莓实假单胞菌产低温胆固醇酯酶发酵条件优化

为了提高莓实假单胞菌（Pseudomonas fragi）Q-06产低温胆固醇酯酶的能力,在单因素试验基础上,结合Plackett-Burman设计和最陡爬坡试验确定影响酶活的3个显著影响因子为葡萄糖添加量、摇瓶装液量、培养温度,确定最优发酵培养基配方为葡萄糖3.0%,酵母粉1.3%,（NH4）2SO4 0.010%,MgSO4·7H2O 0.050%,KH2PO4 0.400%,运用Design-Expert软件Box-Behnken试验设计对P. fragi Q-06发酵产生甾醇酯酶的培养基条件和发酵条件进行优化。结果表明,最适发酵条件为温度28 ℃,转速180 r/min,接种量4%,初始pH 7.5,装液量80 mL/250 mL。在此最佳条件下,甾醇酯酶酶活由优化前360.00 U/L提高至479.64 U/L,是优化前的1.33倍。海洋微生物发酵甾醇酯酶工业化生产有望创造可观的经济效益,具有潜在的研究开发价值。     

假单胞菌BL11产碱性脂肪酶发酵条件的优化

通过单因素实验和均匀设计对已分离到的一株假单胞菌BL11产碱性脂肪酶的培养基配方和摇瓶发酵条件进行初步优化。优化后的最佳培养基组成为(w/v):麦芽糖2.5%,蛋白胨3.0%,豆油0.5%,K2HPO40.2%;最佳发酵条件为:起始pH7.5,装液量40mL/250mL三角瓶,培养温度33℃,摇床转速180r/min,发酵周期60h。在上述条件下,BL11菌株产脂肪酶酶活可高达223U/mL。      

假单胞菌BL11产碱性脂肪酶发酵条件的优化

通过单因素实验和均匀设计对已分离到的一株假单胞菌BL11产碱性脂肪酶的培养基配方和摇瓶发酵条件进行初步优化.优化后的最佳培养基组成为(w/v):麦芽糖2.5％,蛋白胨3.0％,豆油0.5％,K2HPO40.2％;最佳发酵条件为:起始pH7.5,装液量40mL/250mL三角瓶,培养温度33℃,摇床转速180r/min,发酵周期60h.在上述条件下,BL11菌株产脂肪酶酶活可高达223U/mL.     

两种假单胞杆菌协同发酵产脂肪酶优化和酶性质研究

假单胞菌具有现有微生物中丰富的酶库,目前研究单一的假单胞杆菌发酵产脂肪酶的较多,而忽略了假单胞杆菌协同发酵产脂肪酶的能力。由此本研究选取假单胞菌种中具有代表性的荧光假单胞杆菌和绿脓杆菌作为研究对象,优化假单胞杆菌的协同作用产生高活性脂肪酶的条件。通过对菌种接种比例、碳源、氮源、初始p H值、温度、表面活性剂及发酵时间等进行单因素优化和正交试验获得最适发酵条件。荧光假单胞杆菌和绿脓杆菌最佳接种比例(w∶w)为1.3∶1,最适发酵产酶条件为α-乳糖6 g/L、蛋白胨8 g/L、吐温-80 1%、CaCl_20.5 g/L、KH_2PO_46 g/L、Mn SO_40.3 g/L、Na Cl 5 g/L、接种量8%,、初始p H7.5,培养温度32℃、摇床转速150 r/min,在最适发酵条件下,该菌株最大产酶酶活能达到(33.424±0.05)U/m L。荧光假单胞杆菌和绿脓杆菌协同发酵产生的脂肪酶比单一的荧光假单胞杆菌和单一的绿脓杆菌具有较高的单位酶活性催化合成单甘酯能力,具有良好的应用前景。     

施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri产卡拉胶酶液体发酵条件优化

以从红树林底泥中分离筛选的施氏假单胞（Pseudomonas stutzeri）为对象，采用单因素和正交实验方法，通过摇瓶发酵方式对其产卡拉胶酶发酵条件进行了研究。得到最佳培养基配方和培养条件分别如下：卡拉胶0．3‰，酵母浸粉0．1‰，NaNO30．3‰，乳糖0．04％，吐温-800．2‰；起始pH值6．0，温度32℃，装样量90mL／250mL，接种量13％，摇床转速160r／min。在最佳条件下，发酵液的酶活力为26．5U／mL，比优化前的活力提高了80％。     

产谷胱甘肽荧光假单胞菌发酵条件的优化

方法:在实验室前期工作中,分离得到一株可生产谷胱甘肽(GSH)的荧光假单胞菌BJYG12,在单因素的基础上,通过正交试验对该菌株发酵生产GSH的条件进行了优化。结果:发酵温度28℃,初始pH 7.5,接种量5%,培养基含酵母膏25g/L,蔗糖15g/L,KH_2PO_4 1.5g/L,MgSO_4 2.5g/L,优化发酵条件后,菌株产GSH的能力增长了15.7%。     

产木聚糖酶霉菌发酵条件优化及酶学性质研究

通过透明圈比较法从土壤中筛选出产木聚糖酶的菌株36株,以玉米芯为唯一碳源进行液体摇瓶发酵,对其中一株产酶水平较高的霉菌FH2213进行发酵条件的优化并对粗酶液的性质进行初步研究。采用Setp-by-step单因素试验法,获得FH2213产木聚糖酶的最佳发酵培养条件:碳源为玉米芯(15 g/L),氮源为酵母膏(15 g/L),初始pH为3.0,培养温度为30℃。在最适培养条件下发酵5 d木聚糖酶活达200 U/mL。FH2213产木聚糖酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH为5.4。另外,SDS-PAGE和酶谱分析结果表明该菌产生3种木聚糖酶,分子量约为20.4,21.7以及34.3 kDa。     

黄孢原毛平革菌低温产酶条件优化及酶学性质研究

以酶活力为评价指标,对白腐真菌产酶条件进行优化,并对其部分酶作用特性进行了研究.结果表明:该菌10℃条件下产LiP、MnP和Lac的最佳碳源是葡萄糖;最佳氮源是牛肉膏;最佳培养时间为72h～108h.LiP、MnP和Lac的最适反应pH值范围均为4.4～4.8,最适底物浓度为0.8 mmol/L～1.2mmol/L;金属离子Cu2+、Ca2+ 对LiP、MnP和Lac有激活作用,Fe2+ 对3种酶活有一定的抑制作用;而Na+ 则完全抑制LiP的活性,Zn2+、Mg2+对3种酶活影响不大.     

恶臭假单胞菌产羰基还原酶的发酵条件优化

从土样中筛选得到一株产羰基还原酶的菌种恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)ZJPH1606,该菌能不对称催化2′-三氟甲基苯乙酮合成(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇,对映体过量值超过99.0%.通过单因素考察产酶培养基组成发现:葡萄糖、牛肉膏和MgSO4·7H2 O对酶活的影响较为明显,进一步采用响应面法对产酶培养基进行了优化.结果表明:最优发酵培养基组成为葡萄糖38.5g/L,牛肉膏32.7g/L,MgSO4·7H2O1.1g/L.在最适培养条件下,菌体酶活力达0.31U/g,较优化前提高了71.0%.该研究结果丰富了羰基还原酶数据库的基因序列,为高效合成(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇提供了新途径.     

交替假单胞菌H_7产甲壳素酶发酵条件的研究

系统地研究了氮源、起始pH、培养基装量、培养温度和时间等因素对交替假单胞菌H7产甲壳素酶的影响。通过正交实验对H7的发酵条件进行了优化,最佳发酵条件为:培养温度37℃,起始pH7.0,底物浓度0.1%,装瓶量125mL。优化后菌株H7的酶活力由原来的0.59U/mL提高至0.69U/mL。     

产胆固醇酯酶毕赤酵母发酵条件优化及酶学性质研究

为实现胆固醇酯酶的高效发酵,以成功表达的毕赤酵母工程菌株P.pastoris X-33为研究对象,通过单因素和正交试验对其发酵条件进行优化。结果表明:最适培养基组成为:酵母浸粉含量1.0%、蛋白胨浓度1.5%、甘油含量1.0%、KH₂PO₄ 1.18%、K₂HPO₄ 0.3%、生物素4×10-5%、YNB 1.34%;在初始pH7.0,30 ℃发酵96 h条件下,酶活力可达11.21 U/mL,较于优化前提高了3.65倍。酶学性质结果显示,该酶最适pH和最适反应温度分别为8.0和50 ℃,Zn2+对酶有较强的抑制性。该胆固醇酯酶酶学性质较为稳定,可为今后的规模化应用提供技术基础。     

恶臭假单胞菌产精氨酸脱亚胺酶发酵条件及特性的研究

对恶臭假单胞菌N0705产精氨酸脱亚胺酶的发酵条件及部分酶学性质进行了研究.结果表明,在培养温度28℃,培养基初始pH值为6.6,接种量4%,装液量40mL/250mL,发酵时间50h时,精氨酸脱亚胺酶酶活最大.精氨酸脱亚胺酶发酵粗酶液在温度37℃及pH 6.0～7.0时有较好的稳定性.     

Burkholderia sp.JXJ-16低温耐有机溶剂脂肪酶产酶条件优化及粗酶酶学性质

以Burkholderia sp.JXJ-16为出发菌株,对其低温耐有机溶剂脂肪酶的产酶条件进行单因素实验并研究其粗酶酶学性质。该菌株的最佳产酶条件为:蔗糖3.75 g/L、尿素11.25 g/L、K₂HPO₄2 g/L、（NH4）2SO₄1 g/L、Mn SO₄0.25 g/L、猪油乳化液体积分数2.5%,初始p H9.0、培养温度30℃、装样量20 m L/250 m L、接种量3%、发酵时间20 h。JXJ-16脂肪酶粗酶对中链对硝基苯酚酯有最大水解活力,最适底物为对硝基苯酚辛酸酯;该粗酶在35℃、p H8.5⁹.0时酶活力最高,且具有较好的温度（30⁶0℃）和p H（5.0¹0.5）稳定性;Na⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Mn²⁺、EDTA对粗酶活力具有激活作用,Zn²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺对粗酶活力具有抑制作用,K⁺对粗酶活力没有显著性影响;除乙醇和乙腈外,该粗酶在一定体积分数的异丙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷、二甲苯和正己烷中具有良好耐受性,且处于激活状态。综上,该菌株能利用廉价易得的培养基原料达到最佳产酶效果,其所产脂肪酶为低温碱性脂肪酶,具有较好的温度和p H稳定性,对多数供试有机溶剂具有良好耐受性。      

Burkholderia sp.JXJ-16低温耐有机溶剂脂肪酶产酶条件优化及粗酶酶学性质

以Burkholderia sp.JXJ-16为出发菌株,对其低温耐有机溶剂脂肪酶的产酶条件进行单因素实验并研究其粗酶酶学性质。该菌株的最佳产酶条件为:蔗糖3.75 g/L、尿素11.25 g/L、K_2HPO_42 g/L、(NH4)2SO_41 g/L、Mn SO_40.25 g/L、猪油乳化液体积分数2.5%,初始p H9.0、培养温度30℃、装样量20 m L/250 m L、接种量3%、发酵时间20 h。JXJ-16脂肪酶粗酶对中链对硝基苯酚酯有最大水解活力,最适底物为对硝基苯酚辛酸酯;该粗酶在35℃、p H8.5~9.0时酶活力最高,且具有较好的温度(30~60℃)和p H(5.0~10.5)稳定性;Na~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)、Mn~(2+)、EDTA对粗酶活力具有激活作用,Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)对粗酶活力具有抑制作用,K~+对粗酶活力没有显著性影响;除乙醇和乙腈外,该粗酶在一定体积分数的异丙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷、二甲苯和正己烷中具有良好耐受性,且处于激活状态。综上,该菌株能利用廉价易得的培养基原料达到最佳产酶效果,其所产脂肪酶为低温碱性脂肪酶,具有较好的温度和p H稳定性,对多数供试有机溶剂具有良好耐受性。     

根霉ZZ-3脂肪酶发酵条件的优化及酶学性质研究

对根霉ZZ-3脂肪酶产酶条件的优化及脂肪酶酶学性质进行了研究。结果表明,250 mL三角瓶液体培养,培养基装液量100 mL,根霉ZZ-3产脂肪酶的最佳培养基为：黄豆粉3 g/100mL,（NH4）2S040.3 g/100mL,MgS04 0.2 g/100mL,K2HPO4 0.2 g/100mL,花生油0.3 g/100mL,pH自然。在温度28℃、转速150 r/min,摇床培养时间2 d,发酵酶活力达到124.60 U/mL。对该酶的酶学性质进行了初步研究,该酶最适pH7.5,最适反应温度37℃,在pH7～9、温度低于40℃条件下酶活稳定。     

短蛸产蛋白酶菌的鉴定、发酵条件优化及酶学性质

采用生理生化特征、16S r DNA分析的方法对分离自短蛸胃肠道产蛋白酶菌株S-3进行鉴定。通过单因素试验、正交设计优化发酵产生蛋白酶条件,对产蛋白酶的粗酶性质进行研究。结果表明,菌株S-3与灿烂弧菌最相似,在以淀粉0.5%,蛋白胨0.5%,酵母膏0.1%,磷酸高铁0.1%为最佳培养基,初始p H 8.0,接种量7%,20℃发酵3.5 d时产蛋白酶活性最高,即121.1 U/m L。所产粗蛋白酶最适作用p H 9.0,最佳作用温度50℃,具有较高的热稳定性及p H稳定性,这为蛋白酶的工业应用提供了理论依据。     

假单胞菌B41产果胶酶发酵条件的研究

对假单胞菌B41发酵产果胶酶培养基和发酵培养条件进行了优化。经单因素和正交试验得到最优发酵培养基组成为桔皮粉20．0g／L,蛋白胨10．0g／L,FeSO40．5g／L,初始pH值5．5。最佳发酵条件为装液量50mL,接种量2％,发酵温度30％,发酵时间32h。在此优化条件下,果胶酶活力为739U／mL。     

假单胞菌脂肪酶非水相催化性质

以丁酸与丁醇的酯化为模型反应，研究了假单胞菌脂肪酶的非水相催化性质。有机相中酶的催化作用需要一定的水分，最适水含量因溶剂的不同而有所差异。通常，极性强的溶剂其最适水含量高；当以水活度衡量时，各溶剂间的差别消失，最适水活度均在０．５～０．６之间。有机溶剂中酶的热稳定性较水溶液中明显提高，在环己烷中８０℃保温６ｈ酶活力仍保留约８０％；连续使用５次，酶活损失不到１０％．在环己烷中酶的最适作用温度为５０℃，比水溶液中略高；最适作用ｐＨ为９．０，与水溶液中相近。     

褶皱假丝酵母产脂肪酶条件及酶学性质研究

对一株来源于海洋有产脂肪酶能力的褶皱假丝酵母产酶条件进行研究,探讨了碳源、氮源、pH、培养温度对该菌产脂肪酶的影响。结果显示:在摇瓶培养条件下,其最适产酶条件为:蔗糖5 g/L,橄榄油5 g/L,MgSO4·7H2O1 g/L,K2HPO41 g/L,(NH4)2SO410 g/L,起始pH为7.0,接种量10%,在30℃、200 r/min下培养36 h,产酶能力达到4 351.6 U/mL。该菌所产脂肪酶的最适反应pH为7.0,最适反应温度为37℃,Ca2+、Mg2+对酶活有一定的促进作用。     

平菇产木聚糖酶固态发酵条件优化和酶学性质研究

利用平菇(Pleurotus ostreatus)降解甘蔗渣固态发酵生产木聚糖酶,通过单因素和正交实验确定最佳培养基组分及其配比,并对其粗酶的酶学性质进行了研究。结果表明:碳源为甘蔗渣8g∶玉米芯2g,氮源为2.0%酵母膏,pH为4,料水比为1∶3.2,装瓶量为5g/125mL三角瓶,培养10d时,得到的酶活力最高,产酶量可达2918.95U/g。粗酶液的最适反应pH为5,最适反应温度为40℃,在pH4～6的范围内酶活性较稳定。温度的适应性较宽,在30～70℃的范围里,相对酶活仍保持在65%以上。