高效降解生物胺乳酸菌的筛选、鉴定及特性研究

为获得高效降解生物胺的乳酸菌，以鱼露为试验原料，从鱼露中分离纯化并筛选具有高效降解4种常见生物胺活性的菌株，通过形态观察、碳源利用和分子生物学鉴定，该菌株，并研究其生长和生物胺降解特性。结果表明，共筛选得到8株生物胺降解菌株，其中最佳生物胺降解菌为FSCBAD033，该菌株被鉴定为发酵柠檬乳杆菌（Limosilactobacillus fermentum）。该菌株可以降解86.4%腐胺、78.5%尸胺、72.3%组胺和100%酪胺，且在含有前体氨基酸的培养基中不积累该四种生物胺。菌株FSCBAD033的最适生长温度、初始pH值和NaCl含量分别为40 ℃、6和3%，其在温度30～40 ℃、初始pH值5～7、NaCl含量不超过6%的范围内降解生物胺能力较高（四种生物胺降解率均＞50%）。     

一株嗜高温菌产甘油的特性研究及其发酵条件优化

目的：通过筛选一株高产甘油细菌，为使用细菌生产甘油提供科学依据。方法：以黑松的根系土壤为样本，通过富集培养、分离纯化与耐高温试验，筛选获得一株嗜高温菌株，对其进行菌株鉴定、形态学观察、生理生化鉴定、生长曲线测定以及单因素轮换法发酵条件初步优化。结果：结合透射电镜观察及16S rDNA序列分析，鉴定该菌株为嗜热嗜气解硫胺素芽孢杆菌(Aneurinibacillus thermoaerophilus);生长曲线显示，在0～6 h为生长延迟期、6～21 h为对数生长期；生理生化鉴定，确定其有较优甘油生产功能，其最佳发酵条件为pH 7.0、2%葡萄糖、15‰盐度、6%接种量、温度50℃。结论：该菌株产甘油发酵条件较酵母等真菌具有更高效率。     

牛蒡根内生固氮菌分离、鉴定及培养条件优化的研究

通过改良阿斯贝（Ashby）无氮培养基和乙炔还原法从牛蒡根内分离筛选出固氮能力较强的菌株，通过形态观察及分子生物学技术对其进行鉴定，并通过响应面法对其培养条件进行优化。结果表明，筛选出一株固氮能力较强的菌株NF-112，初步鉴定为肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae），其最优培养条件为初始pH值5.3、培养温度28 ℃、葡萄糖添加量26 g/L。在此最优培养条件下，OD600 nm值为1.76。该研究为药用植物牛蒡专用生物有机肥制备奠定理论和技术基础。     

高产四甲基吡嗪的菌株筛选及其麸曲制作工艺优化

为提高酱香型白酒中四甲基吡嗪含量，该研究从高温大曲中筛选高产四甲基吡嗪的菌株，通过形态观察及分子生物学技术对筛选菌株进行菌种鉴定，并将筛选菌株制作成细菌麸曲，结合单因素试验和响应面法对影响麸曲芽孢数量的四个因素：水分含量、接种量、培养时间、培养温度进行优化。结果表明，筛选得到一株高产四甲基吡嗪的菌株B2，经鉴定其为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。菌株B2麸曲的最佳培养条件为水分含量58%、接种量3.4%、培养时间40 h、培养温度37℃。此优化条件下制得的麸曲芽孢数量为1.21×10¹⁰ CFU/g。固态发酵6 d后四甲基吡嗪产量为0.98 mg/g，表明该麸曲具有一定的产四甲基吡嗪性能。     

高产蛋白酶菌株的分离、鉴定及酶学性质研究

该研究旨在从非传统环境（磷矿）中分离、筛选高产胞外蛋白酶菌株，对菌株进行形态学观察、生理生化和分子生物学鉴定，并研究其蛋白酶的酶学性质。结果表明，分离筛选到一株蛋白酶高产菌株，编号为PB5，该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），该菌株产胞外蛋白酶活力为562.3 U/mL，胞外蛋白酶的最适pH值为10，在pH 7～10有较好的pH稳定性；最适温度为60 ℃，20～50 ℃时有较好的稳定性；Na+、Mg2+、Mn2+、K+对蛋白酶活力有明显的促进作用；Fe2+、Ag+、乙二胺四乙酸（EDTA）、苯甲基磺酰氟（PMSF）、十二烷基硫酸钠（SDS）对蛋白酶活力有明显抑制效果。     

原料乳中产耐高温蛋白酶菌株的筛选与鉴定

从原料乳中分离筛选产耐高温蛋白酶菌株,经酪蛋白水解圈实验,筛选出10株产蛋白酶的菌株.在此基础上,通过蛋白酶耐热性比较,筛选出一株产耐高温蛋白酶菌株,并通过菌落形态观察、生理生化试验、核酸特征分析;K16S rKNA基因序列测定等对该菌株进行鉴定.BLAST比对构建该菌株系统发育树,最终鉴定该菌株为荧光假单孢杆菌.     

纤维素酶高产菌筛选鉴定及酶学性质初步研究

该研究从土壤中筛选出一株纤维素酶高产菌株SP08,并通过菌落形态特征和ITS测序技术对菌株进行鉴定,最后通过酶促反应初步测定了该菌所产纤维素酶的性质。结果表明,筛选得到菌株SP08,经鉴定为康氏木霉（Trichoderma koningii）,该菌株具有较高的纤维素酶产酶能力,培养60 h时纤维素酶活性即达（18.54±0.75）,72 h时酶活达到最高（19.18±0.68）U/mL。酶学研究表明,菌株SP08所产纤维素酶最适温度和pH分别为50 ℃和5.5,在20～50 ℃及pH4.0～6.0时稳定性较高;Mg2+、Mn2+和Ca2+能够提高该酶活性,而Fe2+和Cu2+却对该酶具有抑制作用。     

耐高温蛋白酶产生菌的筛选及酶学特性的初步研究

为了提供可用于水产饲料添加剂用途的蛋白酶,从玛珥湖环境中筛选出耐高温蛋白酶产生菌株。通过牛奶平板筛选的方法从土壤中分离获得30株产蛋白酶菌株,并通过摇瓶发酵复筛的方法筛选产酶最高的菌株HL-3,其发酵液的蛋白酶活性高达399.2 U/m L。通过生理生化特征鉴定、16S r DNA基因序列和系统发育分析,初步鉴定菌株HL-3为地衣芽孢杆菌。菌株HL-3所产蛋白酶的最适作用温度为70℃,最适p H为7.0,在90℃保温10 min后酶活力仍可保留75.12%。在离子浓度为1.0×10~(-3)mol/L时,Cu~(2+)和Mn~(2+)对该酶有较强的抑制作用,Fe~(2+)、Zn~(2+)、Ca~(2+)对该酶有激活作用,Mg~(2+)和K~+对该酶活性几乎没有影响。预期该菌株产的蛋白酶具有用于水产饲料添加剂的潜力。     

酱香大曲中高温放线菌的筛选及其产蛋白酶条件优化

该研究从酱香大曲中分离筛选出高产蛋白酶的高温放线菌,对菌株进行形态学观察、生理生化试验和分子生物学鉴定,并通过单因素试验和正交试验研究其产蛋白酶的最适条件。结果表明,分离筛选到一株高产蛋白酶菌株,经鉴定,该菌株为普通高温放线菌（Thermoactinomyces vulgaris）。该菌株产蛋白酶的最优条件为pH 6.5,发酵温度45℃,发酵时间5 d,在此条件下,蛋白酶活力最高,为214.99 U/g,这对酱香大曲中酱香风味物质形成的研究有一定的参考意义。     

赊店老酒酒醅中高产纤维素酶菌种的分离鉴定及产酶条件优化

从赊店老酒酒醅中采用透明圈法筛选产纤维素酶的菌株,经过酶活力测定筛选出产纤维素酶能力最强的菌株,对其进行了形态学观察、生理生化试验和分子生物学鉴定,并通过单因素和响应面试验考察了不同条件对该菌株产纤维素酶能力的影响。结果表明,筛选得到产纤维素酶能力最强的菌株4-2,并被鉴定为特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）。在液体发酵培养基中,该菌株最优产纤维素酶的条件为淀粉添加量3.5%,酵母粉添加量0.6%,初始pH 5.8,培养时间5 d,培养温度34 ℃。此优化条件下,该菌株产纤维素酶活力达3 101.83 U/mL,是优化前的20.69倍。     

一株产低温蛋白酶菌株的筛选、鉴定及生长特性的研究

以新疆阿勒泰地区的冻土为原材料,采用平板分离法初筛,测蛋白酶活性法复筛,筛选出9株低温蛋白酶产生菌株,其中菌株A29-2蛋白酶活性最高,为31.88U/mL,且该菌在初始pH 7.0,NaCl质量分数为1.00%,22℃条件下繁殖量最大。通过形态学观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列鉴定,鉴定为:该菌属于沙雷氏菌(Serratia sp.),该菌株所产的蛋白酶在4℃条件下保存48h,酶活力基本保持不变,表明该低温耐冷菌所产的蛋白酶为低温酶。     

产果胶酶菌株的分离鉴定及其产酶条件优化

为丰富高效产果胶酶的微生物种质资源，该研究采用刚果红染色法从采自菠萝地的土样中分离产果胶酶微生物，通过测定菌株产果胶酶能力对其进行筛选，并对其进行形态学鉴定、生理生化特征分析和分子生物学鉴定，最后通过单因素和响应面试验设计对其发酵产酶条件进行优化。结果表明，经初筛与复筛得到一株产果胶酶酶活最高的菌株XW-18，经鉴定，该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。其最佳产酶条件为：蔗糖添加量40 g/L，蛋白胨添加量20 g/L，发酵温度30℃，培养基初始pH 7.0，在此最佳条件下，所产的果胶酶活力达到（1 804.32±55.28）U/mL。     

酱香型大曲中一株产香芽孢杆菌的分离鉴定

以酱香型白酒高温大曲为材料,采用平板分离法初步筛选出11株芽孢杆菌;通过麸皮培养基在55℃条件下液态发酵,进一步筛选出1株产焦酱香的芽孢杆菌(MT6),并结合菌株生理生化和16S rRNA基因序列对该菌株进行鉴定。结果表明,MT6为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus sp.)。该菌株可制成微生物强化菌剂,初步应用于高温型大曲酒的增香提质。     

海洋源蛋白酶产生菌筛选及酶学特性的初步研究

从海洋源鱿鱼中筛选高产蛋白酶菌株。通过检测蛋白酶产生水解圈结合蛋白酶活性测定的方法筛选高产蛋白酶菌株,采用PCR技术对筛选菌株进行16S rRNA鉴定,并构建目的菌株的系统发育树,同时研究粗蛋白酶的酶学特性。结果表明:筛选得到的10株产蛋白酶活力较高的菌株,经鉴定分别属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、普罗威登斯菌属(Providencia sp.)和假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。其中SW5菌株产酶活性最高达257.67±2.44 U/mL,为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。该菌株所产粗蛋白酶的酶学特性研究发现,其最适pH为8.0,最适温度为40℃,终离子浓度为1 mmol/L时Mn2+、Ba2+和Ca2+对该蛋白酶活性有较高的激活作用,而Fe~(2+)和Zn~(2+)能明显抑制该蛋白酶活性。     

假单胞菌降解含油脂废水的研究

从含油脂污水、污泥中通过驯化筛选得到降解油脂能力强的两株菌，经全自动微生物鉴定仪鉴定两株菌都为假单胞菌：W-1为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)，W-2为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeraginosa)。其中，W-2菌株最适降解条件为pH7．0、温度30℃。实验测得所筛选菌株对油脂化工生产废水有较好的降解能力。     

产碱性果胶酶菌株的筛选和鉴定及其酶学性质

目的:从土壤样品中筛选能够产碱性果胶酶的菌株,并对菌株进行鉴定和果胶酶的酶学性质测定。方法:土壤样品经处理后,涂布于含果胶的平板上,37℃培养48 h后滴加CTAB溶液,挑取产生较大透明圈的菌株,结合菌株的形态特征、生理生化特征和16S r DNA分析鉴定该菌株,并对该菌株所产果胶酶的酶学性质进行研究。结果:筛选到104株产碱性果胶酶的菌株,其中ZGL14酶活力最高,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌。ZGL14所产果胶酶的最适反应温度为50℃,最适反应p H 8.6,在40℃、p H 8~9的条件下保温100 min,仍有80%以上的酶活力,具有较好的耐热性和耐碱性。1 mmol/L Mg2+对该酶的活性有明显的促进作用,Cu2+、Mn2+、Co2+对该酶的活性有较强的抑制作用。结论:筛选到一株具有较好耐碱性和耐热性的产碱性果胶酶的菌株——枯草芽孢杆菌ZGL14。     

基于MALDI-TOF-MS技术筛选及鉴定大曲中芽孢杆菌

该研究对基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱（MALDI-TOF-MS）技术体系进行改进与优化,创新性地引入浓香型大曲中芽孢杆菌（Bacillus）的筛选及鉴定,并结合分子生物学技术对该技术鉴定结果进行验证。结果表明,采用传统微生物培养分离法从大曲中分离得到126株菌株,其中125株通过MALDI-TOF-MS技术筛选鉴定获得9.0以上可信度分值,其中目标菌株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）及地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）的鉴定结果与分子生物学鉴定结果一致,说明该技术历经5～6 d可以准确地完成大曲样品中目标菌株的筛选鉴定,比传统微生物筛选鉴定方法至少节约1～2周时间。因此,基于MALDI-TOF-MS技术参与复杂样品中目标菌株的筛选与鉴定是一条高效的、可行的路径。     

传统牦牛酸奶中产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

采用溶钙圈法对来自青海海南藏族自治区、四川阿坝、甘孜理塘的牦牛酸奶样品的菌株进行分离筛选，采用形态学观察和16S rRNA序列分析进行鉴定；测定筛选菌株上清液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）抑菌活性；考察筛选菌株上清液对蛋白酶的耐受性及对抗生素的敏感性，并确定细菌素种类。结果表明，共分离筛选出6株菌（编号为A1～A2及G1～G4），其中菌株A1～A2被鉴定为嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus），菌株G1～G4被鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）；菌株G3对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌圈直径＞20 mm，且对蛋白酶不耐受，表明该菌株产细菌素，对常见抗生素敏感，经细菌素基因鉴定证实，该菌株产肠球菌素A和肠球菌素P。综上，菌株G3可作为产细菌素益生菌的候选菌株。     

一株产凝乳酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及酶学性质

采用酪蛋白培养基,从甘南牦牛放牧区分离筛选产凝乳酶细菌。通过形态学、生理生化特征和16SrDNA序列同源分析对菌株进行鉴定,并对该菌株所产凝乳酶的特性进行了研究。从牧区采集的56个样品中共筛选得到6株产凝乳酶细菌,复筛得到一株凝乳活力高、蛋白水解力低的菌株GN4.1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),在麸皮培养基中发酵48h,凝乳活力可达1011.56SU/mL,蛋白水解力为14.61U/mL。凝乳酶的最适作用温度为60℃,65℃加热10min后凝乳活力丧失;最适作用pH为5.5,在pH3.5～8.5内稳定性较好。预期该菌株所产凝乳酶有用于乳品加工业的潜力。     

阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)分离鉴定及其对蔬菜中甲萘威农药降解作用的研究

目的 从寒地黑土中筛选甲萘威降解菌,并对筛选得到的菌株进行形态学及16S rDNA分子鉴定,将该菌株用于蔬菜样品中甲萘威农药残留降解规律的研究。方法 从土壤样品中用含甲萘威农药的培养基进行平板稀释法初筛、96孔板法复筛,分别在37℃(1 d)、4℃(6 d)下进行培养,筛选在OD₆₀₀ nm处吸光值高的菌株,即为可利用甲萘威生长的菌株。获得OD₆₀₀ nm为0.906的菌株D7,并对该菌株进行形态学以及分子生物学鉴定。结果 菌株D7经鉴定为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai);菌株D7对所选5种叶菜和5种果菜中残留的甲萘威均有一定降解作用,且对生菜中甲萘威的降解率最高为58.7%。结论 筛选出阿氏芽孢杆菌D7,在低温条件生长良好。为微生物法降解甲萘威提供优良降解菌株,解决蔬菜中甲萘威残留的问题。