Kluyveromyces fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶的摇瓶培养条件

脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilisLFS-8611合成的β-D-半乳糖苷酶具有较高的催化半乳糖基转移反应活力，脆壁克鲁维酵母(K，fragilis)LFS-8611细胞生长和β-D-半乳糖苷酶的合成同步，该茵株生长和产酶的最适碳源为半乳糖，乳糖次之；最适氮源为蛋白胨F403；最适培养条件为：发酵培养基的初始PH值为7，0，摇床的转速为200r／min，培养基中碳源和氮源质量浓度对茵体生物量和β-D-半乳糖苷酶活力有重要影响，以12mg／mL乳糖为碳源，16mg／mL蛋白胨(F403)为氮源，在最适培养条件下培养32h后，茵体生物量和β-D-半乳糖苷酶活力分别为7，56g／L和18，83U／mL。     

乳糖酶水解乳清合成低聚半乳糖

利用乳糖酶转移半乳糖苷的作用，以高浓度的乳清为原料，研究了温度、pH、乳糖浓度、酶浓度及反应时间对GOS（低聚半乳糖）合成的影响。通过实验发现，温度、pH、反应时间对GOS合成影响不明显。酶浓度和乳糖初始浓度对产生有一定的影响。在优化条件下，GOS占总糖的23．9％。     

固定化酶连续生产半乳糖寡糖

固定了来源米曲酶的β－半乳糖苷酶,在纤维床反应器中连续生产半乳糖寡糖。在连续反应体系中,研究底物浓度、pH、反应温度和停留时间对半乳糖寡糖合成的影响,确定了连续生产半乳糖寡糖的最佳工艺条件为底物浓主400g/L,反应温度50℃,pH6．0,停留时间40min。在连续反应36h时,流加1．5％D-乳糖,半乳糖寡糖的得率由39．6％提高到66．2％,固定化酶反应器能基本稳定地操作96h。     

产黄芪甲苷酶的酶反应条件

为提高黄芪甲苷产率,研究了微生物所产的黄芪甲苷糖苷酶将3个糖基黄芪皂苷转化为黄芪甲苷的酶性质。该酶的最佳反应条件为：反应温度为35℃,底物质量浓度为30mg／mL,pH5．0,酶反应时间28h,K^＋、Na^＋对提纯酶有激活作用,Zn^2＋、Fe^3＋对酶有抑制作用,其中Fe^3＋抑制作用显著。在20～60℃、pH4．0～7．0时,酶活力相对稳定。在最佳酶反应条件下,黄芪甲苷的产率为8．7％。     

产黄芪甲苷酶的酶反应条件

为提高黄芪甲苷产率,研究了微生物所产的黄芪甲苷糖苷酶将3个糖基黄芪皂苷转化为黄芪甲苷的酶性质。该酶的最佳反应条件为:反应温度为35℃,底物质量浓度为30 mg/mL,pH 5.0,酶反应时间28 h,K+、Na+对提纯酶有激活作用,Zn2+、Fe3+对酶有抑制作用,其中Fe3+抑制作用显著。在20~60℃p、H 4.0~7.0时,酶活力相对稳定。在最佳酶反应条件下,黄芪甲苷的产率为8.7%。     

水解淫羊藿苷糖基的土壤细菌筛选

从20种土壤细菌中筛选出了对淫羊藿苷水解能力高的菌株Rhodanobncter sp．GS3054．该菌株30℃下发酵3～4d的发酵液提酶后对淫羊藿苷水解能力最佳；水解淫养藿苷成低糖基苷的最适反应条件为：50℃、pH6．0、底物20mg／mL，反应时间24h．     

微生物酶合成红景天苷的条件优化

通过对菌株Absidia sp．MS1、Absidia sp．MS2、Absidia sp．MS3、Absidia sp．MS4、Absidia sp．MS5和Absidia sp．MS6合成红景天苷能力的比较，确定Absidia sp．MS2为生产红景天苷合成酶的出发菌株。采用菌株Absidia sp．MS2发酵得到粗酶液．以酪醇和葡萄糖为底物合成红景天苷。实验确定该酶促反应最优条件为：酪醇为15g／L，葡萄糖为60g／L，反应温度为45℃，pH值为5．0，反应时间为6h。     

微生物酶合成红景天苷的条件优化

通过对菌株Absidiasp.MS1、Absidiasp.MS2、Absidiasp.MS3、Absidiasp.MS4、Absidiasp.MS5和Absidiasp.MS6合成红景天苷能力的比较,确定Absidiasp.MS2为生产红景天苷合成酶的出发菌株。采用菌株Absidiasp.MS2发酵得到粗酶液,以酪醇和葡萄糖为底物合成红景天苷。实验确定该酶促反应最优条件为:酪醇为15g/L,葡萄糖为60g/L,反应温度为45℃,pH值为5.0,反应时间为6h。     

淫羊藿苷糖苷酶产生菌的筛选及其酶反应条件

从6株微生物菌株中筛选出了高产淫羊藿苷糖苷酶的菌株Absidasp.E9r,该菌所产淫羊藿苷糖苷酶能将多糖基的淫羊藿苷水解成低糖基的淫羊藿苷。通过实验确定了该淫羊藿苷糖苷酶的最适反应条件:pH值4.0,反应温度50℃,底物质量浓度20 mg/mL,反应时间20 h。     

黄芪皂苷糖苷酶产生菌的筛选及其酶反应条件

从Absida sp．A3r、A84r、A9r、A8r、A38r、ARr6株菌中筛选出了黄芪皂苷糖苷酶高产菌株，该酶能将多糖基的黄芪皂苷水解成低糖基的皂苷。通过实验确定了该黄芪皂苷糖苷酶的最适反应条件：反应温度，30℃；底物浓度，20mg／mL；反应时间，24h；pH，6．0。     

米曲霉β-半乳糖苷酶的纯化与性质研究

以40％饱和度的硫酸铵溶液去除杂蛋白，用80％饱和度的硫酸铵和75％的丙酮纯化米曲霉β-半乳糖苷酶，其比活力为147．7U／mg，回收率为38．1％。该酶最适反应温度和pH分别为50～55℃和4．0～6．0，作用于乳糖的米氏常数Km为16．7mmol／L，最大反应速度Vmax为5．56μmol／min。     

酶催化乳酸铵制备乳酸乙酯工艺条件的研究

研究了在有机溶剂体系下利用脂肪酶催化乳酸铵与乙醇合成乳酸乙酯的反应条件,对脂肪酶和有机溶剂进行了筛选,考察了影响合成乳酸乙酯的因素(底物物质的量配比、反应时间、乳酸铵浓度、温度、酶浓和摇床转速).结果表明,以叔丁醇为反应介质、脂肪酶Novozym435为催化剂时乳酸乙酯产率最高.在底物物质的量比为1∶24,反应时间24 h,乳酸铵浓度0.2 mol/L,反应温度60℃,酶浓40 g/mol,摇床转速150 r/min时乳酸乙酯产率可达32.38%,酶重复使用5次后乳酸乙酯得率仍可达到22.1%,反映出该酶具有良好的稳定性.     

水解淫羊藿苷糖基的土壤细菌筛选

从20种土壤细菌中筛选出了对淫羊藿苷水解能力高的菌株Rhodanobactersp.GS3054.该菌株30℃下发酵3~4 d的发酵液提酶后对淫羊藿苷水解能力最佳;水解淫养藿苷成低糖基苷的最适反应条件为:50℃、pH 6.0、底物20 mg/mL,反应时间24 h.     

酶法制备壳低聚糖的工艺研究

用酶降解法对壳聚糖进行降解，制备壳低聚寡糖，研究了温度、pH值、底物浓度等对酶促反应的影响。结果表明：降解的最佳温度和pH值分别为45℃和5．0，最佳底物浓度为4mg／mL。采用溶剂分离法对降解产物进行分离，分别得到了聚合度为1～8、8～16的壳聚寡糖和聚合度16以上的壳聚糖。     

产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、酶学特性和固定化研究

为解决目前工业用α-半乳糖苷酶耗能大、成本高的难题,研究泡菜汁中筛选出产α-半乳糖苷酶的菌株,而后对其进行紫外诱变和亚硝酸钠进一步诱变,并在不同温度和不同p H下测定α-半乳糖苷酶酶活力。结果表明:获得一株酶活高达36.9 U/m L的α-半乳糖苷酶菌株,该菌株所产α-半乳糖苷酶的最适反应温度为50℃,最适p H为5.5。利用4%海藻酸钠做为固定剂对α-半乳糖苷酶进行固定化,可以使酶活保持在70%左右,此α-半乳糖苷酶高产菌株的发现及其酶学特性的研究为α-半乳糖苷酶的工业化应用奠定了基础。     

淫羊藿苷糖苷酶产生菌的筛选及其酶反应条件

从6株微生物菌株中筛选出了高产淫羊藿苷糖苷酶的菌株Absida sp.E9r,该菌所产淫羊藿苷糖苷酶能将多糖基的淫羊藿苷水解成低糖基的淫羊藿苷.通过实验确定了该淫羊藿苷糖苷酶的最适反应条件：pH值4.0,反应温度50 ℃,底物质量浓度20 mg/mL,反应时间20 h.     

黄芪皂苷糖苷酶产生菌的筛选及其酶反应条件

从Absidasp.A3r、A84r、A9r、A8r、A38r、ARr6株菌中筛选出了黄芪皂苷糖苷酶高产菌株,该酶能将多糖基的黄芪皂苷水解成低糖基的皂苷。通过实验确定了该黄芪皂苷糖苷酶的最适反应条件:反应温度,30℃;底物浓度,20mg/mL;反应时间,24h;pH,6.0。     

吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究

对从自然界分离得到的Microbacterium sp．OU01进行发酵,制得粗酶液（壳聚糖酶和伊肛氨基葡萄糖苷酶混合液）,采用吸附交联法及包埋法对其进行固定,研究其固定化的最优条件和固定化酶的酶学性质。结果表明,游离混合酶液的最佳PH为5．6,最适反应温度为50℃。吸附交联法固定化酶的最佳条件为：戊二醛体积分数5．0％,加酶量15mL（49．51U／mL）,固定化时间6h。该条件下制得的固定化酶的最适pH为4．5,最适反应温度为60℃。包埋法固定化酶的最佳条件为：海藻酸钠质量浓度10g／L,CaCl。质量浓度15g／L,加酶量为1mL（50．35U／mL）／5mL质量浓度10g／L海藻酸钠,固定化时间20min。该条件下制得的固定化酶的最适PH为5．0,最适反应温度为50℃。固定化酶酶解壳聚糖所得产物中含D-氨基葡萄糖,说明粗酶液中的壳聚糖酶和外切-β-D-氨基葡萄糖苷酶被同时固定。通过对游离酶和固定化酶稳定性的研究,表明吸附交联固定化酶更适于工业化应用生产D-氨基葡萄糖。     

酶法制备壳低聚糖的工艺研究

用酶降解法对壳聚糖进行降解,制备壳低聚寡糖,研究了温度、pH值、底物浓度等对酶促反应的影响。结果表明:降解的最佳温度和pH值分别为45℃和5.0,最佳底物浓度为4mg/mL。采用溶剂分离法对降解产物进行分离,分别得到了聚合度为1～8、8～16的壳聚寡糖和聚合度16以上的壳聚糖。     

一种脂肪酶催化柚皮苷酯化反应的研究

为了增加柚皮苷的脂溶性从而使其具有更好的生物利用度,首次用脂肪酶lipase TL IM(Thermomyceslanuginosus)催化,以乙酸乙烯酯、月桂酸乙烯酯和棕榈酸乙烯酯等乙烯酯类为酰基供体,对柚皮苷进行选择性酯化.系统地研究了有机介质中固定化脂肪酶催化合成柚皮苷脂肪酸酯的影响因素,实验先对有机溶剂的体积比和底物的摩尔比进行探讨,再对反应温度和反应时间进行研究.结果表明:溶剂、底物摩尔比、温度及反应时间等方面对柚皮苷酯化反应有不同程度上的影响,在最佳条件下,酯化产物产率可高达85%.