为50℃,最适pH为8,反应激活剂为Mg~(2+)、Ca~(2+)和Mn~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+);(2)消化腺中蛋白酶最适温度为50℃,最适pH为9,EDTA对其有抑制作用,反应激活剂为Ca~(2+)和Mn~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+);(3)丹东对虾肌肉中淀粉酶最适温度为30℃,最适p H为7,反应激活剂为Mn~(2+),在浓度为20 mmol/L时,激活作用最大,抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+);(4)消化腺中淀粉酶最适温度为30℃,最适pH为8,EDTA对消化腺淀粉酶有抑制作用,反应激活剂为Mn~(2+)和Ca~(2+),抑制剂为Pb~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(2+)。     

蛋白质氧化对中华管鞭虾肌肉品质特性的影响

以经羟自由基氧化体系处理过的中华管鞭虾为对象,考察其由于蛋白质氧化而引起的虾仁品质特性变化,并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳观察蛋白质氧化后的降解情况。采用羟自由基氧化体系（包含FeCl3浓度0.01 mmol/L和抗坏血酸浓度0.1 mmol/L,过氧化氢浓度为0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L）分别氧化1、3、5 h和7 h。结果显示,经自由基氧化体系氧化后的中华管鞭虾品质特性发生了改变,表现在pH值升高,水分活度和水分含量先上升后下降,咀嚼性、弹性和a*值下降,且随着氧化剂浓度的增加及氧化时间的延长,L*值和挥发性盐基氮都呈上升趋势（P＜0.05）。与新鲜虾仁相比,氧化后虾仁纤维组织之间的空隙扩大,发生了断裂,排列也变得松散。不同氧化剂浓度处理后的蛋白质降解情况也有显著差异,蛋白质发生了不同程度的聚集和降解。由此可以得出,自由基氧化影响了中华管鞭虾品质特性以及蛋白质的降解程度。本研究结果为中华管鞭虾生产加工过程中蛋白氧化控制提供了一定的参考。     

Investigation of the activity of cathepsin B in red shrimp (Solenocera crassicornis) and its relation to the quality of muscle proteins during chilled and frozen storage

Cathepsin B is a cysteine protease that has important effects on the quality of muscle products. In this study, the changes of cathepsin B activity and its relation to muscle proteins were investigated in intact and beheaded shrimp during chilled and frozen storage. The obtained results indicated that the water holding capacity (WHC), shear force, hardness, and myofibrillar protein (MP) content all significantly decreased in both the intact and beheaded shrimp samples with increasing storage period (p < 0.05). Specifically, beheading shrimp exhibited much more stable characteristics than intact shrimp samples during both chilled and frozen storage. The enzyme activity results suggested that cold temperature and storage induced the release of cathepsin B from the lysosomes to the mitochondria, sarcoplasm, and myofibrils in the muscle tissues. Furthermore, SDS-PAGE and transmission electron microscopy (TEM) analysis revealed that beheading the shrimp greatly inhibited the dissociation of shrimp muscle proteins during storage. The current findings suggest that cathepsin B located in the head of shrimp was likely transferred to the muscle through the first abdominal segment during storage, accelerating the dissociation of the muscle proteins. Therefore, beheading the shrimp was conducive to prolonging the shelf-life of stored shrimp products.     

羟自由基氧化对中华管鞭虾肌肉功能特性的影响

目的 以中华管鞭虾为研究对象,通过对其进行羟自由基氧化,研究其肌肉功能特性的变化。方法 将中华管鞭虾在羟自由基体系中（包含FeCl3浓度0.01 mmol/L,抗坏血酸浓度0.1 mmol/L,过氧化氢浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L）用同浓度的过氧化氢作用1、3、5和7 h,考察羟自由基氧化对肌原纤维蛋白Ca2+-ATPase活性、浊度、乳化活性（EAI）和乳化稳定性（ESI）、总巯基和活性巯基、羰基含量指标以及对肌肉硫代巴比妥酸(TBA)的影响。结果 随着氧化程度的增加,肌原纤维蛋白Ca2+-ATPase活性、EAI和ESI、总巯基和活性巯基含量不断下降,而浊度、羰基含量呈现升高的趋势;虾肌肉中TBA显著上升,脂肪氧化加剧。结论 羟自由基氧化体系显著劣化中华管鞭虾肌肉功能特性,本研究为控制中华管鞭虾加工贮藏过程中的蛋白质和脂质氧化、品质劣变提供理论参考。     

即食中华管鞭虾贮藏品质变化及其货架期研究

目的 探究贮藏期间,不同温度下(4、15、25和37℃)即食中华管鞭虾肌肉品质变化情况,并构建即食中华管鞭虾的货架期模型。方法 以即食中华管鞭虾为研究对象,测定不同温度下虾仁肌肉中挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen, TVB-N)含量、菌落总数、硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)值、色差、pH、持水力和感官评分变化,以虾仁肌肉TVB-N构建货架期模型。结果 随着贮藏时间的延长,不同温度下贮藏的即食中华管鞭虾肌肉TVB-N含量、菌落总数、TBA值和b*值均呈上升趋势;肌肉pH呈先下降后上升趋势;肌肉L*值和感官评分呈下降趋势,且贮藏温度越高,即食中华管鞭虾虾仁肌肉品质劣化越快。此外,受贮藏温度影响,4和15℃贮藏的虾仁肌肉持水力呈先上升后下降的趋势,而25和37℃贮藏虾仁肌肉持水力呈下降趋势。采用Pearson相关系数分析,确定了TVB-N含量和菌落总数为虾仁肌肉品质变化的关键性因子,其变化特征符合一级动力学模型。Arrhenius方程结果显示,虾仁TVB-N值的拟合精度更高,用TVB-N值建立货架期模型结果更为准确。通过模型验证发现,以虾仁肌肉TVB-N含量建立的货架期模型能够较为准确的预测其货架期。结论 贮藏温度升高会加速即食中华管鞭虾品质的劣化。4~37℃贮藏时,以虾仁肌肉TVB-N含量建立的货架期模型可较为准确地预测其货架期。     

基于组织蛋白酶催化的不冻液冻结中华管鞭虾中肌原纤维蛋白氧化分析

对比分析利用不冻液(-18℃和-30℃)冻结后冻藏与直接置于冰箱(-18℃和-30℃)冻结后冻藏的中华管鞭虾肌原纤维蛋白氧化指标变化以及组织蛋白酶B、H、L活性变化,通过肌原纤维微结构观察,分析酶活性对肌原纤维蛋白水解产生的作用,并探讨其与肌组织结构的相关性。结果表明：采用-18℃和-30℃不冻液冻结的中华管鞭虾的盐溶性蛋白含量(92.7 mg/g和97.8 mg/g)均明显高于-18℃和-30℃冰箱缓冻组(72.40 mg/g和77.90 mg/g);-30℃不冻液组的表面疏水性最低(400.6μg);两种冻结方式下-30℃组Ca²⁺-ATPase活性均高于-18℃组;总巯基含量变化趋势与Ca²⁺-ATPase活性变化趋势一致。冻藏前期(0～60 d),低温不冻液冻藏能较好地抑制中华管鞭虾组织蛋白酶活性,使其蛋白结构保持良好;冻藏后期(60～120 d),其对于酶活性的抑制作用减弱。综合以上结果,在一定冻藏期内,不冻液冻结比冰箱冻结能够更好减弱冻藏过程中中华管鞭虾的肌原纤维蛋白的氧化和组织蛋白酶活性,且不冻液的冻结温度越低,冻结速率越高,组...     

空间电场-微冻贮藏过程中红虾蛋白质特性的变化

目的 研究空间电场-微冻贮藏过程中红虾蛋白特性的变化。方法 将新鲜红虾置于装有2 kV-50 Hz、3 kV-50 Hz电场装置的冰箱中微冻（-5℃）贮藏,以虾肉pH、挥发性盐基氮含量、肌原纤维蛋白含量、羰基含量、Ca2+-ATPase活性、总巯基含量和溴酚蓝结合量作为品质指标,并对鲜度与蛋白质特性指标进行相关性分析。结果 贮藏25 d时2 kV组、3 kV组和对照组三组虾肉TVB-N分别由6.72 mg/100g上升至23.75 mg/100g,21.98和31.36 mg/100g;蛋白质含量相对于初始值分别减少了37.30%、32.72%和46.89%;羰基含量分别由1.25 nmol/mg prot上升为7.86 nmol/mg prot,7.04 nmol/mg prot和9.24 nmol/mg prot;Ca2+-ATPase活性分别下降了64.10%,50%和69.23%;总巯基含量分别减少了52.40%,48.30%和58.78%;溴酚蓝结合量分别由7.77 μg增加至14.53 μg,13.12 μg和17.03 μg。结论 施加空间电场能够有效维持红虾在微冻贮藏过程中的鲜度品质和蛋白质特性稳定性,其中3 kV电场的保鲜效果更佳。     

褪黑素对小鼠抗氧化作用的影响

目的:研究小鼠在受到脂多糖(LPS)刺激时,褪黑素的抗氧化作用,并探讨其可能机制。方法:用脂多糖建立氧化应激模型,检测血清、小肠、肝脏和脾组织中的ROS含量,肝脏、脾组织中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化。结果:在LPS刺激后的4h和16h,褪黑素均能降低血清、小肠、肝脏、脾组织中的ROS含量,提升肝脏和脾组织中的GSH-PX、SOD活性,降低MDA含量。结论:褪黑素有助于增强氧化应激小鼠的抗氧化能力,降低组织中NO含量与NO合成酶活性,增加了SOD、GSH-PX等抗氧化酶的活性,保护机体免受氧化损伤。     

Determination of the variability of both hydrophilic and lipophilic toxins in endemic wild bivalves and carnivorous gastropods from the Southern part of Chile

The aim of this study was to analyse and determine the composition of paralytic shellfish poisoning (PSP) toxins and lipophilic toxins in the Region of Aysén, Chile, in wild endemic mussels (Mytilus chilensis, Venus antiqua, Aulacomya ater, Choromytilus chorus, Tagelus dombeii and Gari solida) and in two endemic carnivorous molluscs species (Concholepas concholepas and Argobuccinum ranelliforme). PSP-toxin contents were determined by using HPLC with fluorescence detection, while lipophilic toxins were determined by using LC-MS/MS. Mean concentrations for the total of PSP toxins were in the range 55–2505 μg saxitoxin-equivalent/100 g. The two most contaminated samples for PSP toxicity were bivalve Gari solida and carnivorous Argobuccinum ranelliforme with 2505 ± 101 and 1850 ± 137 μg saxitoxin-equivalent/100 g, respectively (p < 0.05). The lipophilic toxins identified were okadaic acid, dinophysistoxin-1 (DTX-1), azaspiracid-1 (AZA-1), pectenotoxin-2 (PTX-2) and yessotoxins (YTX). All analysed molluscs contained lipophilic toxins at levels ranging from 56 ± 4.8 to 156.1 ± 8.2 μg of okadaic acid-equivalent/kg shellfish together with YTX at levels ranging from 1.0 ± 0.1 to 18 ± 0.9 μg of YTX-equivalent/kg shellfish and AZA at levels ranging from 3.6 ± 0.2 to 31 ± 2.1 μg of AZA-equivalent/kg shellfish. Furthermore, different bivalves and gastropods differ in their capacity of retention of lipophilic toxins, as shown by the determination of their respective lipophilic toxins levels. In all the evaluated species, the presence of lipophilic toxins associated with biotransformation in molluscs and carnivorous gastropods was not identified, in contrast to the identification of PSP toxins, where the profiles identified in the different species are directly related to biotransformation processes. Thus, this study provides evidence that the concentration of toxins in the food intake of the evaluated species (Bivalvia and Gastropoda class) determines the degree of bioaccumulation and biotransformation they will thereafter exhibit.