糖肾方激活PGC-1α/LXR/ABCA1信号通路改善高脂诱导的巨噬细胞胆固醇摄取及流出

目的：观察中药糖肾方对棕榈酸钠诱导的RAW264.7巨噬细胞的脂质流出、摄取等转运相关分子的影响。方法：用棕榈酸钠（PA）诱导RAW264.7巨噬细胞制造高脂环境，经MTT测定后给予不同浓度糖肾方及PGC-1α-siRNA干预；利用Western blot和Real-time PCR检测细胞过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、肝脏X受体（LXR）、ATP-结合盒转运蛋白（ABCA1）、分化簇36（CD36）的表达；Filipin染色及BODIPY 493/503染色观察糖肾方对细胞内脂滴沉积的影响。结果：Western blot及Real-time PCR的结果提示PA组PGC-1α、LXR、ABCA1表达减少，CD36表达增加（P<0.05），给予糖肾方干预可上调PGC-1α、LXR、ABCA1的表达，下调CD36的表达（P<0.05）；Filipin染色及BODIPY 493/503染色结果显示糖肾方可改善高脂状态下细胞内脂滴沉积的情况。PGC-1α-siRNA干预可抑制糖肾方上调PGC-1α、LXR、ABCA1表达以及抑制CD36的表达的作用。 结论：糖肾方可激活PGC-1α/LXR/ABCA1信号通路促进脂质流出、下调CD36的表达抑制脂质摄取，改善因脂质代谢异常引起的相关疾病等。     

川陈皮素抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大

目的：探讨川陈皮素（nobiletin, Nob）抑制高糖诱导心肌细胞肥大的作用及其机制。方法：利用高糖（high glucose, HG）刺激乳鼠心肌细胞（neonatal rat cardiomyocytes, NRCMs）建立心肌细胞肥大模型,并给予Nob、核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂Brusatol干预,采用MTT法检测细胞存活率,qRT-PCR法检测C-myc、Nppa mRNA水平,免疫荧光检测心肌细胞表面积,Western blot法检测Nrf2和血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白表达水平。结果：33.3 mmol/L HG刺激NRCMs 48 h,细胞存活率显著下降,C-myc、Nppa mRNA水平和细胞表面积显著升高,Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低（P<0.05）。给予Nob干预后,与HG组比较,细胞存活率、Nrf2和HO-1蛋白表达显著上调,C-myc、Nppa mRNA水平和细胞表面积显著下降（P<0.05）。利用Brusatol抑制Nrf2活性,与HG+Nob组比较,上述指标被逆转。 结论：Nob抑制高糖诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路减轻糖尿病心肌病大鼠的心肌细胞凋亡

目的：探讨栀子苷（geniposide, GE）改善大鼠糖尿病心肌病的作用及其具体机制。方法：24只成年雄性SD大鼠,随机分为3组：正常组（Control组,8只）、糖尿病心肌病组（DCM组,8只）、糖尿病心肌病组+栀子苷组（DCM+GE组,8只）,采用高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）构建糖尿病心肌病大鼠模型,应用次氯酸（HOCl）诱导H9C2损伤模型。干预12周后,HE和Masson染色观察心脏组织病理学改变;TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡水平;免疫组化检测及Western blot检测法检测VPO1/ERK1/2信号通路及凋亡相关蛋白表达水平。给予次氯酸刺激心肌细胞后,Western blot检测法检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。给予ERK1/2酶抑制剂U0126后,用Western blot检测法再次检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。结果：HE及Masson染色显示,与Control组相比,DCM组出现心肌纤维排列紊乱、心肌胶原含量明显增多,而DCM+GE组心肌损伤情况明显改善（P<0.05）。与Control组相比,DCM组心肌细胞凋亡水平及Bax/Bcl-2比值明显增加,而DCM+GE组心肌凋亡情况得到明显好转（P<0.05）。免疫组化和Western blot结果显示,在DCM组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平升高,而DCM+GE组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平得到了抑制（P<0.05）。进一步对H9C2细胞行HOCl干预发现,与Control组相比,次氯酸组出现p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值增加,而加入ERK1/2酶抑制剂U0126后p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值下降（P<0.05）。 结论：栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路抑制心肌细胞凋亡从而改善糖尿病引起的心肌损伤。     

糖肾方抑制TGF-β1/Smad3通路促进小鼠肾小管上皮细胞胆固醇流出

目的：利用高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞（mouse tubular epithelial cells, mTECs）观察中药糖肾方颗粒及Smad3抑制剂SIS3对于TGF-β1/Smad3通路及细胞胆固醇流出通路的影响。方法：25 mmol/L高糖诱导mTECs细胞后，分别给予糖肾方及Smad3抑制剂SIS3干预，利用ELISA试剂盒检测细胞中脂质含量，利用Western blot和Real-time PCR检测细胞中TGF-β1/Smad3通路及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator 1α, PGC-1α）、肝脏X受体（liver X receptor, LXR）、ATP-结合盒转运蛋白A1（ABCA1）、ATP-结合盒转运蛋白G1（ABCG1）的表达。结果：糖肾方可以降低高糖诱导mTECs细胞中总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酸酯（triglyceride, TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C）含量，上调高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C）含量（P<0.05）；糖肾方及Smad3抑制剂SIS3可下调高糖诱导mTECs细胞中TGF-β1、Smad3、Collagen Ⅰ和Fibronectin的表达，上调PGC-1α、LXR、ABCA1、ABCG1的表达（P<0.05）。 结论：糖肾方可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路促进细胞胆固醇流出，减轻肾损害。     

黄连素调节2型糖尿病地鼠内脏脂肪组织FGF21/SIRT1信号通路基因mRNA表达的效应

目的: 研究黄连素(Ber)对肥胖2型糖尿病(T2DM)中国地鼠内脏白色脂肪组织(VWAT)中FGF21/SIRT1/PRDM16信号通路及PRDM16信号通路基因mRNA表达的影响及可能机制。方法: 应用高脂饮食诱导肥胖胰岛素抵抗(IR)地鼠模型,然后给予小剂量链脲菌素建立T2DM地鼠模型。造模完成后随机分成对照组、肥胖IR组、肥胖T2DM组和2型糖尿病Ber治疗组。Ber治疗9周,应用real-time RT-PCR技术检测各组地鼠VWAT中FGF21/SIRT1/PRDM16信号通路及PRDM16信号通路基因的mRNA表达改变。结果: 模型地鼠VWAT中FGF21、FGFR1、βKL、SIRT1、GLUT-1、PRDM16、CtBP-1、CtBP-2、C/EBPβ、PPARγ、PGC-1α、PGC-1β及棕脂组织特异基因UCP-1、Cidea、Elovl3和PPARα的mRNA表达降低,而白脂组织特异基因Resistin、MEST和Serpina3k的mRNA表达增加。Ber治疗诱导VWAT中FGF21/SIRT1/PRDM16信号通路而诱导PRDM16信号通路效应,诱导棕脂组织特异基因mRNA的表达,抑制白色脂肪选择性基因mRNA的表达,诱导白色脂肪棕色化,改善脂诱性IR。结论: FGF21/SIRT1/PRDM16信号通路及PRDM16信号通路参与Ber诱导内脏白色脂肪棕色化的分子机制。     

肿瘤细胞和耐药肿瘤细胞中FoxO3/Keap1/Nrf2通路的表达差异

目的: 检测FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路在肿瘤细胞和耐药肿瘤细胞中的表达差异,探讨FoxO3/Keap1/Nrf2信号在肿瘤细胞耐药中的作用。方法: 构建肺癌A549耐药（A549/DDP）和结肠癌HCT-8耐药（HCT-8/5-FU）两种细胞株,耐药细胞对药物的敏感性用MTT法检测;分别用qRT-PCR、Western blot检测FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路成员在非耐药和耐药肿瘤细胞中mRNA和蛋白的表达情况并进行比较。结果: A549/DDP的耐药性明显高于A549细胞（P<0.05),耐药倍数为5.25倍;HCT-8/5-FU耐药性显著高于HCT-8细胞（P<0.05）,耐药倍数为31.67倍;两种耐药细胞A549/DDP和HCT-8/5-FU中的FoxO3、Keap1和Akt基因的mRNA表达水平降低而Nrf2和Nqo1基因的mRNA表达水平升高;A549/DDP和HCT-8/5-FU细胞中的Keap1和FoxO3蛋白表达水平降低而p-Akt、Nrf2、Nqo1的蛋白表达水平升高。结论: FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路与肿瘤耐药性有一定相关性,为深入研究该通路并探索降低肿瘤耐药性的治疗策略提供参考。     

甘草提取物对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞纤维化的影响

目的：考察甘草提取物对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞（CFs）纤维化干预作用。方法：10 ng/mL TGF-β1诱导CFs建立心肌纤维化细胞模型。用甘草提取物处理纤维化细胞,MTT法检测不同浓度甘草提取物对细胞增殖的影响;CCK-8检测TGF-β1诱导后,甘草提取物对CFs细胞增殖的影响;免疫荧光检测平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;Western blot检测TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白及p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平;RT-PCR检测Smad2、Smad3、Smad4 mRNA表达水平。结果：各浓度甘草提取物处理细胞后细胞活性与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。甘草提取物各浓度组细胞增殖率显著低于TGF-β1组（P<0.05）;100 μg/mL甘草提取物对α-SMA、TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达水平显著低于TGF-β1组（P<0.05）。 结论：甘草提取物对TGF-β1诱导的心肌纤维细胞纤维化的发生发展具有一定改善作用,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。     

二甲双胍对TGF-β1诱导的大鼠肺泡上皮II型细胞间质转分化的影响

目的：观察二甲双胍（metformin, Met）对大鼠肺泡上皮II型细胞（rat alveolar epithelial type II cells, RLE-6TN）间质转分化（endothelial-mesenchymal transition, EMT）的影响及其可能的机制。方法：实验分为6组：Control组;转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）组：细胞用TGF-β1（5 ng/mL）处理48 h;TGF-β1+Met（1、10、100 μmol/L）组：细胞先用Met（1、10、100 μmol/L）预处理1 h,再用TGF-β1（5 ng/mL）处理48 h;Met（100 μmol/L）组：细胞用Met（100 μmol/L）处理48 h。CCK-8法检测细胞增殖。RT-PCR检测细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）、波形蛋白（vimentin）、E钙粘附蛋白（E-Cadherin）、紧密连接蛋白-1（zonulaoccludens, ZO-1）、I型胶原（collagen I）、III型胶原（collagen III）的mRNA表达。Western blotting检测α-SMA、vimentin、E-Cadherin、ZO-1、collagen I、collagen III的蛋白表达及Smad2/3和细胞外调节蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases 1/2, ERK1/2）的蛋白磷酸化水平。结果： 与TGF-β1组比,二甲双胍（10、100 μmol/L）可显著抑制TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞增殖（P<0.05或P<0.01）,降低α-SMA、vimentin、collagen I、collagen III的mRNA和蛋白表达及Smad2/3和ERK1/2的蛋白磷酸化水平（P<0.05或P<0.01）,增加E-cadherin和ZO-1的mRNA和蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。结论：二甲双胍（10、100 μmol/L）对TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞EMT具有一定的抑制作用,其机制可能与抑制Smad2/3和ERK1/2的磷酸化有关。     

ERK1/2和p38MAPK在介导CGRP和Ang II诱导血管平滑肌细胞Nox1表达中的作用

目的:探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2) 和p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)在降钙素基因相关肽（CGRP）和血管紧张素II(Ang II) 诱导血管平滑肌细胞NADPH氧化酶-1（Nox1）表达中的作用。方法: 体外培养鼠源性A10血管平滑肌细胞株（A10VSMC）,用Ang II或/和CGRP作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot检测ERK1/2和p38MAPK总蛋白和磷酸化蛋白以及Nox1蛋白的表达水平。结果: 与对照组和CGRP组相比,Ang II在诱导A10VSMC活力和增殖的同时,亦能增加磷酸化ERK1/2和p38MAPK信号激酶和Nox1的表达。CGRP预孵育细胞30 min 却能显著抑制Ang II诱导的细胞增殖活力、Nox1蛋白、磷酸化ERK1/2和p38MAPK的表达;二苯基碘（DPI）能抑制Ang II诱导的细胞增殖、磷酸化p38MAPK及Nox1表达,但不能抑制Ang II诱导的ERK1/2磷酸化。p38MAPK阻断剂SB203580不但能抵消Ang II诱导的Nox1表达作用,而且能协同CGRP抑制Ang II诱导的Nox1表达。而ERK1/2阻断剂PD98059对CGRP和/或Ang II诱导Nox1表达作用的影响无统计学意义。结论:Ang II诱导A10VSMC增殖与激活Nox1有关,CGRP抑制Ang II诱导的Nox1表达,可能主要通过抑制p38MAPK信号途径发挥作用,而与ERK1/2信号途径无显著关系。     

胰岛素通过PI3K/AKT及PI3K/ERK通路减轻脂多糖对钠泵α1亚基的抑制

目的:研究胰岛素减轻脂多糖对肺泡II型上皮细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达抑制的分子机制。方法:以A549细胞为研究对象,脂多糖（1 μg/mL）诱导8 h后,再加用胰岛素（100 nmol/L）处理4 h,采用Western blot法检测Na+-K+-ATPase α1亚基表达及AKT、ERK1/2、p70s6k、NEDD4-2总蛋白表达及其磷酸化水平变化。结果:A549细胞在1 μg/mL脂多糖作用下,Na+-K+-ATPase α1亚基蛋白表达显著降低。胰岛素处理可部分解除脂多糖对A549细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达的抑制。胰岛素上调Na+-K+-ATPase α1亚基表达是通过改变PI3K/AKT及PI3K/ERK通路中关键蛋白AKT、NEDD4-2、ERK1/2、p70s6k的磷酸化水平来实现的。结论:胰岛素通过调控PI3K/AKT及PI3K/ERK通路部分解除脂多糖对肺泡II型上皮细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达的抑制,这为临床上采用胰岛素干预急性呼吸窘迫综合征提供了初步实验依据。     

黄芪甲苷对糖尿病大鼠早期肾脏损伤的保护作用及其机制研究

目的: 探讨黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对实验性糖尿病大鼠早期肾脏损伤的保护作用及其可能机制。方法:链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射（55 mg/kg）建立糖尿病大鼠模型,随机分为正常组、模型组、AS-Ⅳ（20、40、80 mg/kg）组。连续给药8周后检测各组大鼠体质量、肾脏指数、血糖、24 h尿微量白蛋白排泄率（24 h UAER）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、血清总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量的变化;HE及PAS染色观察肾脏组织病理学形态学变化;Western blot法检测肾皮质转化生长因子-β1（TGF-β1）、核转录因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶1（HO-1）蛋白的表达水平。结果: 与正常组比较,模型组大鼠的血糖和肾脏指数以及血清中MDA、Scr、BUN和24 h UAER含量显著升高（P<0.01）,T-SOD和GSH-Px活性显著降低（P<0.01）,TGF-1、Nrf2总蛋白及核蛋白表达显著增加（P<0.05或P<0.01）;与模型组比较,AS-Ⅳ（40、80 mg/kg）组MDA、Scr、BUN、24 h UAER含量显著降低（P<0.01）,AS-Ⅳ（80 mg/kg）组T-SOD、GSH-Px活性显著升高（P<0.05或P<0.01）,AS-Ⅳ（80 mg/kg）组TGF-1蛋白表达显著降低（P<0.05）,Nrf2总蛋白、核蛋白及HO-1蛋白表达显著增加（P<0.05或P<0.01）。结论:AS-Ⅳ能减轻糖尿病大鼠早期肾脏氧化应激的损伤,其作用机制可能与其提高血清抗氧化能力、降低肾脏组织中TGF-β1蛋白表达、激活Nrf2信号通路,增强抗氧化蛋白HO-1的表达有关。     

瑞舒伐他汀通过UCP2-SIRT3信号调控脑I/R对神经元的损伤

目的：研究瑞舒伐他汀对脑缺血-再灌注损伤的保护作用及作用机制。方法：（1）建立脑梗死及OGD/R细胞模型,检测不同浓度瑞舒伐他汀对细胞增殖及细胞凋亡的影响;（2）用不同浓度瑞舒伐他汀处理OGD/R细胞模型,观察瑞舒伐他汀对细胞形态和细胞中UCP2/SIRT3表达和定位的影响;（3）构建UCP2沉默的细胞系,观察细胞线粒体形态和细胞中TOMM20及SIRT3分子表达与定位,研究瑞舒伐他汀在OGD/R细胞模型中发挥保护作用的通道和机制;（4）检测线粒体膜电位,PCR检测线粒体生成基因PGC1、Drp1和Opa1表达,研究瑞舒伐他汀对线粒体的保护作用。结果：（1）不同浓度瑞舒伐他汀均可以明显减低OGD/R细胞凋亡,提高细胞存活率;（2）瑞舒伐他汀通过影响细胞UCP2和SIRT3表达,进而发挥细胞保护作用,使细胞免受OGD/R损伤;（3）瑞舒伐他汀通过调控UCP2影响TOMM20表达,增加线粒体跨膜转运和能量代谢,增强线粒体功能,提高细胞存活;（4）瑞舒伐他汀阻止OGD/R细胞膜电位下降,保护线粒体,改善细胞状态,减少细胞凋亡。 结论：瑞舒伐他汀通过调控UCP2/SIRT通路来抑制OGD/R细胞线粒体损伤,从而发挥神经元保护作用。     

脂氧合酶抑制剂对肝癌细胞株HepG2增殖及MEK/ERK信号通路的影响

目的: 探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对肝癌细胞株HepG2增殖及MEK/ERK信号通路的影响。方法: 在不同浓度的NDGA干预下对HepG2细胞进行体外培养;应用MTT比色法观察NDGA对HepG2增殖的影响;逆转录PCR(RT-PCR)测定不同浓度NDGA干预下丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)1、MEK2、细胞外信号调节激酶(ERK)1、ERK2 mRNA表达强度。结果: NDGA可抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性;NDGA干预后HepG2细胞中MEK1、MEK2、ERK1、ERK2 mRNA的表达强度随着浓度的增加呈递减趋势;不同浓度NDGA干预均显著降低MEK1 mRNA的表达强度(P<0.05),在NDGA干预浓度为 100 μmol/L 及 200 μmol/L 时可显著降低MEK2、ERK1、ERK2 mRNA表达强度(P<0.05)。结论: NDGA可抑制HepG2细胞增殖,其作用机制与抑制MEK/ERK信号通路有关。     

胃泌素调控ERK信号通路在促进大肠癌CACO2细胞增殖中的作用

目的: 利用RNA干扰技术探讨ERK1/2基因在胃泌素促进大肠癌细胞株CACO2增殖中的作用及分子机制。方法: 通过慢病毒感染细胞构建胃泌素受体（CCK-BR）阳性的细胞稳转株CACO2,应用qRT-PCR检测大肠癌细胞株CACO2中CCK-BR的表达情况。应用RNA干扰技术沉默ERK1/2基因后,分析其总的ERK基因的蛋白表达及其磷酸化水平变化。实验共分4组：对照组、阴性干扰组、胃泌素组及质粒干扰组。使用流式细胞仪Annexin V-FITC法检测各组细胞增殖指数及Western blot检测各组细胞ERK1/2蛋白的表达和磷酸化水平。结果: 慢病毒感染后,在CACO2细胞中均检测到目的条带膜蛋白,CACO2细胞存在着一定量的CCK-BR mRNA表达,扩增产物为185 bp。筛选出干扰质粒,质粒与脂质体比例在1∶2,转染效率达到40%～50%,转染干扰质粒的细胞中ERK蛋白表达水平降低,从蛋白水平说明构建的质粒沉默有效。胃泌素组细胞增殖指数明显高于质粒干扰组,也高于阴性干扰组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。4组细胞间ERK1/2的蛋白表达及磷酸化水平比较,差异有统计学意义(P<0.01)。胃泌素组ERK1/2的蛋白表达及磷酸化水平明显高于质粒干扰组,也高于阴性干扰组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: 胃泌素能够通过ERK信号通路促进体外大肠癌CACO2细胞增殖。通过RNA干扰技术有效地阻断ERK信号通路下调ERK蛋白磷酸化水平,有望为胃泌素依赖型大肠癌综合治疗寻找到一条新的切入途径。     

甲氨蝶呤对炎性细胞因子及丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的: 探讨甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对类风湿关节炎(RA)发病起重要作用的炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的作用及其可能的机制。方法: 用II型胶原建立类风湿关节炎(CIA)动物模型,以MTX(0.2 mg/kg/W)进行处理,6周后处死大鼠,取血清进行IL-1β和TNF-α检测;分离大鼠膝关节取关节滑膜细胞(FLS)进行培养、鉴定,检测脂多糖(LPS)诱导的FLS培养上清中IL-1β和TNF-α的含量,并观察MTX对FLS分泌IL-1β和TNF-α的影响;在FLS的培养中加入不同剂量的MTX,用Westen Blot方法检测FLS中ERK蛋白及磷酸化蛋白的表达。结果: 关节炎指数评分、关节肿胀度测定及关节病理显示造模成功,分离关节滑膜细胞经流式细胞仪检测FLS的血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达为 85.5%。造模后,CIA大鼠血清IL-1β和TNF-α明显增加,与空白对照组比较有统计学差异(P<0.05),MTX能有效减少CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量(P<0.05),但未能恢复至正常水平。MTX能抑制LPS诱导的CIA大鼠关节FLS分泌IL-1β和TNF-α。Western Blot检测显示,不同浓度的MTX对CIA大鼠FLS中ERK蛋白的表达与模型对照组相比无统计学差异(P>0.05)。CIA大鼠 FLS中p-ERK蛋白的表达明显高于空白对照组(P<0.01),MTX干预后,低剂量组对p-ERK蛋白表达无明显影响,而中、高剂量组可降低p-ERK蛋白的表达(P<0.05)。结论: MTX既有免疫抑制作用,同时还通过抑制炎性细胞因子IL-1β和TNF-α而具有抗炎作用,其机制可能部分与其抑制MAPK信号通路中的ERK蛋白磷酸化有关。