冬凌草甲素通过PI3K/Akt通路诱导MDA-MB-231细胞的凋亡

目的: 研究冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响,初步探讨其作用机理。方法: 体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用6、12、24 μmol/L 冬凌草甲素对其进行处理,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3、PARP及Akt、p-Akt、p-GSK3β表达的变化。结果: 冬凌草甲素作用MDA-MB-231细胞24 h后,可观察到细胞凋亡的形态学改变,以24 μmol/L组最为明显。实验组与对照组相比,细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高(P<0.01),具有时间和剂量依赖性,凋亡相关蛋白procaspase-3下调,caspase-3底物PARP被逐步剪切,并伴随p-Akt、p-GSK3β蛋白水平下调(P<0.05)。结论: 冬凌草甲素可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的抑制有关。     

柚皮素通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭、诱导凋亡作用的研究

目的:探究柚皮素（NAR）通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的机制。方法:体外培养卵巢癌细胞,并分为空白组、低剂量柚皮素组、中剂量柚皮素组和高剂量柚皮素组;使用柚皮素预处理后,检测NAR对卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响情况;检测细胞侵袭迁移及凋亡相关蛋白和PI3K/AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达情况。结果:使用柚皮素处理后,各组卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭受到显著抑制,凋亡受到显著促进,且对柚皮素呈剂量依赖性。相比空白组,使用柚皮素各组PCNA、Bcl-2、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白水平显著降低（P<0.01）,Bax、Caspase-3、E-cadherin、PI3K蛋白表达水平及AKT、p65磷酸化水平显著升高（P<0.01）,且随着柚皮素使用剂量的增加呈剂量依赖性,总AKT蛋白表达无显著变化（P>0.05）。结论:NAR可能通过抑制EMT及PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭能力,并促进卵巢癌细胞的凋亡,在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

岩大戟内酯B通过阻断PI3K/Akt/NF-κB通路抑制结肠癌细胞的增殖和转移

目的：研究岩大戟内酯B（JB）对结肠癌HT-29细胞增殖和转移的抑制作用及其作用机制。方法：用不同浓度JB处理HT-29细胞,采用MTT法检测细胞增殖率;平板克隆实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞周期变化;划痕实验分析细胞的迁移能力;Transwell小室实验研究细胞的侵袭能力;免疫荧光法和Western blotting法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白vimentin、锌指蛋白（Snail）1、Snail2、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白的表达;Western blotting法检测p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、NF-κB P65、p-NF-κB P65蛋白表达水平。100 μg/L IGF-1组和100 μg/L IGF-1+20 μmol/L JB组分别处理HT-29细胞,Western blotting法检测PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白表达变化。结果：JB抑制HT-29细胞增殖作用浓度依赖性,其作用24 h的IC50为52.68 μmol/L;JB呈浓度依赖性地降低HT-29细胞的克隆形成率（P<0.05）;与对照组相比,JB处理后的HT-29细胞G0/G1期比例显著增高,S期细胞比例明显下降;JB可显著抑制HT-29细胞的体外迁移、侵袭能力（P<0.05）;JB作用后的HT-29细胞E-cadherin蛋白水平升高,vimentin、Snail1、Snail2、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB P65蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;IGF-1+JB组p-PI3K、p-Akt、与p-NF-κB P65蛋白的表达水平较IGF-1组显著下降（P<0.05）。 结论：JB在体外能抑制HT-29细胞增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,抑制HT-29迁移和侵袭,调控上皮-间质转化（EMT）及MMPs,其机制可能与阻断PI3K/Akt/NF-κB通路有关。     

南赤瓟醇提物通过PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡

目的: 研究南赤瓟醇提物影响PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用机制。方法: 用南赤瓟醇提物(0.062 5、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/mL)作用Caski细胞 24 h 后,检测其对细胞增殖的影响;然后用南赤瓟醇提物(0.25、0.50 和 1.00 mg/mL)作用Caski细胞 24 h 后,流式细胞术测定细胞周期DNA含量及亚G₁凋亡峰,ELISA试剂盒检测Caski细胞中Caspase-9和Caspase-3活性及线粒体和胞浆中细胞色素C（Cyt C）含量,Real-time PCR测定P53、Bcl 2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2/Bax比值,Western blot测定PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平(p-PI3K、p-Akt、p-mTOR),并计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR比值。结果: 南赤瓟醇提物对Caski细胞生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.25、0.50 和1.00 mg/mL)能显著抑制Caski细胞增殖,并将其阻滞于G₂/M期;可抑制p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平,降低p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR比值;上调P53和Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA及Bcl-2与Bax比值;降低线粒体中Cyt C含量,升高胞浆中Cyt C含量;增强Caspase-9和Caspase-3活性(P<0.05, P<0.01)。结论: 南赤瓟醇提物诱导Caski细胞凋亡的作用机制与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路磷酸化有关。     

胰岛素通过PI3K/AKT及PI3K/ERK通路减轻脂多糖对钠泵α1亚基的抑制

目的:研究胰岛素减轻脂多糖对肺泡II型上皮细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达抑制的分子机制。方法:以A549细胞为研究对象,脂多糖（1 μg/mL）诱导8 h后,再加用胰岛素（100 nmol/L）处理4 h,采用Western blot法检测Na+-K+-ATPase α1亚基表达及AKT、ERK1/2、p70s6k、NEDD4-2总蛋白表达及其磷酸化水平变化。结果:A549细胞在1 μg/mL脂多糖作用下,Na+-K+-ATPase α1亚基蛋白表达显著降低。胰岛素处理可部分解除脂多糖对A549细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达的抑制。胰岛素上调Na+-K+-ATPase α1亚基表达是通过改变PI3K/AKT及PI3K/ERK通路中关键蛋白AKT、NEDD4-2、ERK1/2、p70s6k的磷酸化水平来实现的。结论:胰岛素通过调控PI3K/AKT及PI3K/ERK通路部分解除脂多糖对肺泡II型上皮细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达的抑制,这为临床上采用胰岛素干预急性呼吸窘迫综合征提供了初步实验依据。     

珠子参皂苷通过激活 PI3K/Akt通路对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的: 研究珠子参皂苷对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法:雄性昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、珠子参皂苷(100 mg/kg)、珠子参皂苷(200 mg/kg)和尼莫地平组(2 mg/kg)。给药组灌胃给予相应的药物,假手术组和模型组灌胃给予同体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,连续7 d。以上各组给药7 d后制作小鼠大脑中动脉闭塞模型,假手术组切开缝合不进行动脉阻塞,在缺血2 h再灌注24 h后进行神经功能缺损评分、脑水肿、梗死面积和脑组织形态学分析,血液中ROS、LDH、SOD、GSH-Px、CAT和MDA的水平检测,Western blot检测脑组织中p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、Cytochrome C、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白表达。结果:珠子参皂苷(100和200 mg/kg)和尼莫地平(2 mg/kg)可显著改善脑缺血再灌注损伤小鼠神经功能缺损评分、脑水肿、梗死面积和脑组织形态学,降低血清ROS、LDH和MDA水平,升高SOD、GSH-Px、CAT活性,上调脑组织中p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达和升高Bcl-2/Bax比率,下调Bax、Cytochrome C、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白表达。结论:珠子参皂苷对小鼠缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,其作用机制可能与其激活PI3K/Akt通路和抑制线粒体介导的凋亡通路有关。     

车前子提取物通过调控PI3K/AKT通路改善糖尿病大鼠神经源性膀胱病的作用研究

目的:探讨车前子提取物对糖尿病大鼠神经源性膀胱病的改善作用以及对PI3K/AKT通路的影响。方法:选取50只7周龄的SD大鼠,随机分为5组：对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只,非对照组的4组进行糖尿病神经源性膀胱病的造模,观察4周,记录血糖、食量、尿量、饮水量、体质量等变化。造模完成后,低、中、高剂量组分别接受由低到高相应浓度为0.1、0.4、1.6 mg/mL的车前子提取物进行治疗,观察第5到第9周的血糖变化,第8和第9周的代谢以及第9周尿动力学指标的变化。荧光定量PCR和Western blot法检测PI3K/AKT通路相关基因的表达情况。结果:与对照组相比,模型组从造模后第1周开始血糖含量高于对照组（P<0.05）,随后的3周血糖含量仍然高于对照组（P<0.05）。在第3周和第4周模型组的食量、饮水量和尿量均高于对照组（P<0.05）,体质量从第1周开始低于对照组（P<0.05）。第9周的时候中、高剂量组的血糖水平恢复到正常水平,与对照组比较无统计学差异（P>0.05）,高剂量组在食量、饮水量、尿量以及尿动力学方面已趋近于正常水平,与对照组比较无统计学差异（P>0.05）。与对照组相比,模型组、低剂量组和中剂量组的PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT的表达量均较低（P<0.05）,高剂量组与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。结论:一定剂量的车前子提取物可以调节PI3K/AKT通路中相关因子的表达,对糖尿病大鼠神经源性膀胱病有明显的改善作用。     

Delicaflavone通过PI3K/AKT/mTOR通路调控上皮-间质转化抑制吉非替尼耐药肺癌PC-9/GR细胞迁移和侵袭

目的：研究Delicaflavone对人吉非替尼耐药肺癌PC-9/GR细胞迁移与侵袭作用及机制。方法：采用MTT法检测Delicaflavone对PC-9/GR细胞存活率的影响;采用细胞划痕实验和Transwell实验测定Delicaflavone对PC-9/GR细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Western blotting法检测Delicaflavone对PC-9/GR细胞基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9, MMP-9）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinases 2, MMP-2）、钙黏连蛋白（E-cadherin, N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果：与对照组比较,20 mg/L Delicaflavone作用24 h能显著抑制PC-9/GR细胞的细胞活性（P<0.05）,而浓度在10 mg/L以下时则对细胞活性无明显影响。Delicaflavone能够浓度依赖性地抑制PC-9/GR细胞的迁移率、侵袭细胞数量（P<0.05和P<0.01）,并能浓度依赖性地减少PC-9/GR细胞迁移标记蛋白（MMP-9和MMP-2）的表达（P<0.01）,上调E-cadherin、下调N-cadherin和Vimentin的表达（P<0.01）。此外,Delicaflavone还浓度依赖性地减少p-PI3K、p-Akt和p-mTOR表达（P<0.01）。 结论：Delicaflavone具有抑制PC-9/GR细胞迁移及侵袭能力的作用,该作用与Delicaflavone通过PI3K/Akt/mTOR通路调控上皮-间质转化有关。     

芍药苷通过PI3K/AKT/m-TOR信号途径抑制肥大细胞活化脱颗粒

目的: 研究芍药苷（paeoniflorin,Pae）对肥大细胞（P815）活化及脱颗粒的影响,并探索其作用机制。方法: CCK-8法评价Pae的细胞毒性,ELISA法及显色法测定Pae对P815释放组胺和β-氨基己糖苷酶（β-HEX）及IL-1β、IL-4、IL-8、IL-12的影响。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测上述炎症因子及蛋白酶激活受体（PARs）在mRNA水平上的表达。Western blot测定磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶体蛋白（m-TOR）的磷酸化水平。结果: 当芍药苷的浓度为1,10,100 μg/mL时对P815无毒性,且能有效抑制组胺、β-HEX的释放及IL-1β、IL-4、IL-8、IL-12的分泌,并降低PARs的表达。Western blot显示,Pae能抑制PI3K、AKT、m-TOR的磷酸化。结论: Pae可能通过抑制PI3K/AKT/m-TOR信号通路实现对肥大细胞活化及脱颗粒的抑制作用。     

联用芝麻素和维生素E抑制PI3K/AKT信号通路改善自发性高血压大鼠的左室纤维化

目的：观察芝麻素（Ses）和维生素E（VitE）联用对自发性高血压大鼠（SHRs）左心室纤维化的影响,并探讨其可能机制。方法：14周龄雄性SHRs随机分为Ses和VitE联用组（160+10 mg·kg-1·d-1、Ses组（160 mg·kg-1·d-1）、VitE组（10 mg·kg-1·d-1）及SHRs组,另设正常对照WKY组,每组7只,1次/d持续灌胃给药10周。采用尾袖法测定大鼠给药前和给药10周后的收缩压。末次给药后取左心室,计算脏器指数,Masson染色观察胶原沉积,分析心肌胶原容积分数（CVF）,Western blot 观察Ⅰ型胶原（collagenⅠ）、Ⅲ型胶原（collagen Ⅲ）、转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸肌醇3激酶（PI3K）蛋白的表达。结果：SHRs+Ses+VitE组的收缩压、HW/BW、LVW/HW、CVF明显下降,且下降幅度分别高于SHRs+Ses和SHRs+VitE组（P<0.01或P<0.05）。SHRs+Ses+VitE组的collagenⅠ、collagen Ⅲ、TGF-β1、CTGF、MMP-9、TIMP-1、p-AKT和PI3K蛋白表达明显下降,且下降幅度分别高于SHRs+Ses和SHRs+VitE组（P<0.01或P<0.05）。 结论：联用芝麻素和维生素E通过抑制AKT/PI3K信号通路的激活,减少TGF-β1、CTGF、MMP-9及TIMP-1表达,从而发挥降压和改善左心室纤维化的作用。     

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的：比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法：不同浓度顺铂（cisplatin, DDP）干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）表达水平;应用10 μmol/L顺铂（相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC50值）干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3）、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白（p-FOXO3a）表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1（Baf A1）干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A549及A549/DDP细胞Akt、p-Akt及自噬相关蛋白表达水平,以探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。结果：与亲本A549细胞相比,获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞具有更强的顺铂耐药性及较高的基础自噬水平。在10 μmol/L顺铂压力下,A549/DDP细胞存活率明显高于A549细胞;A549细胞中,顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达水平,下调Bcl-2表达、促进Bax及Cleaved Caspase-3活性片段表达增加,诱导细胞凋亡;A549/DDP细胞中,相同浓度的顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调Beclin 1及LC3Ⅱ表达、下调p62表达,促进细胞保护性自噬,使耐药细胞获得生存活性。 结论：顺铂诱导亲本A549细胞凋亡可能与抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达有关;A549/DDP细胞顺铂耐药表型的获得可能与顺铂抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调细胞保护性自噬相关。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠诱导的肝细胞凋亡的机制研究

目的: 探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠（GCDC）诱导的人肝正常细胞HL-7702增殖、凋亡的影响。方法: 将HL-7702细胞分为对照组、GCDC组（1 mmol/L的GCDC预处理细胞4 h）、GCDC+LY294002组（GCDC处理细胞4 h后,使用15 μmol/L的LY294002处理细胞24 h）和GCDC+IGF-1组（GCDC处理细胞4 h后,使用20 nmol/L的IGF-1处理细胞24 h）。处理结束后,通过Western blot检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、Bcl-2、Bax和Nrf2蛋白表达;MTT法及Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖和凋亡率;DCFH-DA探针法检测细胞活性氧（ROS）含量。结果: GCDC可明显下调HL-7702细胞PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bcl-2和Nrf2表达,上调Bax表达,抑制细胞增殖,诱导凋亡,诱导细胞ROS产生（P<0.05）,LY294002可增强GCDC对HL-7702细胞增殖、凋亡、ROS水平及PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bcl-2、Bax和Nrf2表达影响,IGF-1反之。结论: 激活PI3K/AKT/mTOR信号通路可改善胆汁性肝纤维化,机制可能与抗凋亡和抗氧化有关。     

萝卜硫素介导Akt/p70S6K信号传导诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡

目的:研究萝卜硫素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响及其对Akt/p70S6K信号传导的作用。方法:采用CCK-8实验分析萝卜硫素对CNE-2细胞生长增殖的影响,流式细胞仪检测萝卜硫素对CNE-2细胞凋亡率及细胞周期分布的影响,Western blot技术检测CNE-2细胞中调控细胞周期的相关蛋白及Akt/p70S6K信号通路关键蛋白的表达水平。结果:采用萝卜硫素干预CNE-2细胞后,细胞增殖抑制率及凋亡率相对于对照组呈浓度依赖的方式显著增高,差异有统计学意义（P<0.05）;流式细胞仪分析提示,萝卜硫素干预能够将细胞停留在S期及G2/M期,并且萝卜硫素还能抑制细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E以及CDK/p34的表达水平,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;此外,萝卜硫素还能抑制Akt/p70S6K信号通路关键蛋白p-Akt及p70S6K蛋白表达水平（P<0.05）,但萝卜硫素与Akt激动剂IGF-I共同处理细胞后,上述蛋白表达量与对照组相比没有统计学差异（P>0.05）。结论:萝卜硫素可能通过干扰CNE-2细胞中Akt/p70S6K信号传导而发挥有效的抗增殖及促凋亡的作用。     

桑黄多糖调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制肝癌腹水荷瘤小鼠及对化疗的减毒增效作用

目的:研究桑黄多糖通过调控PI3K/AKT/mTOR通路对肝癌腹水荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用。方法:SPF级雄性昆明种小鼠90只,随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、桑黄多糖组及桑黄多糖+环磷酰胺组。制备肝癌腹水荷瘤小鼠,各给药组分别给予30 mg/kg的环磷酰胺或（和）200 mg/kg的桑黄多糖,灌胃给药。正常组及模型组灌胃10 mL/kg的生理盐水。观察小鼠抑瘤率、肝脏、脾脏等指数、肿瘤组织内VEGF与炎性因子含量、PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达。结果:环磷酰胺组、桑黄多糖组及桑黄多糖+环磷酰胺组小鼠体质量、瘤体质量、肿瘤组织内血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素（IL）-6、PI3K、AKT及mTOR磷酸化水平均低于模型组,IL-1β水平高于模型组;桑黄多糖+环磷酰胺组小鼠体质量、抑瘤率、肿瘤组织内VEGF、TNF-α、IL-6、PI3K、AKT及mTOR磷酸化水平高于桑黄多糖组及环磷酰胺组,瘤体质量及IL-1β水平低于桑黄多糖组及环磷酰胺组(P<0.05)。结论:桑黄多糖联合环磷酰胺可有效抑制肝癌腹水荷瘤小鼠肿瘤的增殖,发挥减毒增效作用,其机制可能与下调PI3K/AKT/mTOR通路的表达有关。