一株酸性脂肪酶高产菌株的筛选与鉴定

目的分离筛选出一株酸性脂肪酶高产菌株并对其进行鉴定。方法通过溴甲酚紫酸碱指示剂进行平板初筛,甘油三丁酸酯透明圈法以及摇瓶培养复筛,筛选获得了一株酸性脂肪酶产生菌株;利用平板透明圈法、橄榄油乳化液滴定法和对硝基苯酚比色法3种方法对所筛菌株进行酶活力测定。结果分离获得一株具有高产酸性脂肪酶活力的菌株,将其命名为菌株WY19。经过检测,其粗酶活力达到11000 U/L。通过对菌株WY19进行形态学鉴定、生理生化实验以及分子生物学鉴定,结合系统发育树分析,确定本研究获得的酸性脂肪酶产生菌为克雷伯氏菌。结论菌株WY19所产脂肪酶为酸性脂肪酶,在食品、医药、油脂加工等领域方面具有较好的应用前景。     

脂肪酶产生菌的筛选及不同保藏方法对其产酶活性的影响

从校园食堂附近富含油脂的污泥中分离筛选具有高效脂肪酶活性的菌株。首先以3种不同的平板初筛培养基筛选脂肪酶产生菌,获得的菌株经摇瓶复筛后选出其中一株传代性质稳定,产酶活性高的脂肪酶产生菌,研究其产酶条件及酶学性质,然后分析了斜面法、液体石蜡法、甘油液态冷冻法对此株脂肪酶产生菌的存活率和酶活的影响。实验结果表明,3种平板初筛培养基均能筛选到脂肪酶产生菌,吐温-80琼脂平板培养基筛选效果最佳。经过复筛选定的一株脂肪酶产生菌,最佳产酶条件:发酵液初始p H值9.0,37.0℃培养48 h。酶最适作用温度为38℃,最适作用p H值为9.0,并在p H8.0~10.0之间稳定。液体石蜡法及甘油液态冷冻法在中短期可以使菌种保持较高的存活率和酶活力,为进一步的应用研究奠定了基础。     

产酯化脂肪酶微生物的筛选研究

用罗丹明B透明圈法从广东、广西和海南采集的土样中筛选到658株透明圈比较明显的菌株,经发酵测定脂肪酶酶活,获得15株脂肪酶活力超过7U/mL的菌株,采用固定化脂肪酶粗酶制剂的方法进行酯化能力的测定,得到产生酯化脂肪酶能力较强的3个菌株GX-20、GX-35和GX-53,它们的酯化率分别为18.12%、20.65%和19.72%。其中的GX-35菌株经16SrDNA基因序列分析鉴定为Burkholderia cepacia。     

柚苷酶产生菌的分离筛选及鉴定

利用柚苷酶平板透明圈筛选方法,加大透明层与未分解层的颜色对比,提高菌种筛选的效率,改进柚苷酶产生菌的选育模型。筛选出1株柚苷酶生产菌株A13。对该菌株进行摇瓶发酵,测定酶活力达到365.31U/mL。通过对该菌株形态特征、培养特征的观察,对照《真菌鉴定手册》,初步判定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)。     

湘西腊肉中高产脂肪酶真菌的筛选

为从肉源中筛选高产脂肪酶菌株,本研究以湘西陈年腊肉为样品,采用稀释平板计数法对湘西腊肉中的微生物菌群进行分析,利用产脂肪菌株在罗丹明B和三丁酸甘油酯筛选平板上形成透明圈的方法进行初筛,采用(p-NPP)比色法比较对初筛菌株脂肪酶活力进行复筛,进一步选出并确定样品中高产脂肪酶菌株,并通过形态学和分子生物学相结合的方法鉴定复筛菌株。结果表明:样品湘西陈年腊肉有丰富的微生物群落,是产脂肪酶菌株的良好菌源,其主要微生物群落有酵母菌、霉菌和微球菌;样品腊肉中微生物经罗丹明B和三丁酸甘油酯平板初筛后得M18号菌株,其透明圈最大为2.5cm,C2号菌株次之,透明圈为1.3cm;复筛得酶活力最高的菌株为M18,酶活达11.0U/ml,与初筛结果一致,经构建其16s rDNA区域系统发育树,鉴定M18号目的菌株为草酸青霉。     

米曲霉诱变选育中初筛的一种简便方法

酿造酱油应用菌米曲霉的诱变育种工作中,筛选高产菌如全部采用蛋白酶活力测定则工作量很大,迫切需要有一种简单的初筛手段。目前我们所采用的以透明圈作为初筛标准,认为是一个较为理想的方法。透明圈方法运用于蛋白酶菌株的初筛国内外均有一些报道,其原理是菌株的蛋白水解酶系分解了酪素合成培养基中的酪蛋白而产生出透明圈。酶活越高,透明圈越大,因     

脂肪酶产生菌产酶条件的研究

对脂肪酶产生菌进行了筛选,并对优势菌株杆菌的产酶条件进行研究.研究包括培养基组成(碳源、氮源、无机盐)、初始pH值等影响因素.通过正交试验,获得了较为优化的脂肪酶产酶条件,获得的最大酶活为68.58 U/mL.     

ε-聚赖氨酸高产菌的新型筛选模型

建立了一种简单、快速筛选ε-聚赖氨酸高产菌的新模型.结果表明,在筛选培养基中添加终浓度为0.0015％的中性红,ε-聚赖氨酸产生菌周围形成明显的色素透明圈,且色素透明圈圈径大小和ε-聚赖氨酸含量呈正性相关,从而可以通过色素透明圈径大小简单快速地筛选出ε-聚赖氨酸高产菌株.综合来看,ε-聚赖氨酸高产菌的新型筛选模型简单直观而且经济高效,可大大减小筛选工作量,提高筛选效率,为ε-聚赖氨酸产生菌株和高产菌株的筛选工作提供了方便.     

海洋细菌产低温碱性蛋酶菌株的筛选研究

采集连云港黄海海域的各类海鱼和贝类及海水等样品，采用富集培养、干酪素培养基及水解酪蛋白试验分离产蛋白酶的菌株。结果表明从海鱼、海贝等样品中能得到产低温碱性蛋白酶的菌株；干酪素分离培养基是较好的筛选培养基，产酶菌株都能在干酪素培养基上产生透明圈；水解酪蛋白试验可对菌株的产酶情况进行定性研究，酶活较高的菌株都能产生较大的水解圈。干酪素分离培养基配合水解酪蛋白试验进行产低温碱性蛋白酶菌株的筛选，可以提高筛选效率。     

肉类嫩化酶弹性蛋白酶优良微生物菌种筛选研究

应用微生物菌种分离筛选技术,在25种动物副产品牛肚(牛瓣胃)中分离筛选得到了生长速度快,产弹性蛋白酶稳定,且酶活力较高的菌株.系统地研究了菌株的形态学特征、生长特性及其生理生化性质,研究结果表明,该菌为红色的革兰氏阴性杆菌,在显微镜下观察,该菌体中等大小,菌体长为2.53um,宽为0.64um,两端钝园,无芽孢,单个排列无规律;在蛋白胨培养基上生长良好,菌落黄色,圆形,凸起;在弹性蛋白平板上生长形成明显的蛋白水解透明圈,经鉴定该菌株为假单胞杆菌(Pseudomonas sp SWU).     

酯化型红曲菌复合诱变选育及其固态发酵条件优化

为了获得高酯化力红曲菌,采用紫外线结合常压室温等离子体复合诱变对实验室保藏的红曲菌进行诱变育种,并通过单因素实验及响应面分析法优化其固态发酵条件,提高菌株产酯化酶能力。出发菌株N3经过复合诱变,采用透明圈法初筛及酯化酶活力测定法复筛,得到1株产酯化酶活力高且遗传稳定性较好的诱变菌株Z14,其酶活稳定至34.44 U/g,较出发菌株提高了74%。通过响应面分析法得到优化的固态发酵条件为:接种量为5%、含水量为70%、培养时间为7 d。在该条件下Z14产酯化酶活力达到38.53 U/g,较出发菌株提高了95%。     

繁茂膜海绵中产甲壳素酶菌株筛选的研究

通过富集培养和初筛，从繁茂膜海绵中分离到108株产甲壳素酶菌株；其中有12株菌产生的透明圈比较明显。结合平板法和酶活力比较法，筛选出1株高酶活力的优良菌株H7，酶活力为0．5415／mL。通过16SrRNA同源序列分析和系统发育树分析，鉴定菌株H7为Pseudoaheromonas属，和P．ganghwensis/DQ011614相似性达到98％。     

白酒发酵高糖化性能霉菌的筛选及鉴定

以不同香型大曲为筛选源分离出霉菌96株,在透明圈法初筛、糖化力测定法复筛的基础上,以清香大曲和糖化酶为对照,模拟白酒酒精发酵过程,将酿酒酵母与霉菌纯种曲混合发酵,以出酒率作为评判指标,从中筛选出1株优质霉菌Rh-07。其纯种曲糖化力、发酵结束后培养基中酒精浓度、出酒率分别为2657.00 U/g、15.40 mL/100 g、42.73%;且以Rh-07纯种曲为糖化剂,其发酵速度基本与对照大曲一致。采用传统微生物学和现代分子生物学的方法对Rh-07进行了鉴定,初步确定为Rhizopus oryzae。同时发现,霉菌糖化酶活力大小与其在酒精发酵中的作用不成严格的正相关关系;在评价霉菌在白酒酒精发酵过程中作用时,不能单纯以糖化酶作为评价指标,应以原料与霉菌作用后的整个物系对酒精发酵作用作为评价指标。     

环麦芽糊精葡聚糖转移酶高活性的土壤微生物菌种筛选

根据环麦芽糊精葡聚糖转移酶(CGTase)催化淀粉和糊精生成环状糊精(CD),环状糊精可以吸附筛选培养基中的刚果红和甲基橙使菌落周围形成透明圈,且透明圈越大,透明度越好,CGTase的转糖基活性越高的酶催化特性,设计筛选模版,进行产酶菌株分离筛选。经初筛、复筛得到了YS-19和YS-40的2株转糖基活性较高CGTase菌种,酶活分别为2.90U/mL和3.15U/mL。     

苎麻微生物脱胶菌株筛选及脱胶效果评价

为筛选并获得苎麻微生物脱胶菌种,将富集培养与稀释涂布相结合,从随机选取的几种腐烂苎麻样品中获得微生物纯培养物38株,以形态学观察、生理生化测定和16S rRNA聚类分析对细菌进行鉴定。利用透明圈法筛选得到脱胶能力相对较高的微生物9株,其中细菌6株,分别隶属于芽孢杆菌属（Bacillus）1株、不动杆菌属（Acinetobacter）2株,类芽孢杆菌属（Paenibacillus）2株,伯克霍尔德氏菌属（Burkholderia）1株,丝状真菌3株。以残胶率为标准,比较6株细菌综合脱胶能力,其中枯草杆菌（Bacillus subtilis）脱胶能力最强,残胶率为13.82 %。     

清香型白酒乳酸利用菌的筛选及鉴定

利用透明圈法,从清香型白酒大曲中筛选出两株可以产生透明圈的菌株B4-1和B36-1。通过对两株菌株进行16S rRNA基因测序鉴定,并构建系统发育树,结合生理生化试验结果,最终确定两菌株均为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。单一碳源发酵及葡萄糖-乳酸混合发酵试验结果表明,在葡萄糖存在的情况下菌株B4-1和B36-1的乳酸利用量分别为1.91 g/L和1.26 g/L,符合乳酸利用菌的筛选特征。因此两株菌均可以作为清香型白酒的乳酸利用菌。     

中温大曲产淀粉酶菌株的筛选鉴定及培养条件优化

为获得高产淀粉酶菌株,丰富淀粉酶生产菌株资源,该研究以中温大曲为样品,利用淀粉水解圈法初筛、摇瓶发酵复筛得到高产淀粉酶菌株,结合菌落形态观察、革兰氏染色和16S r RNA同源序列分析对其进行菌种鉴定,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验确定其产淀粉酶的最佳培养条件。结果表明,共分离筛选得到6株产淀粉酶菌株,其中一株产淀粉酶活最高的菌株（编号为DQ47）被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,其最佳培养条件为：可溶性淀粉60 g/L,酵母粉37 g/L,发酵温度39℃,装液量85 m L/250 m L,转速175 r/min,初始p H值6,接种量3%。在此优化条件下,淀粉酶活力为8 158.23 U/m L,是优化前的14.75倍。     

一株α-淀粉酶产生菌的分离、鉴定及产酶条件研究

为获得具有高产α-淀粉酶能力的菌株,从不同土壤环境中分离产酶菌株,对其进行分类鉴定和产酶条件研究。通过透明圈法初筛、3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法复筛分离得到产α-淀粉酶能力较强的菌株,利用形态学和生理生化反应特征,结合16S rDNA序列分析,对其进行分类鉴定;通过单因素试验和正交试验确定该菌株的最佳产酶条件。结果表明:从土壤环境中分离得到一株产α-淀粉酶菌株MF04,初步鉴定为蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus),其初始产酶活力为32.5 U/mL;产酶条件试验结果显示其最适培养温度为37℃,初始pH值为6.0,培养时间为72 h,经优化后液体发酵得到的粗酶液酶活力为60.2 U/mL,是优化前的85.2%。因此分离得到菌株MF04在工业生产中具备潜在开发价值。     

糖化黑曲霉复壮方法的研究

采用透明圈法对糖化黑曲霉AS3.324和AS3.4309的复壮方法进行研究,选出了三种适合的筛选培养基,确定了具体的操作步骤.复壮后菌株的麸曲糖化酶活力分别比退化的出发菌株的麸曲糖化酶活力提高45%和44%.