重组大肠杆菌产L-阿拉伯糖异构酶的条件优化

L-阿拉伯糖异构酶可以将D-半乳糖催化为D-塔格糖,为提高E.coli BL21(DE3)/pET-30a(+)-araA产L-阿拉伯糖异构酶的能力,分别优化了该基因工程菌发酵基础培养基中的碳源、氮源和诱导时机、诱导温度、诱导剂浓度和诱导时长。结果表明,采用优化后的发酵基础培养基和诱导产酶条件生产的L-阿拉伯糖异构酶的酶活力可达到80.1 U/mL,是优化前的1.8倍。L-阿拉伯糖异构酶与90 g/L的D-半乳糖在55℃的水浴振荡器中反应12 h, D-半乳糖的转化率可达到44.2%。     

Lactobacillus brevis D-tag1产L-阿拉伯糖异构酶的条件优化

为实现D-塔格糖的安全生产,筛选获得了一株产L-阿拉伯糖异构酶的短乳杆菌Lactobacillus brevis D-tag1.以菌体生长量和产酶量为依据,对碳源、氮源、发酵温度和发酵初始pH进行优化,提高其产酶能力.结果表明,采用优化后的发酵培养条件,在初始pH 6.0、发酵温度37℃、发酵时间24 h的最适条件下,...     

间苯二酚法测定D-塔格糖含量

采用间苯二酚法检测D-塔格糖含量,建立并优化了测定条件。结果表明,D-塔格糖浓度在0~60μg/mL呈良好的线性关系,相关系数为0.999 9,最低检出限为6.66μg/mL,加标回收率为100.18%,相对标准偏差2.20%。     

广谱碳源产油酵母菌的筛选及培养基优化

以葡萄糖、木糖和阿拉伯糖及三者混合糖为碳源,对8株酵母菌的菌体油脂积累能力进行初步测定,并对PR61菌株产油条件进行优化.实验发现：当以D-葡萄糖为唯一碳源时,所有菌株油脂含量都超过20%（质量分数,以下同）;利用D-木糖发酵时,有6株菌株油脂含量超过了20%;利用L-阿拉伯糖发酵时,各菌株油脂含量均较葡萄糖和木糖低;上述菌株利用混合糖（m（D-葡萄糖）∶m（D-木糖）∶m（L-阿拉伯糖）=40∶20∶8）发酵时,有5株菌株油脂含量超过30%,且部分菌株利用混合糖的能力超过了葡萄糖.研究表明：菌株PR61利用各种碳源时的生物量和油脂产量均较高.采用U10（108）均匀设计对其产油条件进行优化,结果如下（g/L）：碳源（m（D-葡萄糖）∶m（D-木糖）=2∶1）质量浓度130,硫酸氨质量浓度2,酵母粉质量浓度1,七水硫酸镁质量浓度0.1,磷酸二氢钾质量浓度2,碳氮比131.在上述条件下菌株PR61的油脂产量可达4.336 g/L.     

南方红豆杉叶中活性多糖的分离与纯化

采用水提醇沉方法从南方红豆杉枝叶中得到红豆杉总多糖，经DEAE-Sepharose FF阴离子交换色谱分离得到3种酸性多糖，分别命名为红豆杉多糖-1(PTM-1)、红豆杉多糖-2(PTM-3)和红豆杉多糖-3（PTM-3），条件为：色谱柱先用pH值为8.5的HCl-Tris缓冲液平衡，然后用0.1、 0.3、 0.5、0.7 和 0.9 mol/L的NaCl溶液阶跃洗脱.PTM-3进一步采用凝胶过滤色谱纯化、脱盐和冻干后，用高压凝胶渗透色谱、紫外、红外和薄层色谱分析其结构, 发现PTM-3不含蛋白和核酸，重均相对分子质量Mw为12.3 kD，单糖组成含有L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-鼠李糖，以β-(1,3)糖苷键连接.     

D-阿拉伯糖醇高产酵母菌株的快速筛选方法

为高效获得D-阿拉伯糖醇高产菌株,以利用低能N+离子注入技术对乳酸克鲁维酵母进行诱变而获得的突变菌株为筛选对象,建立了高糖培养基初筛,以及纸色谱法和高效液相色谱法组合使用而进行复筛的高通量筛选方法.本研究对纸色谱法的展开体系、点样量和显色方法进行了优化,研究确定出了最优展开剂为:正丁醇∶吡啶∶水=14∶3∶3,点样量为1.5μL,显色剂为50%硝酸银丙酮溶液和50%氢氧化钠乙醇溶液.依据纸层析显色斑点的大小,从中筛选出了高产菌株,进而用高效液相色谱法对纸色谱法的筛选结果进行了验证.试验结果表明,该方法可以快速地从大批量突变菌株中,筛选出D-阿拉伯糖醇产量高达88.23g/L的遗传稳定性强的D-阿拉伯糖高产菌株.     

L-核糖的合成

以L-阿拉伯糖为原料,经过钼酸盐类催化剂发生C-2立体异构化反应,生成以Mo为中心的络合物,C-1的酰基与苯胺反应得到糖胺,糖胺在苯甲酸条件下分解得到L-核糖,收率为30%,用1 H NMR和元素分析对产物进行了表征.     

L-核糖的合成

以L-阿拉伯糖为原料,经过钼酸盐类催化剂发生C-2立体异构化反应,生成以M0为中心的络合物,C-1的酰基与苯胺反应得到糖胺,糖胺在苯甲酸条件下分解得到L-核糖,收率为30％,用^1H NMR和元素分析对产物进行了表征．     

1株桃果实采后病原真菌的鉴定以及碳源代谢指纹图谱分析

从采后贮藏过程中发病的八月脆桃果实（Amygdalus persica cv.Bayuecui）中分离到1株真菌菌株074#.通过对病原菌形态学观察以及核糖体ITS rDNA序列分析,证明菌株074#为灰葡萄孢霉菌（Botrytis elliptica）.致病性试验结果表明,桃果实为灰葡萄孢霉菌的寄主.通过Biolog FFMicroPlate分析该病原菌对95种碳源的利用能力,结果表明,Botrytis elliptica代谢指纹图谱为最适碳源包括D-果糖、蔗糖、L-苹果酸、琥珀酸、D-葡萄糖酸、L-天门冬氨酸、L-丝氨酸、腺苷、5＇-磷酸腺苷等26种,可利用碳源14种,不可利用碳源55种.     

L-苏氨酸的生产方法及研究进展

介绍了L-苏氨酸的理化性质、用途、生产方法,重点介绍了发酵法生产L-苏氨酸的生产现状.依据代谢调控理论综述了L-苏氨酸生物合成调控机制及研究实例,并对L-苏氨酸市场前景进行了展望.     

BAPTA-AM抗D-GalN致L-O2细胞损伤作用

探讨了BAPTA-AM对D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导的人胚肝细胞(L-02细胞)损伤的影响及其作用机制.加入不同浓度的BAPTA-AM 1h后,用D-GalN诱导L-02损伤,通过倒置光学显微镜观察,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)的活性和丙二醛(MDA)的含量,MTT法检测细胞活力,Annexin V-EGFP荧光染色统计细胞凋亡率,Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM测定细胞内游离钙浓度等方法,评价BAPTA-AM对D-GalN诱导的L-02细胞损伤的影响.实验表明BAPTA-AM能明显抑制D-GalN引起的L-02细胞培养液中的LDH、ALT、AST和MDA水平的升高,能抑制L-02细胞的凋亡和细胞内游离钙浓度的升高,能明显提高L-02细胞活力.而且BAPTA-AM的效价强度是甘利欣的数百倍.     

微生物共轭亚油酸异构酶的生物学研究

在各种共轭亚油酸异构体中,c9,t11-18∶2和t10,c12-18∶2这两种天然不饱和脂肪酸异构体被认为具有生物活性,如抗癌、抗动脉粥样硬化、减肥、促进生长、缓和免疫反应副作用等,因而在医药、食品、保健品、化妆品等领域有着广阔的应用前景.一些微生物能产生共轭亚油酸异构酶(Conjugated linoleic acid isomerase,EC 5.2.1.5),该酶又能专一性地催化亚油酸转化为活性共轭亚油酸异构体的反应,因此近几年来倍受关注,利用生物合成法生产共轭亚油酸已成为该领域未来的发展趋势.然而目前,共轭亚油酸异构酶的物种分布及进化关系、在细胞中的生物学功能、结构域、催化反应机理等尚未得到完整的阐释,利用基因工程技术大量高效地表达有活性的重组酶也尚未得到很好的解决.本文在前人对共轭亚油酸异构酶进行的多方面研究的基础上,对近年来共轭亚油酸异构酶的分布、生物学作用、酶的催化反应机理、酶基因的克隆表达等生物学方面的研究进展进行了综述,并利用生物信息学方法对已知的共轭亚油酸异构酶序列进行了初步分析.     

氨基酸前体对酿酒酵母生产谷胱甘肽影响的研究

通过摇瓶培养,研究了L-半胱氨酸、甘氨酸、L-谷氨酸3种氨基酸前体不同浓度及不同添加时间对突变株YF(ZnCl2r,Ethr)生产谷胱甘肽的影响.结果表明L-半胱氨酸能显著促进胞内谷胱甘肽的积累--当发酵12 h时,添加浓度为2 mmol/L的L-半胱氨酸,谷胱甘肽浓度提高了102％,而甘氨酸和L-谷氨酸对酵母发酵生产谷胱甘肽的影响不大.     

我国不同产地党参药材中糖类成分比较分析

为了解我国不同产地、品种党参中主要糖类成分的差异,解决现有党参质量控制指标缺乏的现状,建立我国主要党参产区(甘肃、贵州、山西、湖北、四川)的不同品种党参(党参、素花党参、川党参)糖类成分质量控制方法,包括多糖含量、单糖组成以及5种单糖和低聚糖的HPLC-ELSD定量分析方法,并制定党参相应质量控制标准。根据35批党参药材多糖平均含量,建议党参多糖质量分数控制标准为≥13.5%。单糖组成需含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,5种单糖和低聚糖(D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖和蔗果四糖)成分质量分数不得低于15.92%。     

齐墩果酸糖苷衍生物的合成及抗肿瘤活性的研究

分别以D-葡萄糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、D-木糖4个单糖为原料合成4个三氯乙酰亚胺酯糖苷供体A_1~A_4,同时将齐墩果酸(OA)C-28位羧基与溴苄反应生成OA0,进一步以A_1~A_4和OA0为原料合成4个新型齐墩果酸糖苷衍生物Ⅰa~Ⅰd,目标化合物结构经MS、~1H-NMR确证.采用MTT法,选用高表达人癌细胞Hela和BGC-823对它们进行初步的体外抗肿瘤活性研究.结果表明,所测化合物对两种肿瘤细胞的抑制活性均强于齐墩果酸,值得进一步研究.     

L—组氨酸产生菌的选育

以谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum)ATCC-13761为出发菌株，经硫酸二乙酯（DES）和亚硝基胍（NTG）诱变处理，D-组氨酸（D-His)、6-氮鸟嘧啶（6-AU）等结构类似物平板和以L-组氨酸（L-His)为惟一氮源平板定向筛选，获得一株L-组氨酸产生菌H-24（D-His^r6-AU^r Hisase^-）。在加有150g/l葡萄糖、35g/L硫酸铵以及10mL/L玉米浆的发酵培养基中发酵72h，产L-组氨酸1.6g/L。     

大枣多糖的单糖组成的高效液相色谱法研究

用高效液相色谱法研究了大枣多糖的单糖组成。大枣中性多糖的组成单糖为：Ｌ－阿拉伯糖、Ｄ－半乳糖和Ｄ－葡萄糖。酸性多糖的组成单糖有：Ｌ－鼠李糖、Ｌ－阿拉伯糖、Ｄ－半乳糖、Ｄ－甘露糖和Ｄ－半乳糖醛酸。     

过量表达苏氨酸脱水酶对谷氨酸棒杆菌合成L–异亮氨酸的影响

考察过量表达解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶对谷氨酸棒杆菌发酵生产L-异亮氨酸的影响.将解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶基因ilvA（F383V）连接大肠杆菌/谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pXMJ19,过量表达于L-异亮氨酸生产菌株Corynebacterium glutamicum YILW.经5 L发酵罐分批补料发酵产酸实验,与出发菌株C.glutamicum YILW相比,耗糖高峰期滞后,L-异亮氨酸产量增加了10.3%,副产物L-蛋氨酸、L-赖氨酸含量分别降低了33.3%2、6.5%,发酵液中没有L-苏氨酸的累积,乳酸的累积量增加了41.7%.对发酵稳定期的代谢流分布研究表明,过量表达解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶使HMP途径流量增加了31.7%,L-异亮氨酸生物合成途径的代谢流提高了8.5%.     

罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶的生物信息学分析

综合利用多种生物信息学工具对罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶基因及其启动子区进行了定位,分析了4种乳酸菌亚油酸异构酶基因的上游调控区,发现了主要保守位点.分析证明罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶具有2个二硫键,1个糖基化位点,多个磷酸化位点,无信号肽序列,但在25(26)~42位存在跨膜区.证明罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶的密码子偏好性与大肠杆菌和酿酒酵母的密码子偏好性存在差异,初步分析了该基因在这些宿主菌中表达时可能存在的问题,并提出了改造方案.     

L-苯丙氨酸的制备与应用前景

简要综述L-苯丙氨酸的制备及在食品医药领域的应用,指出L-苯丙氨酸的生产是一项前景广阔的产业.