一株高产胞外多糖降血糖副干酪乳杆菌JY062(TD062)的黏附性与耐受性评价

以分离自西藏传统发酵乳制品中的副干酪乳杆菌JY062（原副干酪乳杆菌TD062）为试验菌株,测定此菌株的胞外多糖产量、对Caco-2细胞的黏附性以及对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,并分析测定其体外耐受性能。结果表明副干酪乳杆菌JY062的胞外多糖的产量为0.69 g/L,黏附性为91.2%,对α-葡萄糖苷酶的抑制率为57.36%。综合判定副干酪乳杆菌JY062为高产胞外多糖的菌株,此菌株黏附性能好,具有较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性,说明该菌株可以利用其分泌的胞外多糖,提高黏附在宿主肠道的性能,进而发挥降血糖的功能活性。且该菌株具有较高水平的环境耐受能力,是一株具有广阔应用前景的潜在功能性益生菌。     

黔东南地区传统发酵白酸汤中乳酸菌的益生特性及应用

本研究以发酵酸汤为试验原料,通过pH值、胆盐耐受性实验筛选性能优良的乳酸菌,经16S r RNA序列分析鉴定得菌株1-3、1-6、ST-2、ST-11,4 株为副干酪乳杆菌,ST-10和ST-12为植物乳杆菌。通过评价菌株的疏水性、黏附性、自凝聚能力,筛选出了6 株具有益生特性的乳酸菌,其中副干酪乳杆菌1-6和植物乳杆菌ST-10对二甲苯、氯仿的疏水性均大于70%,放置24 h的自凝聚率较其他菌株都较优;不同菌株对抗生素表现出的敏感性、耐药性不尽相同。结果表明：副干酪乳杆菌1-6作为发酵剂添加后对酸汤pH值、总酸度均无显著影响(P＞0.05),但是活菌数与传统老酸汤发酵效果接近。本研究筛选得到的副干酪乳杆菌1-6 是一株性能优良的益生乳酸菌,为后续酸汤发酵益生菌的开发奠定基础。     

植物乳杆菌及其应用研究

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)属于乳杆菌科中的乳杆菌属,革兰氏阳性。植物乳杆菌是人体胃肠道的益生菌群,代谢可以产生有机酸、细菌素、过氧化氢、双乙酞等多种天然抑菌物质,具有维持肠道内菌群平衡,降低胆固醇水平,提高机体免疫力,促进营养物质吸收等多种功能。国外对植物乳杆菌的研究报道比较多。D Fayol Messaoudi等从希腊干酪中分离到一株植物乳杆菌,通过与沙门氏菌的共同培养发现,此菌对沙门氏菌具有强烈的杀死作用。S Rokka等从泡菜中分离到的植物乳杆菌菌株则对幽门螺杆菌有制作用。我国从20世纪50年代开始对益生菌以及与微生态相关的基础理论及应用进行研究,进入21世纪     

抗幽门螺旋杆菌乳酸菌的筛选与益生特性评价

目的:从发酵食品、乳制品和婴儿粪便中筛选具有拮抗幽门螺旋杆菌活性且益生特性良好的乳酸菌。方法:从175份样品中筛选获得39株具有良好遗传稳定性的疑似乳酸菌株,采用体外抑菌圈法和尿素酶活性试验筛选出能抑制幽门螺旋杆菌生长的9株菌,并对其中活性最强的菌株GQ1702和D1进行16S rDNA鉴定。然后,进一步评价其耐酸、耐胆盐、抗生素耐药性、抑菌性能、表面疏水性及自凝集性等益生特性。结果:筛选得到两株拮抗幽门螺旋杆菌的乳酸菌:瑞士乳杆菌GQ1702（Lactobacillus helveticus GQ1702）和植物乳杆菌D1（Lactobacillus plantarum D1）,其发酵产物的抗幽门螺旋杆菌活性分别相当于浓度为0.038 mg/mL和0.034 mg/mL甲硝唑的抑制率。在pH为3的环境中培养3 h后的存活率均大于70%,在含0.3%胆盐环境中培养3 h后存活率分别为0.47%和1.08%,疏水作用力分别为25.10%和11.79%,自凝集率在24 h后分别达到75.53%和68.61%,与幽门螺旋杆菌的交互凝集率在24 h分别达到61.18%和57.25%。对常见抗生素（氯霉素、青霉素、红霉素、氨苄青霉素和头孢唑林）不耐药,对4种肠道致病菌（金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门氏菌）均具有抑制作用。结论:本试验筛选到具有拮抗幽门螺旋杆菌能力的植物乳杆菌D1和瑞士乳杆菌GQ1702,可为功能性乳制品的开发及研究提供菌株。     

酢辣椒中益生乳酸菌的筛选及其功能特性

为从酢辣椒筛选出具有益生特性的菌株,开发辣椒益生菌产品,本实验从地方特色发酵食品酢辣椒中分离得到16 株乳酸菌,以产酸速度、耐人工胃液能力为指标进行初筛,通过生化实验和16S rDNA序列分析方法鉴定;并通过研究菌株对工艺逆境的耐受能力,表面疏水性和自聚合能力以及抑菌活性、抗氧化能力、降解亚硝盐能力和安全特性来评价乳酸菌的益生特性。结果表明：发酵乳杆菌17-1、发酵乳杆菌18-2和短乳杆菌L3-5能耐受0.4%苯酚、溶酶菌和热处理;具有较高的表面疏水性和自聚合能力;能产生具有广谱抑菌效果的细菌素来抑制病原菌的生长;菌株L3-5和17-1具有较高的抗氧化能力;3 株菌都具有胆盐水解酶活性和产γ-氨基丁酸能力,并且都属于安全性菌株。综上所述,传统酢辣椒是分离益生乳酸菌新的天然来源,从中分离得到的发酵乳杆菌17-1、发酵乳杆菌18-2和短乳杆菌L3-5可以作为潜在的益生性菌株。     

发酵酸菜来源乳酸菌的益生特性及其在发酵乳中的应用

通过pH值、胆盐耐受性实验从发酵酸菜中筛选性能优良的益生乳酸菌株,经16S rRNA序列分析鉴定得4 株植物乳杆菌A44、B51、B54、C53和2 株戊糖乳杆菌A16、B72。经疏水、黏附、自凝聚和溶血能力实验评价6 株乳酸菌的益生特性,其中植物乳杆菌A44对氯仿和二甲苯的疏水性均大于80%,对Caco-2细胞的黏附率为13.57%,放置5 h的自凝聚率超过60%,与其他菌株相比具有更好的益生特性且无溶血活性。因此选用植物乳杆菌A44进一步研究其在发酵乳中的功能特性,结果表明：植物乳杆菌A44作为辅助发酵剂添加后对4 ℃贮藏7 d期间发酵乳pH值、滴定酸度和持水性均无显著影响（P＞0.05）,但是可以显著提高发酵乳的活菌数和黏度（P＜0.05）,活菌数达到8.45（lg（CFU/mL））。本研究筛选得到的植物乳杆菌A44是一株性能优良的益生乳酸菌,具有作为发酵乳益生菌辅助发酵剂的潜在应用前景。     

一株益生特性优良的干酪乳杆菌的筛选

通过对5株发酵植物蛋白性能优良的乳酸菌在人工消化液中的耐受性、抑菌作用、疏水性以及各菌株不同组分的抗氧化活性进行测定,以期获得特性及功能优良的益生菌。结果表明,干酪乳杆菌05-20具有较高的肠胃道耐受性,经人工消化液处理6 h后耐受率为76.55%;对致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及单核细胞增生李斯特菌具有抑制作用;对二甲苯、氯仿和乙酸乙酯的疏水率依次为81.87%、95.14%和62.24%;干酪乳杆菌05-20还表现出较高的抗氧化性,如:发酵上清液对羟自由基的清除率为38.30%,胞内提取物对DPPH自由基的清除率为67.87%,完整细胞对Fe~(2+)的螯合率为86.46%。综上所述,干酪乳杆菌05-20可作为今后开发功能性益生产品的潜在菌株。     

4株益生菌的表面特性及抑制致病菌作用研究

为探索细胞表面特性与抗菌能力之间的关系,对干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)、动物双歧杆菌V9(Bifidobacteria.animalis V9)、动物双歧杆菌Bb12(Bifidobacteria.animalis subsp.lactic Bb12)及干酪乳杆菌Shirota(Lactobacillus casei Shirota)的菌体表面特性(菌体凝集特性、表面疏水特性)及对肠道致病菌的抑制特性进行了研究,结果显示:各菌株自凝集能力随培养时间的延长均呈上升趋势;对致病菌的凝集率随益生菌、致病菌和培养时间的变化而不同;具有较高自凝集能力的菌株,其疏水能力及对致病菌的凝集能力同样较高;各益生菌对致病菌的凝集能力与其产生抑菌物质的抑菌能力无明显关系。     

雪莲菌中乳酸菌的益生特性

对分离自雪莲菌的乳酸菌进行益生特性评价。耐酸性和模拟胃肠液耐受性初筛结果表明,20株乳酸菌中有11株乳酸菌在pH 3.0和pH 2.5的培养基中具有耐受性,经过模拟胃肠液培养后有8株乳酸菌的活菌数大于10⁶ CFU/mL;疏水性、自凝聚性、抗氧化能力和抑菌实验结果表明,副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KF2-5和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RG疏水性较高、抑菌性最强,菌株RG的自凝聚能力和抗氧化能力较强;耐药性实验结果显示,菌株KF2-5和RG对红霉素、卡那霉素、氯霉素和四环素敏感,对头孢噻肟和万古霉素具有耐药性;溶血性实验表明,2株菌均无溶血。本研究筛选得到2株具有益生特性的乳酸菌KF2-5和RG,在益生产品开发中具有潜在的应用前景。     

内蒙古奶豆腐中潜在益生性乳酸菌的筛选

对从内蒙古奶豆腐中分离的16 株乳酸菌进行16S rDNA分子鉴定,其中9 株鉴定为乳酸片球菌、5 株为屎肠球菌、1 株为植物乳杆菌、1 株为鼠李糖乳杆菌。进一步对分离得到的菌株进行模拟人工胃液和胆盐耐受性、疏水性、体外降胆固醇和抗氧化特性研究。结果表明：植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对模拟人工胃液有较高的耐受性;屎肠球菌M7-1、M8-1和M8-2具有较高的胆盐耐受性;植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对甲苯和十六烷的疏水性显著高于其他菌株。体外功能性实验结果表明,屎肠球菌M1-1、植物乳杆菌M1-2、乳酸片球菌M1-3和M2-1的体外降胆固醇能力较高,胆固醇降解率均超过30%;鼠李糖乳杆菌M6-1对过氧化氢的耐受性、羟自由基（•OH）和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除能力最高。综上所述,植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1具有较好的益生特性,可作为今后开发功能性产品的潜在益生菌株。     

In vitro screening of lactobacilli with antagonistic activity against Helicobacter pylori from traditionally fermented foods

Helicobacter pylori may cause stomach diseases such as chronic gastritis, peptic ulcer, and gastric cancer, and several studies reported that lactobacilli have inhibitory effects on H. pylori. In this study, 38 Lactobacillus strains were screened for anti-H. pylori activity using in vitro methods, including survivability under the simulated gastric conditions, agar plate diffusion, urease activity, coaggregation, autoaggregation, and hydrocarbon analysis. The results indicate that 2 Lactobacillus strains showed potential anti-H. pylori activity in vitro. Lactobacillus plantarum 18 had the largest zone of inhibition and markedly reduced the urease activity of H. pylori. Lactobacillus gasseri Chen had higher coaggregation rate (58.15%) and hydrophobicity (59.27%) compared with the other strains. Further research is needed to verify the activities of these strains against H. pylori.     

Antagonistic activities of lactobacilli against Helicobacter pylori growth and infection in human gastric epithelial cells

Lactobacilli have positive effects on bowel microflora and health in humans and animals. In this study, the antagonistic activities of Lactobacillus gasseri Chen, and L. plantarum 18 were assessed by agar plate diffusion assay and tests that determined the growth and urease activity of Helicobacter pylori cocultured with lactobacilli and the adherence of H. pylori to human gastric epithelial cells in the presence of lactobacilli. The results showed that the 2 Lactobacillus strains had significant anti-H.pylori activity, and this activity may be contributed by the cell-free supernatants (CFS) of lactobacilli and live Lactobacillus strains in vitro. The antagonistic activity of the CFS against H. pylori depended on the pH and the presence of metabolites, such as organic acids and proteases. Our results also indicated that 2 Lactobacillus strains could inhibit H. pylori adherence human gastric epithelial cells. PRACTICAL APPLICATION: Helicobacter pylori causes chronic gastritis, peptic ulcer disease, and gastric cancer, and it infects about 50% of the world's population. Lactobacilli have been reported to have an inhibitory effect on H. pylori and can be used as probiotic to manufacture dairy products preventing H. pylori infection.     

醋醅源潜在益生菌的筛选及其对秀丽隐杆线虫寿命延长作用

该研究对从传统醋醅中分离的7株菌株进行体外益生功能检测,并研究其对秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans,C. elegans）寿命的影响。7株菌通过溶血性、抑菌能力、产蛋白酶、自聚集和共聚集、疏水性以及DPPH自由基清除能力检测有明显差异,筛选出两株斯塔贝基斯鲁梅利杆菌（Rummeliibacillus stabekisii,R. stabekisii）CY2与CY4具有无溶血性,产蛋白酶含量高（11.49 mm和13.24 mm）,24 h自聚集与共聚集能力强,24 h细胞表面疏水性突出,DPPH自由基清除能力较好（上清液48.69%和59.22%,菌体44.00%和41.20%）,进一步耐酸性实验得出CY2在pH值3.0时耐酸性显著优于CY4,且能够繁殖生长（4~8 h时存活率升高8.82%）,并且CY2具有较高的LPS降解能力（46.95%）,秀丽隐杆线虫（C. elegans）寿命实验表明CY2能够显著延长寿命,单独饲喂相较于OP50组,平均寿命延长1.37 d,延长率为15.91%（P<0.05）,最大寿命延长1.00 d,与OP50混合饲喂,平均寿命延长1.47 d,延长率为17.10%（P<0.05）,最大寿命延长2.00 d。该研究结果表明斯塔贝基斯鲁梅利杆菌（R. stabekisii）CY2益生特性明显,具有较好的开发潜力,同时也为发掘新型食源潜在益生菌提供参考和依据。     

嗜酸乳杆菌表层蛋白提取方法的对比

本文通过电泳比较了5 mol/L LiCl法、4 mol/L盐酸胍法、8 mol/L尿素法和5 mol/L LiCl结合1 mol/L LiCl法提取嗜酸乳杆菌JCM 1132表层粗蛋白方法,并进一步研究了不同提取方法对乳杆菌表面特性的影响。结果表明:两种不同浓度的LiCl法是提取表层蛋白的最适方法,该方法提取可得到纯度较高的表层蛋白。且用该方法剥离表层蛋白后,菌体的存活率最高,约为99.27%。不同方法去除表层蛋白后,菌体的表面电荷、表面疏水性、自聚集能力以及与沙门氏菌的共聚集能力均有所降低。表明表层蛋白对嗜酸乳杆菌表面性质起关键性作用,对乳杆菌益生功能的积极影响。     

益生菌对2型糖尿病小鼠的调节作用

目的:研究益生菌对2型糖尿病小鼠的降糖效果以及潜在的降糖机制。方法:以实验室34株益生菌为研究对象,利用α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选具有降糖功效的菌株,并通过体外表面疏水性、自聚性衡量菌株益生特性,将筛选出的目标益生菌应用于动物模型,探究其降糖功效及潜在机制。采用高脂饮食结合链脲佐菌素方法建立2型糖尿病小鼠模型,所有小鼠连续灌胃8周后,检测其血糖水平、葡萄糖耐受量、糖化血红蛋白、胰岛素水平及胰岛素抵抗状况、血清炎症因子水平、胰高血糖素样肽-1以及粪便中短链脂肪酸含量。结果:在体外筛选实验中,副干酪乳杆菌J5和干酪乳杆菌K11有着良好的抑制α-葡萄糖苷酶活性和肠道黏附能力。动物实验中,干酪乳杆菌K11能够显著降低小鼠的血糖水平(P<0.05),改善糖耐量受损以及胰岛素抵抗(P<0.05);显著降低小鼠血清中肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6含量;明显提高血清中胰高血糖素样肽-1水平和粪便中短链脂肪酸的含量(P<0.05)。结论:干酪乳杆菌K11可显著调节2型糖尿病小鼠的血糖,作用机制可能与其调节肠道菌群产物短链脂肪酸、促进胰高血糖素样肽-1分泌并调节炎症因子有关。     

乳杆菌表层蛋白对菌株表面特性和益生特性的影响

为评估乳杆菌表层蛋白对菌株特性的影响,该研究通过序列比对筛选出含slp基因的乳杆菌,之后用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对其中部分菌的slp基因表达情况进行鉴定,并测定了表层蛋白去除前后菌体生长的吸光度值、自聚集率、自成膜量、与致病菌共聚集率等特性。结果表明,4株嗜酸乳杆菌、30株卷曲乳杆菌、3株瑞士乳杆菌、30株鼠李糖乳杆菌都含有slp基因,经过SDS-PAGE鉴定了四种菌的部分菌株均表达表层蛋白,且其表层蛋白与菌株的特性密切相关。比如,在生长方面,瑞士乳杆菌去除表层蛋白前后生长能力差异很大,但氯化锂溶液和蛋白酶K两种溶液处理的吸光度值差距较小,差值仅在0.2以内;在与致病菌共聚集方面,大部分菌株在不同处理过程中没有较大差异,有趣的是,本身自聚能力弱的鼠李糖乳杆菌3-1表现出来的与致病菌极强的共聚能力,这株菌的在口腔方面的防龋潜力值得进一步探究。该研究丰富了人们对乳杆菌表层蛋白的了解,为深入探究表层蛋白的功能和应用奠定理论基础。     

巴马长寿老人源乳酸杆菌的筛选及其益生特性

为获得巴马长寿老人肠道乳杆菌并研究其益生特性,采用改良MRS+Ca CO3固体培养基与改良MRS+X-gal固体培养基从10位广西巴马百岁老人粪便中筛选出19株乳杆菌,再通过生理生化实验、糖发酵实验、模拟胃肠转运实验、疏水性实验和自凝集实验,筛选出消化道逆环境耐受性强和粘附力好的菌株3株(GU-L3、GU-P132和GU-G23),进一步对三株菌进行了16Sr DNA序列鉴定,结果发现GU-L3为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei);GU-P132为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum);GU-G23为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)。三个菌株经模拟胃肠液转运实验后,存活率皆达到107 CFU/m L以上,自凝集率分别为12.43±0.03%、78.88±0.01%和35.92±0.02%,疏水率分别为6.38±0.02%、81.77±0.02%和10.58±0.05%,粘附性也高于其他菌株。经与国内外有关报道相比,综合认为这三株来自巴马老人肠道的乳酸杆菌益生特性明显,具有较好的开发潜力。     

Novel isolates of lactobacilli from fermented Portuguese olive as potential probiotics

The purpose of this work was to screen for and characterize the potential probiotic features of strains of lactic acid bacteria isolated from Galega cultivar fermented olives, to eventually develop an improved probiotic food from plant origin. From 156 isolated strains, 10 were acid – and bile salt tolerant, and exhibited survival rates up to 48%, following simulated digestion. All strains exhibited auto- (4–12%) and co-aggregation features (≥30%), as well as hydrophobicity (5–20%) and exopolysaccharide-producing abilities, while no strain possessed haemolytic capacity or ability to hydrolyse mucin. Antibiotic resistance, oleuropein degradation, proteolytic activity and antimicrobial activity were strain-dependent features. Overall, 10 strains – belonging to Lactobacillus plantarum and Lactobacillus paraplantarum, appear to possess a probiotic value.