LPS与巨噬细胞中htrα2的表达及相关性研究

通过LPS(lipopolysaccharide)分别刺激树突状细胞和巨噬细胞,发现巨噬细胞中HtrA丝氨酸蛋白酶2(HtrA serine peptidase 2,htra2)基因的表达随着刺激时间的延长呈现下调的变化趋势,提示巨噬细胞中的htra2受到LPS的调控.为了进一步证实LPS刺激的特异性,实验建立VSV(vesicular stomatitis virus)病毒感染巨噬细胞模型,采用荧光定量PCR,免疫荧光方法分别从htra2的蛋白水平和定位上研究htra2的变化与LPS刺激巨噬细胞产生效应的相关性;构建了htra2基因过表达的质粒pKH3-htra2-HA,采用ELISA,Western Blot及荧光定量PCR等方法,检测过表达htra2对巨噬细胞产生和分泌炎症因子IL-6(Interleukin-6)及IL-1b(Interleukin-1b)的影响.实验结果表明:htra2仅在LPS刺激巨噬细胞的体系中受到调控,且过表达的htra2会上调巨噬细胞IL-1b和IL-6的表达水平.     

脂多糖协同MSU诱导THP1分泌IL-1β和IL-18

通过合成尿酸钠结晶(monosodium urate crystals,MSU)分析其对人外周血单核细胞系THP1的促炎作用,分别以0、1.0、10.0和100.0μmol/L的MSU刺激THP1细胞4 h,检测不同浓度的MSU对炎症体组分Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶(caspase-1)及促炎因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)表达的影响.为研究toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)的配体脂多糖的作用,用1.0 ng/m L的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预刺激THP1细胞3 h,再加100.0μmol/m L的MSU刺激细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应及酶联免疫吸附试验,检测LPS对MSU诱导的促炎因子IL-1β和IL-18的mRNA及蛋白水平.研究发现,在THP1细胞中,100.0μmol/L的MSU即可显著激活炎症体的mRNA,但其对促炎因子IL-1β及IL-18的mRNA表达的诱导作用却不明显,加入1.0 ng/m L LPS预刺激3 h后,MSU诱导的THP1细胞IL-1β和IL-18的表达量显著增加.证明脂多糖对MSU诱导THP1细胞产生IL-1β和IL-18有协同作用.     

IL-37对白塞病患者单核细胞分泌炎症因子的影响

通过合成白介素37(interleukin-37,IL-37)重组蛋白,对分离的活动期白塞病患者的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)进行预刺激,研究IL-37对白塞病炎症的影响.通过荧光定量PCR及酶联免疫吸附试验对白塞病人及正常人的外周血单核细胞中炎症细胞因子interleukin-1β(IL-1β)、interleukin-17A(IL-17A)和tumor necrosis factor alpha(TNF-α)的基因和蛋白表达水平进行分析,发现IL-37能有效降低白塞病PBMC中IL-1β、IL-17A及TNF-α的mRNA表达,减少炎性细胞因子IL-1β、IL-17A及TNF-α的细胞外分泌,从而证明IL-37在体外对白塞病的炎症具有抑制作用.     

PHA-767491联合IL-24基因对肝癌细胞的杀伤研究

利用最新发现的抗癌新药PHA-767491联合肿瘤基因治疗中最常用的杀伤基因IL-24共同处理肝癌细胞Bel-7404,采用20MOI携带IL-24基因的非复制型病毒Ad-IL-24联合不同浓度的PHA-767491对肝癌细胞Bel-7404进行治疗研究。western blot实验结果表明:PHA-767491对IL-24的表达无明显抑制作用;MTT和Ho-ceast33342染色实验表明二者联合对Bel-7404细胞表现出了较高协同杀伤作用。     

天然免疫抗病毒因子RIG-Ⅰ过表达对HEV复制的抑制作用

视黄酸诱导基因I(retinoic acid inducible gene-I, RIG-I)在宿主天然免疫过程中具有抑制多种RNA病毒复制的作用.为了探究HEV感染过程中宿主天然免疫抗病毒因子RIG-I是否能够抑制HEV的复制,本文采用A549细胞及Huh7.5.1细胞接种HEV;瞬时转染RIG-I真核表达质粒;通过荧光显微镜、Real-time qPCR及Western-blot方法,分析细胞中RIG-I、IRF3和I型干扰素等细胞因子及HEV表达水平变化.结果显示细胞感染HEV后,RIG-I的表达水平显著上升;当细胞中RIG-I过表达时,可显著抑制HEV的复制;RIG-I可上调IRF3的表达,进而刺激I型干扰素的产生进行抗HEV作用.本研究明确了RIG-I过表达具有抑制HEV复制的作用,为今后进一步探究宿主天然免疫防御HEV感染提供了依据.     

5-氮杂-2-脱氧胞苷对里氏木霉产纤维素酶的影响

为探究脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)甲基化修饰对丝状真菌里氏木霉(Trichoderma reesei,T.reesei)产纤维素酶基因表达的表观遗传调控机制,利用不同浓度(0~1.0 mmol/L)的化学修饰剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5'-Aza)培养T.reesei QM9414.通过测定滤纸酶活性(filter paper enzymatic activities,FPA)和羧甲基纤维素钠酶活性(carboxymethyl cellulose-Na enzymatic activities,CMCA)确定纤维素酶活性的变化;利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测0.1 mmol/L 5'-Aza培养的T.reesei QM9414中纤维素酶基因cbh1、egl1、酶激活因子xyr1基因以及分解代谢阻遏因子cre1与ace1基因的表达水平;通过甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MS-PCR)分析cre1、ace1、cbh1、egl1和xyr1基因上游序列的甲基化状态;利用Western blot和DNA甲基化定量测定分析了DNA甲基转移酶和DNA的甲基化水平.结果显示,0.1mmol/L 5'-Aza处理后的T.reesei QM9414菌株的FPA和CMCA最高,比出发菌株T.reesei QM9414分别高30%和53%;RT-q PCR结果显示,处理后的T.reesei QM9414菌株中纤维素酶基因cbh1、egl1与酶激活因子xyr1基因的相对表达量均高于出发菌株,而分解代谢阻遏因子cre1和ace1基因的相对表达量与出发菌株无明显差异;MS-PCR结果显示,cbh1、egl1和xyr1基因的非甲基化状态高于出发菌株,而分解代谢阻遏因子cre1与ace1基因的非甲基化状态也无明显差异;Western blot和DNA甲基化定量测定结果分别显示,5'-Aza处理后菌株的DNA甲基转移酶表达比出发菌株明显降低,全基因组DNA甲基化程度也有下降.研究结果表明,5'-Aza处理T.reesei QM9414菌株后,纤维素酶活性明显增加,纤维素酶基因cbh1、egl1和激活因子xyr1基因表达水平的增加可能是通过DNA甲基转移酶影响DNA甲基化水平,最终调控基因的表达.     

H5N1禽流感病毒蛋白对1F1TM基因家族转录的影响

干扰素诱导的跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,简称IFITM)通过抑制病毒进入细胞来保护细胞,使其免受多种病毒的感染。为了鉴定H5N1病毒本身和结构蛋白是否作为IFITM基因的新调节因子,通过试验探讨了H5N1病毒和结构蛋白对IFITM基因家族转录的影响。结果显示,H5N1病毒的NS1、M1、NP和PB2蛋白在A549细胞中增加了IFITM1、IFITM2和IFITM3表达,对HEK293T细胞没有影响,在HEK293T细胞和A549细胞上,没有发现H5N1病毒的HA和NA蛋白影响IFITM基因家族表达。即在H5N1禽流感病毒感染期间,NS1、M1、NP和PB2蛋白的过表达可以直接刺激IFITM1、IFITM2和IFITM3的上调,而呼吸系统的上皮细胞可能首先被影响,特别地,NP和NS1显示对IFITM基因家族的表达显示更显著的作用。     

转录因子Runx3对维持T细胞记忆表型的影响

为了探究转录因子Runx3在人外周血T细胞中的功能,通过检测T细胞亚群中该基因的表达差异,并在过表达Runx3基因后分析T细胞亚群分布,进一步比较抑制性受体和下游基因的表达差异.结果 表明:Runx3主要表达于初始T细胞亚群中,与对照组相比,过表达Runx3可显著提高T记忆干细胞比例,且PD1、Tim3以及Lag3的表...     

拟南芥JAG基因调控花器官中叶绿素a与b比例

拟南芥C2H2锌指家族转录因子JAGGED(JAG)基因是植物发育过程中调控细胞分裂和分化的一个关键基因.为更详细了解JAG基因在植物发育调控中的功能,解析其下游的调控网络,通过对JAG基因诱导过表达植物的花器官进行分析,发现除在花器官形态上表现出差异外,JAG基因还可促进叶绿素a(chlorophyll a,Chla)转变为叶绿素b(chlorophyll b,Chlb).进一步研究发现,调控从Chla向Chlb转化的关键基因CAO的转录水平受JAG转录因子的间接作用会显著上调,从而使花器官中Chla和Chlb比例改变.对比分析JAG下游基因库转录组数据和Ch IPseq结果,找到了23个受JAG直接作用的叶绿体发育相关基因.研究结果表明,JAG基因对植物花器官中叶绿素的生成有重要作用,可通过间接调控CAO基因的表达,控制Chla和Chlb的比例.该工作可为研究JAG基因调控植物器官发育及功能的基因网络提供新启示.     

顺铂增强携带IL-24基因的双调控溶瘤腺病毒对结肠癌细胞株的杀伤作用

研究端粒酶逆转录酶启动子hTERT启动子和缺氧反应元件HRE双调控的溶瘤腺病毒SG500-IL24联合化疗药物时人结肠癌细胞株的体外杀伤作用.采用MTT法检测病毒联合化疗对结肠癌细胞株HCT-116、SW620以及人正常细胞株L02增殖的抑制作用;利用Hoechst 33342染色对病毒一化疗疗法诱导的HTT-116细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测病毒-化疗疗法诱导的HCT-116细胞凋亡信号通路的变化.结果表明SG500-IL24或不携带外源基因的SG500联合低剂量的顺铂后,其对结肠癌细胞株HCT-116、SW620的杀伤作用显著提高(p<0.05);相同条件下对人正常细胞株L02无明显抑制作用.通过Western blot对联合疗法作用机制的初步探索表明,联合疗法增强caspase依赖性细胞凋亡通路的信号.     

Promoting effect of IFN-g on the expression of LPS-induced IL-12 p40 and p35 mRNA in murine suppressor macrophages

We detected the expression of IL-12 p40/p35 mRNA by semi-quantitative RT-PCR and silver staining, and studied the molecular interaction between the IL-12 expression and the NF-κB activation induced by LPS and IFN-γ/LPS in murine peritoneal suppressor macrophages (MPSMs). It was found that IFN-g strongly enhanced the LPS-induced IL-12 p40 and p35 mRNA expression. Both p40 and p35 mRNA levels were approximately equal. IFN-γ also greatly promoted the LPS-induced secretion of IL-12 p70 in MPSMs. The Proteasome Inhibitor I (PSI) could block the expres-sion of IL-12 p40 and p35 mRNA, and the degradation of IkBa induced by LPS or LPS/IFN-γ. EM-SA showed that LPS could augment the NF-κB binding activity to p40 promoter DNA. However, IFN-γ could neither enhance the LPS-induced NF-κB activity nor promote the degradation of IkBa. Taken together, the data suggest: (i) IFN-γ/LPS could strongly induce the expression of IL-12 p40 and p35 mRNA; both the expression levels were equal; this phenomenon coincided with the high-level secretion of IL-12 p70 induced by IFN-γ/LPS; (ii) NF-kB signal pathway is essential for IFN-γ/LPS to induce IL-12 mRNA expression; (iii) by blocking the degradation of IkB, the PSI sup-presses the IL-12 p40/p35 mRNA expression induced by LPS and IFN-γ/LPS; (iv) NF-κB signal may not be involved in the mechanism by which IFN-γ enhanced the expression of the LPS-induced IL-12 p40/p35 mRNA.     

增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24体外杀伤肝癌细胞的研究

研究溶瘤腺病毒SG511携带由热激蛋白70(hsp70)启动子调控IL-24构成的增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24对人肝癌细胞株的体外杀伤效果.实验采用ELISA法检测不同MOI值感染肝癌细胞SMMC-7721和Hep3B细胞3 d后IL-24的表达;MTT法检测SG511、Ad11-IL24以及SG511-pHSP70-IL24对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B以及人正常成纤维细胞株MRC-5及BJ增殖的抑制作用;并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况.ELISA检测到SG511-pHSP70-IL24感染SMMC-7721和Hep3B细胞后,IL-24有明显表达;MTT实验结果表明SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强.同时结晶紫实验也证明了SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强.增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24相比腺病毒Ad11-IL24以及SG511,对肝癌细胞有较明显的生长抑制和凋亡诱导作用.     

IL-1B, IL-6 and TNF-a change of experimental knee joint degeneration model and effect of local loosening therapy

Objective To observe IL-1B, IL-6 and TNF-a level change of the joint fluid in the experimental knee joint degeneration and the effect of the local loosening therapy. Methods Thirty rabbits were divided into 3 groups at random: ten in the normal contrast group, ten in the blank model group and ten in the loosening therapy group to observe the IL-1B, IL-6 and TNF-a change of the joint fluid before and after the treatment in each group. Result IL-1B, IL-6 and TNF-a level in the blank model group was obviously higher than that in the normal group. (P＜0.05). IL-1B, IL-6 and TNF-a level in the treatment group was obviously lower than that in the normal group. (P＜0.05). Conclusions 1) IL-1B, IL-6 and TNF-a level of the joint fluid in the blank model group was obviously higher than that in the normal group. 2) Loosening soft tissues of the knees can improve IL-1B, IL-6 and TNF-a level of the joint fluid.     

IL-1B, IL-6 and TNF-a change of experimental knee joint degeneration model and effect of local loosening therapy

Objective To observe IL-1B, IL-6 and TNF-a level change of the joint fluid in the experimental knee joint degeneration and the effect of the local loosening therapy. Methods Thirty rabbits were divided into 3 groups at random: ten in the normal contrast group, ten in the blank model group and ten in the loosening therapy group to observe the IL-1B, IL-6 and TNF-a change of the joint fluid before and after the treatment in each group. Result IL-1B, IL-6 and TNF-a level in the blank model group was obviously higher than that in the normal group. (P<0.05). IL-1B, IL-6 and TNF-a level in the treatment group was obviously lower than that in the normal group. (P<0.05). Conclusions 1) IL-1B, IL-6 and TNF-a level of the joint fluid in the blank model group was obviously higher than that in the normal group. 2) Loosening soft tissues of the knees can improve IL-1B, IL-6 and TNF-a level of the joint fluid. Foundation item: Project (99JJy2081) supported by the Natural Science Foundation of Hunan Province     

重组人白细胞介素-6补料分批发酵工艺研究

在传统分批发酵工艺的基础上。对E.Coli表达IL-6的补料分批发酵工艺进行研究，结果表明：在发酵诱导前补料可在表达纯度相差无几的情况下提高菌体的产量，最终提高了生产效率，降低了成本。通过几次发酵比较，结果如下：分批补料工艺菌体生物量平均为10．8g/L，SDS—PAGE电泳法测IL-6表达量平均为40％，比分批发酵8．3g／L的菌体生物量及3．5％的纯度提高30．1％和3．9％。     

IL—100TR人货两用升降机结构有限一优化

本文介绍用现代设计中的有限一优化方法对三角形截面人货两用附着式升降机进行结构计算并将其结果进行高度和标准节截面形状优化,从而使升降机可随安装高度选择不同公称尺寸的主弦杆标准节组合,在相同额定载荷情况下,找出最合理截面形状.其结果是进一步开发了升降机的使用.并为施工升降机的系列化、通用化、标准化工作打下基础.     

增殖腺病毒SG600-IL24与非增殖腺病毒Ad-IL24的抗肿瘤效果比较

利用DNA克隆和重组技术,构建增殖腺病毒SG600-IL24。ELISA检测比较SG600-IL24和非增殖腺病毒Ad-IL24分别感染肝癌细胞BEL-7402、Hep3B、HepGⅡ、SK-Hep-1和成纤维细胞BJ细胞后IL24的表达量,表明SG600-IL24病毒能在肿瘤细胞内大量表达IL-24,最高可达773 ng/mL（MOI=1）,且在多数肿瘤细胞内IL24表达量显著高于Ad-IL24,而在正常细胞内表达量与Ad-IL24基本相同。半数组织感染剂量（TCID50）法检测SG600-IL24 48 h和96 h的增殖情况,发现SG600-IL24可在上述4种肿瘤细胞内大量增殖,96 h的最高增殖倍数可达到246153。MTT法和CPE法对比SG600-IL24和Ad-IL24对不同细胞的杀伤作用结果显示上述4种肿瘤细胞SG600-IL24对上述4种肿瘤细胞的50%杀伤剂量（IC50）和90%杀伤剂量（IC90）均明显低于Ad-IL24。以上结果表明SG600-IL24体现了病毒治疗与基因治疗的双重抗肿瘤用,其效果明显好于Ad-IL24,为该病毒治疗肝癌的体内研究打下基础。     

M I L - 5 3( F e ) 的合成及光催化降解罗丹明B的研究

通过溶剂热合成法, 在不同合成条件下合成了 M I L - 5 3( F e ) , 并利用X射线衍射仪( XR D) 测定了样品的晶相结构, 利用扫描电镜( S EM) 观察了样品的形貌及粒径大小, 通过紫外可见漫反射( UV - v i s ) 考察了样品的紫外可见光吸收情况, 并计算了样品的带隙能。研究了样品对罗丹明B光降解的催化活性。实验结果表明, 不同合成条件下合成的样品对罗丹明B的光催化降解效果不同, 可以通过对合成条件的调变来控制样品的光催化效果。