恩诺沙星多克隆抗体制备及阻断ELISA检测方法的研究

采用混合酸酐法将恩诺沙星(ENR)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原(ENR-BSA)和包被抗原(ENR-OVA).将免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体(ENR pAb),应用ENR pAb研制ENR残留阻断ELISA快速检测方法,并对其灵敏度、半数抑制浓度IC50特异性、准确度进行测定.结果阻断ELISA的线性检测范围为1～205 ng/mL,灵敏度1 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为11 ng/mL,与其他化合物的交叉反应率(CR%)均<0.1%,鸡肉样的平均添加回收率分别为87.35%,平均变异系数均<10%.本检测方法具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合ENR残留快速检测的推广应用.     

基于上转换免疫层析技术的真菌毒素检测

针对目前检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的常用方法在检出时间或者灵敏度上都存在不足的问题,研究制备出了羧基修饰的核壳结构上转换荧光纳米颗粒,并与DON单克隆抗体偶联,应用于试纸对DON进行定量检测.对麦片中DON含量的最低检测限为0.7 ng/mL.半抑制浓度为9 ng/mL,检测范围为0.7~50.0 ng/mL,回归率在90%~156,.本研究基于上转换免疫层析技术成功建立了一种快速灵敏的检测DON的方法,可为其他包括毒素类的兽药残留检测提供借鉴.     

赭曲霉毒素A的抗原设计及在免疫分析中的应用

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是一种重要的生物毒素,其广泛存在于谷物和其他植物性食品中。食品中的OTA残留进入人体后会对健康造成危害。为快速便捷地对OTA进行检测,本文以OTA为原料,设计合成了结构更加合理的新的OTA半抗原(OTA-H1),制备了OTA的完全抗原(OTA-H1-BSA, OTA-H1-OVA),并进行了小鼠免疫实验,建立了OTA间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA)。采用核磁氢谱、核磁碳谱和高分辨质谱对OTA半抗原结构进行表征,结果表明半抗原结构正确;利用OTA-H1-BSA作为免疫抗原免疫Balb/c小鼠,小鼠血清效价为8 000,表明该免疫抗原对OTA具有一定的抑制作用;利用以OTA-H1-OVA作为包被抗原建立的间接竞争酶联免疫分析法检测小麦样品时,IC₅₀为0.04 ng/mL,灵敏度较原有方法提高了30倍。本方法可用于小麦样品中OTA的快速检测。     

基于纳米金和辣根过氧化物酶信号放大的 癌胚抗原电化学免疫传感器

以癌胚抗原(CEA)为检测目标构建CEA电化学免疫传感器:壳聚糖为生物活性膜,纳米金和生物素标记的辣根过氧化物酶为放大元,CEA、链霉亲和素标记的癌胚抗体免疫反应形成的复合物为固定的酶标免疫复合物,并对检测条件进行了优化。通过竞争性酶联免疫法检测不同浓度CEA的电化学响应。结果表明,该新型免疫传感器表现出良好的线性范围(4～16 ng/mL,R2=0.992 7),检测限为1 ng/mL。     

一种检测濑尿虾中镉残留的直接ELISA

为了快速而简单地检测镉残留,以镉特异性单克隆抗体与酶标抗原为基础,构建了一种直接竞争的酶联免疫吸附测定方法.该方法的检测下限为0.2 μg/L,IC50为3.01 μg/L,其他金属螯合物的交叉反应均低于1.6 %,检测的变异系数为6.67 %~9.09 %.该方法石墨炉原子吸收光谱法的检测结果的相关系数为0.988.结果表明,所构建的直接竞争的酶联免疫吸附测定方法能快速而又准确地测定濑尿虾中镉残留的含量.     

大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法(ELISA),为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,四甲基联苯胺(TMB)显色液为底物,建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法.确定了抗原的包被浓度为0.025μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗稀释度为1∶10 000.检测结果达到板内误差3.82%,板间误差10.22%,在允许的误差范围之内;其检测的线性范围为0.01~0.05μg/mL.结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆蛋白制品过敏原的检测.     

氟苯尼考残留的酶联免疫检测方法的研究

对氟苯尼考进行结构改造制备半抗原及抗原,免疫家兔得到多克隆抗体。经测定,该抗体对氟苯尼考和氟苯尼考胺均有反应,且灵敏度较高,效价达到1∶480 000;在此基础上通过对各实验条件参数的优化建立了间接竞争酶联免疫检测方法,该方法检测限为0.5μg/kg,以20,50μg/kg进行空白样品添加实验,回收率为82.5%～96.0%,批间变异系数在4.1%～15.2%,可初步用于动物组织样本中氟苯尼考残留的检测.     

快速检测技术在食品安全监管中的应用及发展新方向

食品安全已经成为全民关心的热点问题,如何对食品进行快速、经济、准确的检测对于食品企业健康发展具有重要意义．通过列举食品安全事件案例介绍了食品安全快速检测技术在积极应对食品安全事件所起到的作用,并对快速检测技术的未来发展方向包括免疫胶体金技术与读卡器联用、酶联免疫技术的自动化和多领域化、化学发光免疫分析技术的精准化方面进行了综述,阐明了食品安全快速检测技术在食品安全监管中的重要作用．     

呕吐毒素化学发光酶联免疫分析方法的建立及应用

建立增强化学发光酶联免疫分析定量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的方法,并对实际样品进行检测。采用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶-对羟基联苯体系,在优化的条件下,用间接竞争法对DON进行测定,并与ELISA法、HPLC法(GB/T 23503—2009)进行比较。该方法在0.01~1 000μg/m L范围内,所得DON线性回归方程为:Y=-1 059.1X+40 892,相关系数为0.994 2,检测限为0.19 ng/m L,板内RSD为1.8%~4.5%(n=3),批内RSD为2.4%~7.4%(n=3),批间RSD为7.8%~11.0%(n=3);在小麦样品高、中、低3个浓度的回收率范围在90.0%~126.8%,在玉米样品高、中、低3个浓度的回收率范围在97.7%~110.0%。用此方法测定同属镰刀菌毒素的玉米赤霉烯酮交叉反应率小于10%,测定其他类菌种的真菌毒素几乎无交叉反应。所建立的增强化学发光酶联免疫分析法操作简单、灵敏度高、特异性强,可以用于实际样品中DON的快速测定。     

用酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量

运用酶联免疫法测定水产品中的氯霉素残留，氯霉素浓度在0.05-4.05μg/kg范围内呈线性，线性方程为Y=0.31211-0.34014X,r=0.994，向样品中分别添加0.45,1.35,4.05μg/kg 3个浓度水平的氯霉素，平均回收率分别为84.5%,88.4%和79.9%,最低检测限为90ng/kg，批内变异系数为6.0%-8.5%，批间变异系数为5.8%-14.3%。结果表明该方法灵敏度高，重复性好，适合水产品中氯霉素残留筛选检测。     

保健品中42种非法添加物的HPLC-MS/MS法快速筛选和测定

通过选择适宜色谱柱,优化色谱条件和质谱条件,建立了一种快速检测保健品中42种非法添加化学物质高效液相色谱-串联质谱法。样品中的目标物经甲醇萃取后,使用五氟苯基丙基色谱柱（100 mm×2.1 mm,5 μm）分离,以乙腈、20 mmol/L乙酸铵和体积分数0.1%甲酸缓冲水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源正离子（ESI⁺）模式下,采用多反应监测模式测定及外标法定量。结果表明:该HPLC-MS/MS法可以准确快速测定保健品中42种非法添加化学物质,42种化学物质在10~1 000 ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数（r2）均大于0.99;检出限（LOD,S/N=3）和定量限（LOQ,S/N=10）分别为0.5~10 ng/g和1～50 ng/g;42种化学物质在空白基质中3个添加水平下的平均回收率为80.59%～136.76%,相对标准偏差为0.41%～13.44%。该方法操作简单,检测覆盖范围广、耗时少、准确度高,适用于保健品中非法添加化学物质的快速筛查和定量分析。     

分散液液微萃取一分光光度法测定水中痕量汞

以四氯化碳为萃取剂,丙酮为分散剂,硫代米式酮（Thio．Michler,Sketone,TMK）为汞的螯合剂,建立了水中痕量汞分散液液微萃取一分光光度法测定的新方法．对分散液一液微萃取条件和分光光度法测定的最佳实验参数进行优化,包括溶液的pH值,萃取剂与分散剂的种类与用量,螯合剂硫代米式酮的用量,萃取时间等．在最佳实验条件下,汞的浓度在110～420ng／mL范围内与吸光度呈良好线性关系,相关系数r=0．9981,富集倍数为30,检出限为55ng／mL,相对标准偏差（RSD）为4．2％（／7,=8）,回收率为92％～108％．实验结果表明,该方法简便,快速,回收率高,成本低、富集效率高且对环境友好,适用于水中痕量金属汞的测定．     

催化光度法测定铜（Ⅱ）的研究

根据铜（Ⅱ）能催化溴酸钾氧化靛蓝胭脂红的褪色反应,建立一种快速简捷的测定铜（Ⅱ）的新方法.优化试验条件：最大吸收波长、氧化剂及显色剂用量、活化剂用量、缓冲溶液酸度及用量、反应温度、反应时间.在选定的最佳试验条件下,当铜（Ⅱ）浓度在0-10μg/25mL范围时,ΔA与铜（Ⅱ）浓度呈良好的线性关系.其回归方程为：ΔA=0.014C＋0.0011,相关系数r=0.9996,检测限为0.0086μg/mL,加标回收率为97.4%-100.4%.     

DPDAP－H_2O_2－HRP显色光度法测定HRP的研究

首次提出了Ｎ，Ｎ－二氯二甲基对苯二胺一Ｈ２Ｏ２－ＨＲＰ光度法测定ＨＲＰ的方法。ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化Ｎ，Ｎ－二氯二甲基对苯二胺生成有色化合物，通过测定有色化合物在λｍａｘ＝５５３．６ｎｍ处的吸光光度值，间接测定ＨＲＰ的含量。在所选定的实验条件下，ＨＲＰ的线性范围为１．０×１０－１０～１．０×１０－８ｇ／ｍＬ，本法用于游离ＨＲＰ的测定，与经典的ＥＬＩＳＡ显色光度法相比，灵敏度提高了一个数量级。ＨＲＰ的检测限为５．１×１０－１１ｇ／ｍＬ。     

HPLC-UV法检测土壤中的3-硝基苯并蒽酮

建立了HPLC-UV法检测土壤中多环芳烃类物质3-硝基苯并蒽酮的方法.采用on UltimateXB-C18（5μm,150mm×4.6mm i.d.）柱,流动相为甲醇∶水=7∶3（v/v）,流速为0.5mL/min,柱温为30℃,检测波长为391nm.在此色谱条件下,3-硝基苯并蒽酮在0.2～40μg/mL范围内具有良好的线性关系,最低浓度检测限为78ng/mL（S/N=3）.利用超声波萃法对土壤中的3-硝基苯并蒽酮进行了萃取,并用HPLC-UV法测出了其含量.     

基于聚邻苯二胺/石墨烯修饰电极的肠道病毒71型（EV71）电化学免疫传感器

采用改性的Hummers法制备石墨烯氧化物（GO）,并将其滴涂在玻碳电极（GCE）表面。通过电化学还原将GO还原为石墨烯,并进一步采用电化学聚合法在石墨烯表面形成聚邻苯二胺（PoPD）膜,从而制备了PoPD/石墨烯修饰GCE。将EV71抗体固定在修饰电极表面,制备新型的电化学免疫传感器。当发生免疫反应时,由于EV71抗原与抗体生成的免疫复合物阻碍了电子的传递,PoPD的氧化峰电流下降。当抗原的浓度在0.1-80ng/mL范围内,PoPD氧化峰电流的降低值与抗原的浓度成正比。该免疫传感器对EV71的检测限为0.08ng/mL（信噪比为3）。     

毛细管气相色谱法测定绿茶中八氯二丙醚残留量

建立了用毛细管柱气相色谱法测定绿茶中八氯二丙醚（S-421）残留量的方法。绿茶样品用正己烷提取,经硅藻土545（1 g）-浓硫酸（0.4 mL）净化,以正己烷洗脱;经毛细管气相色谱柱DB-1701（30 m×0.32 mm×0.25μm）分离,电子捕获检测器测定,外标法定量。试验结果表明：八氯二丙醚在0.010~0.100 mg/L质量浓度范围内线性关系良好（r=0.999 4）,方法的定量限为0.01 mg/kg;添标水平为0.02,0.04,0.08 mg/kg时,平均回收率在92.9%~97.2%之间,相对标准偏差不大于3.6%。该法操作简单,实验结果准确可靠,可用于绿茶中八氯二丙醚残留量的测定。     

液相色谱-二极管阵列检测法同时测定血液中6种毒品及其代谢物

建立了一种同时测定血液中吗啡、苯丙胺类、氯胺酮和杜冷丁等6种常见毒品的液相色谱-二极管阵列检测器联用的定性定量方法。条件为以乙腈和0.005mol/L的磷酸二氢钾水溶液为流动相,梯度洗脱,经C18色谱柱分离,二极管阵列检测器检测,检测波长210nm。利用保留时间和紫外吸收光谱进行定性分析。血浆中6种毒品在8.0～200.0ng/mL范围内线性关系良好（r2=0.999 2）,回收率范围为68.9%～95.2%,检测限为3.3ng/mL。结果表明,该方法操作简便、快速、选择性强、灵敏度高,适于血液中6种常见毒品及其代谢物的分析,可为相关案件提供方法和技术支持。     

柱前衍生化-高效液相色谱法测定啤酒中的多胺

建立了用柱前衍生化高效液相色谱法分析啤酒中多胺的方法.在碱性介质中,多胺与1-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-4-甲基哌嗪(PPZ)进行衍生化反应生成衍生物.实验采用Diamonsil C18(2)(迪马,150mm×4.6mm,3μm)色谱柱,以水-有机溶剂(乙腈-甲醇,体积比为6∶4)作为流动相,流速为0.5mL/min,用梯度洗脱程序方法同时分离5种多胺衍生物,衍生物的检测波长为362nm.通过考察方法的线性范围、稳定性、检测限和回收率表明:本方法具有样品处理简单、灵敏度高、速度快的优点,可用于啤酒中多胺含量的测定.     

顶空气相色谱-质谱法检测市售热加工食品中的呋喃

实验旨在建立以D4-呋喃为内标测定热加工食品中呋喃的顶空气相色谱-质谱法。方法首次以NaCl溶液作为样品基质,加入内标物D4-呋喃,通过顶空70℃恒温30 min后提取出呋喃,用HP-PLOT Q石英毛细管柱气相色谱分离,采用选择性离子检测质谱扫描模式进行定性定量分析。结果显示:方法的工作曲线的线性范围为5～1 200 ng,相关系数为0.999 3;方法的定性检测限(S/N≥3)为0.4 ng/g,定量检测限(S/N≥10)为1.0 ng/g;不同基底样品中高低添加浓度的加标回收率在86.8%～104.7%之间,相对标准偏差(RSD)均<10%。检测我国市场上11类经热加工的食品(共有133份样品),呋喃检出浓度为<1.0～210.7 ng/g。该方法处理样品简单,灵敏度、准确度高,抗干扰能力强,适合我国各类热加工食品中呋喃的常规检测,能满足对我国热加工食品中呋喃污染状况的调查工作要求。更多还原