酒曲中高蛋白酶产生菌筛选及酶学性质研究

利用脱脂牛奶平板法从宋河酒曲中分离得到6株有明显水解圈的蛋白酶产生菌,其中水解圈直径与菌落直径之比最大为8.84,经鉴定为芽孢杆菌。以此菌种通过发酵培养提取出粗酶液,然后对该蛋白酶的酶学性质进行研究。试验表明,该蛋白酶的最适酶活力温度为40℃,在40℃～50℃热稳定性较好;该蛋白酶最适pH值为11.0,在pH值为9.0～11.0稳定性较好,在pH6.0条件下酶活力很快丧失;金属离子Fe2+对该蛋白酶有激活作用,Cu2+、Zn2+和Pb+有抑制作用,Mg2+、Ca2+和Li+对该蛋白酶酶活性影响不大。     

石屏臭豆腐来源的高产蛋白酶菌株筛选及酶学特性研究

目的:通过石屏臭豆腐产蛋白酶优势菌株发酵获得高产蛋白酶菌种资源。方法:采用单因素和响应面试验对培养基及发酵条件进行优化;以酪蛋白为底物,利用酶学技术探究了温度、pH、金属离子、有机化学试剂对JX-11菌株蛋白酶活性和稳定性的影响。结果:从石屏臭豆腐中分离1株高产蛋白酶的优势菌JX-11,经鉴定为彭尼普尔金黄杆菌(Chryseobacterium pennipullorum)。JX-11菌株最优产酶条件为温度23.0℃、葡萄糖添加量6.7 g/L、蛋白胨添加量15.0 g/L、pH 6.4,该条件下所产蛋白酶酶活力为(39.16±3.24) U/mL。JX-11菌株产蛋白酶的最适温度为30℃,在10～40℃范围内具有良好的稳定性;最适pH为7.0,在pH 6.0～9.0范围内具有良好的稳定性;Mn²⁺可显著提高JX-11蛋白酶的活性,相对空白组酶活力提升了4.33倍;Zn²⁺、Cu²⁺、K⁺均抑制该酶活性,Na⁺、Mg²⁺、Ca²⁺无显...     

海洋源蛋白酶产生菌筛选及酶学特性的初步研究

从海洋源鱿鱼中筛选高产蛋白酶菌株。通过检测蛋白酶产生水解圈结合蛋白酶活性测定的方法筛选高产蛋白酶菌株,采用PCR技术对筛选菌株进行16S rRNA鉴定,并构建目的菌株的系统发育树,同时研究粗蛋白酶的酶学特性。结果表明:筛选得到的10株产蛋白酶活力较高的菌株,经鉴定分别属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、普罗威登斯菌属(Providencia sp.)和假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。其中SW5菌株产酶活性最高达257.67±2.44 U/mL,为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。该菌株所产粗蛋白酶的酶学特性研究发现,其最适pH为8.0,最适温度为40℃,终离子浓度为1 mmol/L时Mn2+、Ba2+和Ca2+对该蛋白酶活性有较高的激活作用,而Fe~(2+)和Zn~(2+)能明显抑制该蛋白酶活性。     

海洋来源低温果胶酶产生菌筛选、鉴定与酶学性质研究

目的：从海洋底泥样品中筛选能低温降解果胶的新颖菌株,发掘具有潜在产业化价值的果胶酶。方法：以果胶为唯一碳源,利用透明圈法和3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)从大连渤海湾海泥中筛出一株高产果胶酶菌株。对其进行形态学、生理生化特征分析以及16S rDNA序列测定,BLAST同源基因比对后构建系统发育树,并进一步研究其酶学特性。结果：筛选高产果胶酶菌株命名为LY-1,通过16S rDNA序列分析并结合生理生化鉴定确定该菌株为橄榄灰链霉菌(Streptomyces olivogriseus)。菌株LY-1在25℃、180 r/min的条件下培养至24 h时,果胶酶的酶活力为30.56 U/mL。最适酶p H为8.0,最适酶温度为20℃。此外,该酶在60℃孵育2 h仍保持70%以上的酶活性,在pH7.0～9.0范围内稳定性良好,酶活性稳定维持在90%以上。金属离子Cu²⁺、Ba²⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、K⁺、Co²⁺促进该酶活性,Mn²⁺、Zn...     

果胶酶产生菌的筛选鉴定和酶学性质研究

以果胶为唯一碳源,从海南采集的土样中筛选出一株能够利用果胶生长并产生果胶酶的菌株,采用3,5-二硝基水杨酸定糖法测定果胶酶酶活,通过生理、生化特性以及16S rRNA基因序列分析比对对菌株进行鉴定,并对其所产果胶酶的酶学性质进行研究。结果表明,分离筛选出一株果胶酶产生菌,编号为YY01,被鉴定为Bacillus niabensis。菌株YY01所产果胶酶的最适pH值为7.0,最适反应温度为45 ℃;在pH 10.0孵育12 h,仍有52.5%残余酶活力,50 ℃孵育6 h,仍有64%的残余酶活力。结果显示该酶有较好的耐碱性及较高的热稳定性,具有应用于果汁加工和胡椒脱皮的应用前景。     

生姜蛋白酶的分离、纯化及酶学性质研究

从生姜中分离得到具有凝乳活力的生姜蛋白酶,研究了其酶学性质和动力学特性。主要研究结果如下:采用超滤技术分离得到生姜蛋白酶粗酶液,在0⁰.3 mol/L NaCl线性梯度下利用弱阴离子交换树脂将生姜蛋白酶分成具有相同分子质量的A和B两个组分。生姜蛋白酶A和B具有相似的酶学性质和水解k-酪蛋白的亲和性,表明生姜蛋白酶A和B可能是同工酶,可以合并在工业生产中使用。该研究为生姜蛋白酶的工业化应用及姜汁奶的开发提供了重要的理论基础。     

郫县豆瓣曲曲霉的筛选、分子鉴定及其酶学性质的研究

以自然接种的瓣曲为研究对象,应用示踪和基于基质特性组合的菌种筛选技术,筛选出适合其酿造特性的分离株No17.通过形态学观察和26S rDNA、ITS序列的分子生物学鉴定,该分离株为Aspergillus oryzae,命名为A.oryzae SZP17.该菌株的中性蛋白酶和α-淀粉酶的酶学性质研究表明,中性蛋白酶的最适反应温度为40℃,20℃～40℃时比较稳定,最适反应pH值为7.5,耐酸性较强,Cu2+和Mn2+对其具有激活作用,Fe3+和Fe2+对其具有抑制作用.α-淀粉酶的最适反应温度为60℃,低于50℃比较稳定,最适反应pH值为6.0,pH值>7.5时易失活,各种金属离子对其酶活影响较小.     

高温甲壳素降解酶产生菌筛选及其酶学性质研究

采用平板透明圈法,结合摇瓶筛选得到一株高温甲壳素降解酶高产菌芽孢杆菌HU1,其甲壳素降解酶活力达到606U/mL。对其部分酶学性质进行了分析,结果表明:该酶的最适酶解温度为60℃,最适pH为6.5,对GlcNAc-GlcNAc键具有较强的专一性,对CMC、纤维素、可溶性淀粉等无降解活性。一价的金属离子Na+、K+对该酶作用不明显;Mg2+、Zn2+、Ca2+对其有明显的促进作用;而Cu2+、Fe3+则具有显著的抑制作用。此外,酶活力还受DTT及SDS抑制,不受EDTA影响。      

巴西松子中蛋白酶的分离纯化及酶学性质

在单因素试验基础上,通过正交试验研究pH值、提取时间和料液比3个因素对巴西松子中蛋白酶活力的影响,得出巴西松子中蛋白酶的最佳提取缓冲液为pH9.0的硼酸-硼砂缓冲液、提取时间为60min、料液比为1:8(m/V);采用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析分离纯化巴西松子中的一种蛋白酶,结果表明:纯化后蛋白酶比活力提高到了8.61倍,回收率为21.65%。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明:该蛋白酶分子质量为33kD。酶学性质结果表明:该蛋白酶最适pH值为9.0,属碱性蛋白酶;反应的最适温度为50℃;金属离子Mn2+对该蛋白酶活性有强烈的激活作用,而Ca2+、Mg2+和Cu2+对酶活性有抑制作用。     

中性植酸酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质

从土壤中分离到一株高产中性植酸酶的菌株,酶活力达12.52U/mL。对其进行形态、生理、生化、分子生物学鉴定,初步鉴定为放射型根瘤杆菌(Agrobacterium radiobacter)。酶学性质研究结果表明：该酶的最适反应温度为45℃;最适反应pH 值为7.0;65℃处理60min 酶活力保持80% 左右,有一定耐热性;在pH5.5～8.0 之间,稳定性较好;Ba2+ 对酶活力有一定的激活作用,Fe2+、Mg2+、Zn2+ 和Cu2+ 对酶活力均有一定程度的抑制作用,其中Fe2+ 的抑制作用最强。     

鲤鱼组织蛋白酶L的分离纯化与酶学性质研究

对鲤鱼鱼背部白肌中的组织蛋白酶L进行分离纯化并研究了其酶学性质。结果发现,鲤鱼组织蛋白酶L提取液经酸处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose F.F.离子交换层析和SephacrylS-100凝胶过滤层析等步骤后得到部分纯化,纯化倍数为16.39。鲤鱼组织蛋白酶L的最适反应温度和pH值分别为40℃和5.0,在20～50℃和pH 4.5～5.5范围内具有较好的稳定性。     

脂肪酶产生菌的分离筛选及菌株鉴定

以富含油脂的土壤、菜籽等为脂肪酶菌株分离材料,分离得到11株脂肪酶产生菌株;对产酶活力高的菌株进行酶学性质实验,测得其所产酶最适作用pH为7,最适温度为40℃,酶活力为34.55U。在pH为8.5和35℃时酶具有良好的稳定性。采用形态学及rDNA-ITS序列分析法进行鉴定。结果表明,分离、筛选出的性能较理想的产脂肪酶菌株为米曲霉(Aspergillusoryzae)。     

一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF(苯甲基磺酰氟)及DTT(二硫苏糖醇)对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。     

一株高温酸性淀粉酶产生菌的筛选、鉴定及其酶学性质研究

从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的55℃底泥中筛选到1株高温淀粉酶的高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16SrRNA基因序列分析,将其初步鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的一株菌,命名为Bacillus thuringiensis Amy-55。对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃。所产淀粉酶最适酶活温度为75℃,最适反应pH值为5.0。在25℃以下,能保持良好的稳定性,Zn~(2+)和Mn~(2+)对该酶有一定的抑制作用,Ca~(2+)、K~+、Mg~(2+)、Fe~(2+)、Cu~(2+)均对该酶活力起到促进作用,其中Fe~(2+)的促进效果最为明显。     

一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF（苯甲基磺酰氟）及DTT（二硫苏糖醇）对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。      

大豆蛋白酶产生菌的诱变选育及酶学性质研究

从市场下水道中筛选获得一株产大豆蛋白酶的细菌D-16,经初步鉴定属于芽孢杆菌属(Bacillus),该菌的蛋白酶活力为1 164.00 U/mL.通过对初筛菌株进行紫外诱变和HNO2化学诱变,结合筛选,最后得到突变菌株D-16-9,其酶活为6518.40U/mL,酶活力提高了5.60倍,水解大豆蛋白的能力也提高了4.12倍.该酶作用的最适pH为10.5,pH7.0～12.0的范围内较稳定.最适温度为40℃,在60℃以下范围内,该酶具有良好的稳定性.Mg2+酶促反应有明显的促进作用,pb2+和EDTA明显抑制酶活力.     

章鱼肠道产蛋白酶菌的筛选、产酶条件及酶学性质

采用检测水解透明圈和测定蛋白酶活力的方法,从章鱼肠道中分离筛选出一株高产蛋白酶的菌株QDV-3,并对其产酶条件及酶学性质进行研究。结果表明:QDV-3菌株在以果糖为碳源,蛋白胨为氮源,培养基初始pH8.0,培养温度30℃的条件下振荡培养3.5d时,所产蛋白酶活力最高,Mn2+和Ba2+对菌株产蛋白酶有促进作用。所产蛋白酶在SDS-PAGE电泳上显示至少有5种蛋白酶,分子质量范围为32.4～124.2kD,蛋白酶的最适作用温度为50～60℃,最适作用pH值为9～11,在50℃条件下保温1h,剩余酶活力为95%,热稳定性较好。     

真菌木聚糖酶产生菌的筛选及酶学性质研究

本实验通过土壤稀释涂布法,经过初筛、复筛,筛选出了两株酶活力较高真菌菌株C4 和G1,在此基础上对它们生长的最佳碳源选择、酶学性质进行了研究。结果表明：菌株C4 产酶的最佳碳源为玉米芯－麸皮,培养24h 就可以达到产酶高峰,其酶活力达6582.29U/ml。此酶反应最适温度为40℃,在50℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,并且pH 稳定性比较好;菌株G1 产酶的最佳碳源为玉米芯,培养96h 就可以达到产酶高峰,其酶活力到达6301.04U/ml。此酶反应的最适温度是40℃,在40℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,但pH 值稳定性不如菌株C4。     

碱性蛋白酶产生菌株的筛选及其酶学性质研究进展

筛选能产生碱性蛋白酶的微生物菌株以及对碱性蛋白酶的酶学性质进行研究,为碱性蛋白酶的广泛应用奠定了基础。本文就近年来国内外对微生物碱性蛋白酶产生菌的筛选和对碱性蛋白酶的酶学性质研究进展进行了综述。     

产低温弹性蛋白酶菌株的筛选及酶学特性分析

筛选获得一株产生低温型弹性蛋白酶菌株并研究酶学性质,为该酶在肉类嫩化中应用奠定理论基础。在不溶性的弹性蛋白琼脂平板上,以弹性蛋白作为惟一氮源,根据水解圈直径和菌落直径的比值筛选到一株分泌低温型弹性蛋白酶的菌株,命名为XZE116,通过形态学、生理生化试验以及16s rDNA序列分析,该菌株鉴定为短芽孢杆菌(Bacillus brevis)。菌株所产弹性蛋白酶最适作用pH值8.0,在较广的pH值范围(7.0～12.0)内酶稳定性较好。酶最适作用温度25℃,在40℃以下保温2 h,酶稳定性好。浓度为5 mmol/L的Mg2+离子对酶有激活作用,但Hg2+、Pb2+强烈抑制酶活性。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)强烈抑制酶活性,但E-64对酶活性没有影响,表明菌株XZE116弹性蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。0.1%的阴离子表面活性剂SDS、阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)以及非离子型表面活性剂Triton X-100对酶活性有轻微的抑制作用。这些酶的优良生化特性赋予了该酶在肉品工业中具有潜在的应用价值。