防脱片剂APES制备铜网支持膜的新方法

当前电镜制样普遍采用的支持膜为Formvar膜,但Formvar膜制备过程较为复杂,制作要求比较高。制作的支持膜较薄时,容易被电子束击破或样品发生漂移;较厚时降低了样品的分辨率;制膜时如果湿度过大,膜上会出现许多小“白点”而无法使用。在实际工作中,我们把免疫组化技术工作中的防脱片剂APES(3-amtio propyhri ethoxy silane)应用于铜网支持膜的制备,实验结果表明,样品捞在涂有APES的铜网上,镜下观察,样品无漂移,分辨率好。经过两     

十二指肠上皮细胞的亚显微结构

本文以健康家兔十二指肠为实验材料,在超薄切片透射电镜观察的基础上,采用冷冻蚀刻技术对十二指肠上皮细胞的亚显微结构及其膜表面特化结构,进行观察分析。实验方法取新鲜材料,经4％戊二醛和1％锇酸双固定后,为了提高样品的反差和较好地显示细胞的膜结构,将样品放入1％单宁酸浸泡60分钟,尔后再用丙酮逐级脱水,EPON812包埋,超薄切片后送H—500电镜观察。冷冻蚀刻样品,系用HFZ—1型冷冻蚀刻装置,按常规操作步骤制备复型膜。     

冷冻电镜含水切片技术观察胰岛β细胞的三维超微结构

冷冻电镜含水切片技术(CEMOVIS)作为冷冻厚生物样品制备技术，对高压冷冻的样品直接进行冷冻切片，能够获得完全含水状态的生物样品的超微结构，更好地反映出细胞接近其生理条件的真实状态。本文应用冷冻含水切片技术结合冷冻电子断层扫描和三维重构技术观察到了小鼠胰岛β细胞内细胞器的高分辨超微结构。     

精索静脉曲张不育者精子的超薄切片和冷冻蚀刻的电镜观察

精索静脉曲张影响精子发生和精液质量,导致男性不育。为探讨不育的原因,本实验采用超薄切片和冷冻蚀刻复型膜的电镜观察。材料和方法:两例青年男性不育者,年龄为29岁,31岁,婚后三年不育,有双侧中度精索静脉曲张。超薄切片制备:2.5％二醛,1％锇酸双固定,酒精脱水,环氧树脂812包埋,超薄切片厚度500埃左右,铀、铅双染色。冷冻蚀刻复型膜制备:新鲜精液固定于2.5％戊二醛,经30％甘油生理盐水处理12小时,BAF—400D高真空冷冻蚀刻仪制成复型膜,电镜观察。观察结果:超薄切片:精索静脉曲张患者精液内可见头帽期和顶体期精子细胞,且形态异常,如顶体扩张,细胞核染色质松散,核内出现大空腔。发育成熟的精子头畸形,中段线粒体排列紊乱等。冷冻蚀刻复型膜:患者     

电子辐照导致(Bi,Pb)_2Sr_2Ca_2Cu_3O_y产生的结构变化

在2212和2223体系的超导氧化物中,普遍存在叠加在平均结构上的无公度调制波。对Bi系超导体,普遍认为Bi_2O_2双层上的O分布对调制结构的形成起着重要的作用。为进一步理解其结构调制现象的物理本质及Bi_2O_2层中O原子的作用,本文利用原位TEM实验,观察Bi_(1.85)Pb_(0.15)Sr_2Ca_2Cu_3O_y样品在电子辐照下的结构变化。TEM样品采用研磨法制备,将解理的片状晶体捞在Cu网支撑的C膜上进行TEM原位观察。所用电镜为H-800,加速电压为200kV。首先在1μm束斑下拍摄样品[001]晶带的选区电子衍射花样(EDP),然后改用5μm电子束斑,并且增加第二聚光镜C_2电流,使光束聚焦在样品上,以增加辐照强度,并按顺序拍摄同一区域在不     

电镜超薄切片批量染色的载网固定装置改进与应用

电镜图像对生物组织、细胞形态结构的研究具有重要作用,高质量的超薄切片染色在透射电镜样本制备中起着关键作用.本文介绍了针对目前用于批量染色的载网固定方式存在的超薄切片甚至载网脱落等问题,对载网固定装置和技术进行了改进,从而明显地提高了批量染色的工作质量和效率.     

生物样品的冷冻超薄切片术

当生物材料在样品制备过程中需减少化学固定剂对样品中蛋白活性的影响或减少可溶性元素流失时,可采用快速冷冻固定法和冷冻超薄切片。切片在含水状态下或经冷冻干燥后,用电镜观察,这样既能显示生物细胞在体内的形态,又使细胞内各种活性得以保存,是一种值得推广的电镜技术。我们采用新鲜活组织快速冷冻固定和冷冻超薄切片,经冷冻干燥后在透射电镜下对亚细胞结构进行形态观察和微小区域内的元素定性、定量分析,本文总结了初步结果和经验。     

肺巨噬细胞在某些实验病理情况下超微结构变化的电镜观察

本文以健康家兔为实验对象,分别采用夹闭肠系膜上动脉所造成的动脉闭塞性(SMAO)休克、自耳静脉注入油酸所复制的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)为实验模型,应用“洗肺”技术采取肺巨噬细胞,进行超薄切片和冷冻蚀刻电镜观察;分析比较了肺巨噬细胞在上述实验性疾病时的超微结构变化,探讨了肺巨噬细胞与某些病理过程的关系。一、材料与方法:将健康成年家兔,分为正常对照组,SMAO休克组和ARDS组。各组动物均以适量温生理盐水缓冲液(约50毫升),经气管插管反复灌洗肺组织(六次),再将洗出液三次离心沉淀(500克,8分钟/次),制得5×10~6/毫升肺巨噬细胞混悬液。此后,样品分别经2.5～4.0％戊二醛固定,以618树脂包埋制备超薄切片;经30％甘油生理盐水防冻处理,用日立FHZ—1型冷冻蚀刻装置制得冷冻复型膜。样品送H—500电镜观察,加速电压75KV。     

微波照射技术用于电镜植物样品的制备

电镜已作为研究生物科学的基本检测工具。但由于超薄切片制样周期长,影响检测速度。自八十年代末,在国内开始应用微波照射样品制备技术,但在农业科学中,有关植物样品的微波制备方法,未见报导。作者尝试了微波照射技术应用于电镜植物样品制备的全过程中。采用烟草花叶病毒感染的心叶烟叶片,在制备的每一步用不同时间、不同功率进行处理,切片经电镜观察与常规制样相比较,较好地保存了细胞结构,同时也大大缩短了制样时间。     

高压冷冻-冷冻替代技术在神经组织超微结构中的应用

采用高压冷冻-冷冻替代技术对小鼠和线虫这两种模式生物的神经组织进行了样品制备、超薄切片和电镜观察,并在取材方式上进行了摸索,旨在比较化学固定法(CF)、高压冷冻固定法(HPF)和化学-高压冷冻联合固定法(CF+ HPF)三种不同方式对神经组织超微结构的影响,促进高压冷冻-冷冻替代技术在神经生物学中的应用.透射电镜观察结果显示:与传统的化学固定相比,高压冷冻固定对神经组织样品具有较好的优势,能够减少化学处理所产生的人工假象;另一方面,对于不同动物的神经组织而言,所适用的固定方式也不相同,鼠脑适用于活检枪(biopsy gun)取样后直接进行HPF固定,所得结构比较完整,神经组织微观结构清晰.而在高压冷冻之前选用CF进行预固定,能加大样品结构保存的完整性,但在膜的细腻程度上不如直接进行高压冷冻制样的结果.线虫样品由于存在较厚的体壁保护,它更适于直接进行HPF处理,从而缩短了固定前的滞留时间,可有效保留腹部神经元超微结构.