一种富集即食肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法

研究一种能够有效富集即食肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法,用于提高肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测灵敏度和检出限。通过对样品预处理缓冲液种类和浓度、样品过滤条件、微孔滤膜材质和孔径、滤膜洗脱液种类及浓度的选择,确定即食肉制品富集单核细胞增生李斯特氏菌的条件。通过敏感性和特异性试验,与国标方法的对比验证试验,确定其准确性和灵敏性。结果显示样品预处理缓冲液选择李氏增菌肉汤LB3和Hanks的混合液(1:1),2℃低温条件下静置60 min后,于4℃10000 r/min离心10 min去除脂肪和大分子蛋白质,采用Φ50 mm 0.8μm聚醚PES微孔滤膜抽滤富集目标菌于Φ55 mm 50 mL具塞平底玻璃杯中,滤膜用10m L洗脱液(5 mL Hanks+5 mL LB3)洗脱即得到样品富集待测液。采用该方法用于即食肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测效果最佳。建立了最佳的富集即食肉制品单核细胞增生李斯特氏菌的方法,提高了方法的检出限和灵敏度。     

单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品的 制备与验证

目的研究制备适用于验证、评价实验室或检测机构检测能力的单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的能力验证冷冻干燥样品。方法对目标菌与干扰菌进行10倍梯度稀释,对不同稀释度的菌液进行菌落计数得到菌含量,确定单核细胞增生李斯特氏菌与干扰菌的添加量;对保护剂和预冻条件进行筛选优化,制备单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品。冻干样品采用西林瓶真空包装,4℃条件下冷藏保存,随机取样检测评估样品均匀性,并在210 d期间内定期抽样检测不同贮存温度下的冻干样品,检测评估样品的稳定性。结果每个冷冻干燥阳性样品最终添加目标菌单增李斯特菌和干扰菌分别为10~2 CFU/m L和10~4 CFU/m L;每个阴性样品添加干扰菌10~4 CFU/m L;最佳冻干保护剂的组合为海藻糖3%,脱脂奶粉8%,谷氨酸钠1.5%。检测结果显示PT冻干样品具有较好的均匀性和稳定性。结论建立的单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品制备方法与评估程序均为有效,适用于验证与评价实验室或检查机构检测能力,满足能力验证活动的要求。     

PMA与ddPCR结合检测单核细胞增生李斯特氏菌

将叠氮溴化丙锭(PMA)与微滴数字PCR(dd PCR)技术相结合,检测热灭活背景下单核细胞增生李斯特氏菌活菌。结果表明,PMA终浓度为5.0μg/m L、曝光时间为15 min时,可以有效抑制10~5 CFU/m L的单核细胞增生李斯特氏菌死菌DNA的PCR扩增,不抑制单核细胞增生李斯特氏菌活菌DNA扩增的PMA最高浓度是10.0μg/m L。利用PMA处理死活菌混合液时,PMA-dd PCR可以在死菌存在的条件下,定量检测活菌,降低了"假阳性"结果的出现。检测结果显示:PMA-dd PCR灵敏度是2.0 copy/20μL。利用PMA-dd PCR检测人工污染的鳕鱼样品,最低可检出10~2 CFU/m L的单核细胞增生李斯特氏菌。结果证明PMA-dd PCR方法的精确度、稳定性良好。     

工厂中环境和海产品加工前后的微生物学检验

检测了2个海产品加工厂的环境及加工前后海产品样品的菌落总数(个/cm2,个/g或个/mL)、李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌数(每100cm2,100g或100mL样品的MPN数),其结果如下:2个工厂对应样品的菌落总数及其分布规律相接近,但李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的出现率和数量却相差很大;单核细胞增生李氏菌数都低于或远低于李斯特氏菌,且单核细胞增生李氏菌与李斯特氏菌的数量和分布呈正相关;加工后海产品中的李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌可能来自原料和加工过程;环境中李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌主要来自原料.     

气体二氧化氯对苹果表面细菌杀菌规律研究

本实验研究了气体二氧化氯杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌以及腐生酵母菌四种苹果表面的危险致病菌的杀菌规律.在杀菌时间5min、杀菌温度25℃条件下,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌和腐生酵母菌杀菌达到99.99%的杀菌率,所需的气体二氧化氯的浓度分别为23、21、6和11mg/L.在杀菌气体二氧化氯浓度10mg/L、杀菌温度25℃时,四种菌杀菌时间分别达到7、8、2和6.5min时,杀菌率均超过99.99%.在实验范围内,作用温度对杀菌效果影响不大.     

噬菌体对虾仁中单核细胞增生李斯特菌的抑制效果

以虾仁为研究对象,通过人为模拟在虾仁中接种单核细胞增生李斯特菌后,再用噬菌体ListexTMP100在常温(20℃)、冷藏(4℃、0℃)和冷冻(-18℃)环境下进行处理,分析虾仁中该菌的抑制效果,单核细胞增生李斯特菌采用平板计数法进行计数。结果表明:噬菌体浓度大于2×107PFU/mL时,能有效杀灭虾仁中单核细胞增生李斯特菌(P<0.05);该浓度在20℃下作用虾仁1 h,便能降低1.50 Log10CFU/g(死亡率为99%以上)的单核细胞增生李斯特菌;在0℃和4℃,作用24 h下,单核细胞增生李斯特菌的死亡率达到99.9%;在-18℃下贮藏30d,单核细胞增生李斯特菌在第1天下降了1.38Log10CFU/g。这些结果表明,噬菌体ListexTMP100对虾仁中的单核细胞增生李斯特菌具有明显的抑制效果,可作为一种理想的生物杀菌剂用于水产食品中。     

基于适配体识别的侧向层析法快速检测单核细胞增生李斯特氏菌

构建了一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌的适配体试纸条。以单核细胞增生李斯特氏菌核酸适配体为识别分子,纳米金为显色信号,基于双适配体夹心原理,制备了用于检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的适配体试纸条,并对制备条件如适配体浓度、胶体金溶液pH值、纳米金-适配体复合物和链霉亲和素-纳米金复合物的包被量等进行了优化。结果显示,在优化条件下,该试纸条对单核细胞增生李斯特氏菌的裸眼可视检测限为10~3cfu/mL,且具有很高特异性。可实现样品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速定性检测。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌的污染状况分析

目的:对单核细胞增生李斯特氏菌在几类食品中的污染状况展开分析和探讨。方法:对从某地区各生鲜超市、集贸市场随机抽取的428份6类食品样品进行单核细胞增生李斯特氏菌检测,分析单核细胞增生李斯特氏菌的污染状况。结果:6类食品共428份检测样品的总单核细胞增生李斯特氏菌检出率为5.37%(23/428),凉拌菜、速冻米面制品、冷冻饮品、肉及肉制品、即食熟制米面制品、动物性水产及相关制品的单核细胞增生李斯特氏菌检出率分别6.38%(3/47)、0.00%(0/29)、3.23%(1/31)、11.61%(18/155)、0.78%(1/128)与0.00%(0/38)。结论:肉及肉制品类、凉拌菜类、冷冻饮品类、即食熟制米面制品类食品均有受到单核细胞增生李斯特氏菌污染的可能,尤其是肉及肉制品类食品,在相关监管部门积极强化对各类食品的监管力度的同时,广大民众亦应养成科学的饮食习惯,以降低食源性疾病的发生概率。     

发酵火腿中单核细胞增生李斯特氏菌限量探讨与建议

在长期的发酵过程中,火腿表层的水分活度小于0.92;发酵火腿成品的水分活度也小于0.92。在此条件下,单核细胞增生李斯特氏菌不能生长,但仍能存活较长时间。发酵火腿成品无需冷藏即可贮存。目前的增菌培养检测法不适用于发酵火腿中单核细胞增生李斯特氏菌的检测。本文建议发酵火腿中单核细胞增生李斯特氏菌的限量为100CFU/g;或者,不将单核细胞增生李斯特氏菌列为发酵火腿中需要检测的项目。     

微滴数字PCR定量检测乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌

选取单核细胞增生李斯特氏菌iap基因为靶基因,利用微滴数字PCR(ddPCR)技术对乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌进行定量检测。实验结果表明,本方法能够对含菌量在5×10~3～5×10~6CFU/mL之间的巴氏乳样品进行准确定量检测,检测下限和定量检测下限分别为5×10~2CFU/mL和5×10~3CFU/mL,检测的准确性和灵敏性均优于qPCR检测。     

纳米氧化镁对单核细胞增生李斯特菌的抑制作用

研究37℃条件下不同浓度纳米和非纳米氧化镁对单核细胞增生李斯特菌的抑制作用,以及低温(4和-18℃)对纳米氧化镁抑菌作用的影响,并通过扫描电子显微镜(SEM)观察了37℃条件下纳米氧化镁处理前后单核细胞增生李斯特菌细胞形态的变化。结果表明,37℃条件下,纳米氧化镁对单核细胞增生李斯特菌的生长具有明显的抑制作用,且抑菌效果随着纳米氧化镁浓度的增加而增大。在中性缓冲溶液中纳米氧化镁仍具有抑菌效果,但同浓度的非纳米氧化镁以及与纳米氧化镁同pH的碱性条件对单核细胞增生李斯特菌均无显著的抑制作用,因而推测纳米氧化镁的纳米材料特性是其抑菌的主要因素。在低温条件下,对照组单核细胞增生李斯特菌在4℃条件下能缓慢生长,-18℃条件下呈现下降趋势,添加纳米氧化镁后单核细胞增生李斯特菌的生长均受到显著抑制。37℃条件下的扫描电镜结果显示,1.5 mg/m L纳米氧化镁处理后单核细胞增生李斯特菌的菌体有所变长。     

鸡肉中单核细胞增生李斯特氏菌的分离与鉴定

对从长春地区一家最大的肉鸡屠宰加工厂扦取的152个冻鸡肉样品(44份去皮胸肉,44份带皮胸肉,40份胸碎肉和24份鸡翅)进行了单核细胞增生李斯特氏菌分析,对分离菌株用AP1 Listeria试剂盒及其它方法进行了鉴定。经检验,152个样品中有16个样品(10．5％)为单核细胞增生李斯特氏菌阳性,另有87个(57．2％)为L．innocua,L．welschimeri和L．gray阳性。在16个(10．5％)单核细胞增生李斯特氏菌阳性样品中,去皮胸肉样品3个(6．8％),带皮胸肉样品5个(11．4％),胸碎肉样品6个(15．0％),翅肉样品2个(6．3％)。为了比较OXA和PALCAM两种选择培养基的单核细胞增生李斯特氏菌的分离效果,在进行细菌分离时同时选用了这两种培养基,用OXA从152个样品的16个(10．5％)中分离出单核细胞增生李斯特氏菌,用PALCAM从152个样品的12个(7．9％)中分离出单核细胞增生李斯特氏菌,表明在OXA和PALCAM这两种分离培养基中,OXA的分离效果更好些。     

奶粉伴侣中微生物污染特点分析

目的:了解婴幼儿经常食用的奶粉伴侣中微生物的污染状况。方法:2016年在我国8个省(直辖市)采集奶粉伴侣864份,按照食品安全国家标准方法检测菌落总数、大肠菌群、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌。结果:1.04%(9/864)的奶粉伴侣菌落总数10~4cfu/g,0.12%(1/864)大肠菌群10~2cfu/g,未检出单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌,但1份样品检出阪崎肠杆菌。结论:奶粉伴侣微生物污染水平较低。     

LAMP检测单核细胞增生性李斯特氏菌的研究

单核细胞增生性李斯特氏菌是一种能够引起人畜共患疾病的食源性致病菌.为了鉴定该菌,以单核细胞增生性李斯特氏菌的李氏溶血素基因(Hly)为靶基因,通过环介导等温扩增技术(LAMP)对该基因进行扩增.共对12株菌进行了LAMP检测,结果表明:单核细胞增生性李斯特氏菌为阳性,其它菌株均为阴性.采用LAMP对单核细胞增生性李斯特氏菌纯培养进行检测,其方法的灵敏度为7.3×101cfu/mL;而利用LAMP检测人工污染的鸡肉中的单核细胞增生性李斯特氏菌,检出限为8.9×101cfu/g.     

预包装熟肉制品加工环境李斯特菌监控方案的构建

单核细胞增生李斯特氏菌作为一种食源性致病菌,该菌可存在于各类食品中,尤其是即食类食品,也可在食品加工环境包括生产设备、用具、地板和排水沟等中长期生存。虽然发病率相对于其他食源性致病菌较低,但危害较大。因此,对加工环境中的单核细胞增生李斯特氏菌的污染控制尤为重要。加工环境中李斯特菌监控作为一种预警和验证手段,可以在终产品检出单核细胞增生李斯特氏菌之前做好预防措施。本文汇总分析了多个加工肉制品企业环境监测的经验,构建出肉制品加工过程环境中李斯特菌监控基础方案,包括较为详细的区域划分、采样分区、采样及检测方法、预防措施和纠正措施等,形成适合自身企业的环境李斯特菌监控方案,为肉制品加工行业卫生规范细化提供一定参考依据。     

海红果多糖水提醇沉工艺及其抑菌活性研究

通过单因素和正交试验对海红果水提醇沉工艺条件进行优化,并采用双层琼脂打孔扩散法对海红果多糖的抑菌作用进行研究。结果表明:料液比、提取温度对海红果多糖含量的影响最大,最佳提取条件为料液比1∶25(g∶mL)、提取温度90℃、提取时间60 min、乙醇体积分数80%,此条件下海红果粗多糖的提取量达105.15mg/g;海红果粗多糖对蜡样芽孢杆菌GMCC1.1686、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌均有抑制作用,其中对沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌最小抑菌质量浓度均为25 mg/mL,对蜡样芽孢杆菌CGMCC1.1686的最小抑菌质量浓度为50 mg/mL。     

食品检测用单核细胞增生李斯特氏菌标准物质的研制

目的建立食品检测用单核细胞增生李斯特氏菌标准物质的制备方法,研制均匀稳定的标准物质。方法利用冷冻干燥法制备103 CFU/样品的标准物质,参照CNAS-GL 29《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》,抽取20件样品,利用平板计数法测定标准物质的均匀性,并对结果进行统计分析;将样品分别置于-20、25、37℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输稳定性进行评价。组织5家实验室进行协同标定,使用30种即食熟肉制品作为基质,并按照国标法检验标物物质的适用性。结果采用单因素方差分析进行均匀性检验, F=0.922,符合标准物质的要求。标准物质在-20℃保藏28 d, 25、37℃保藏7 d,样品仍然稳定。经5家实验室协同标定,样品含量均在103 CFU/样品的水平;标准物质加入到30种即食熟肉制品中,均可以检出单核细胞增生李斯特氏菌。结论本研究所制备的单核细胞增生李斯特氏菌标准物质的均匀性、储藏稳定性和运输稳定性均符合要求,适用性良好,可用于食品检测实验室的质量控制和食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测结果的评价。     

2022年上海市生禽肉和调理肉制品中主要食源性致病菌监测

目的 分析上海市市售生禽肉和调理肉制品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌及小肠结肠炎耶尔森氏菌等食源性致病菌的污染情况。方法 2022年1～8月,从上海市农贸市场、超市、餐饮店等环节采集样品348份,其中生禽肉240份,调理肉制品108份。按照食品安全国家标准分别对样品中的沙门菌、单核细胞增生李斯特菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测。采用VITEK2全自动微生物鉴定仪对可疑菌株进行生化鉴定,并对沙门菌分离株进行血清学分型。结果 生禽肉中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌的检出率分别为28.33%(68/240)、5.00%(12/240)和0.83%(2/240);调理肉制品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌的检出率分别为5.56%(6/108)、28.70%(31/108)和1.85%(2/108);血清学分型结果显示,生禽肉中68株沙门菌分布于14种不同血清型,其中科瓦利斯沙门菌（35.29%）、鼠伤寒沙门菌（16.18%）和肠炎沙门菌（13.24%）占比较高,调理肉制品中6株沙门菌分布于3种不同血清型,分别为肠炎沙门菌（66.67%）、肯塔基沙门菌（16...     

单核细胞增生李斯特菌在典型食品接触表面的存活建模研究

单核细胞增生李斯特菌在食品接触表面的长期存活,可导致其在食品中暴露可能性升高,增加引发严重食源性疾病的风险。本文研究了无营养冷藏（4 ℃）和室温（25 ℃）条件下,单核细胞增生李斯特菌在7种典型食品接触材质表面的存活情况。同时采用失活模型Bigelow模型进行拟合,便于理解其存活动力学。结果发现,单核细胞增生李斯特菌在木材质表面上的存活时间较短,但在其他材质表面可存活46 h以上。显著性分析表明,除玻璃和ABS塑料材质外,单核细胞增生李斯特菌在4 ℃条件下较25 ℃条件下存活量更高,表明冷藏环境有助于其长期存活。同时,单核细胞增生李斯特菌在玻璃和聚丙烯表面的存活能力相对较强。因此,为了更准确地推断单核细胞增生李斯特菌在食品链中导致危害发生的可能性,应纳入对其在不同材质及不同温度组合环境下存活能力的考量。     

一种快速检测乳与乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法

研究一种可以快速富集乳与乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法,用于缩短乳与乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测时间,提高方法检出限。通过对样品缓冲液种类及浓度的选择,微孔滤膜材质和孔径的选择,样品中大分子干扰物质方式的去除方法选择,洗脱液种类及浓度的选择,敏感性和特异性试验,确定乳与乳制品快速富集单核细胞增生李斯特氏菌条件,并将该方法与国标方法进行对比验证实验,确定其准确性和灵敏性。结果表明,用5 mL洗脱液(7 mL 0.02 mol/L PBS+3 mL李氏增菌肉汤LB_3),得到样品富集待测液,用于乳与乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测效果最佳。建立了最佳的乳与乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测方法,使单核细胞增生李斯特氏菌检测时间从4～7 d缩短至60 min,敏感性和特异性较好。