草莓酸对莓实假单胞菌群体感应的抑制作用

目的:利用报告菌株紫色杆菌探究草莓酸的群体感应抑制性及其对莓实假单胞菌的群体感应作用。方法:利用细菌凋亡率、气相色谱-质谱分析、生物膜的抑制效果、胞外聚合物生成量以及观察细菌的群集和泳动等参数,来研究草莓酸对莓实假单胞菌群体感应的抑制效果。结果:草莓酸的最小抑菌浓度(MIC)为0.5 mg/mL,亚抑菌浓度下草莓酸虽然降低了菌株CV026产生紫色素的能力,但对细胞凋亡没有任何影响。通过气相色谱-质谱定量检测发现莓实假单胞菌所产的群体感应信号分子是C8-HSL和C10-HSL,草莓酸对信号分子的分泌产生抑制效果。在亚抑菌浓度下草莓酸对莓实假单胞菌的生物被膜形成量为21.06%,细菌的群集和泳动的抑制率分别降低34.06%和75.02%,且呈现质量浓度依赖性。结论:草莓酸具有较好的群体感应抑制性,可以作为水产保鲜中的群体感应抑制剂。     

施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri产卡拉胶酶液体发酵条件优化

以从红树林底泥中分离筛选的施氏假单胞（Pseudomonas stutzeri）为对象，采用单因素和正交实验方法，通过摇瓶发酵方式对其产卡拉胶酶发酵条件进行了研究。得到最佳培养基配方和培养条件分别如下：卡拉胶0．3‰，酵母浸粉0．1‰，NaNO30．3‰，乳糖0．04％，吐温-800．2‰；起始pH值6．0，温度32℃，装样量90mL／250mL，接种量13％，摇床转速160r／min。在最佳条件下，发酵液的酶活力为26．5U／mL，比优化前的活力提高了80％。     

芳樟醇对三文鱼源莓实假单胞菌的抑菌机理

本研究应用高通量测序技术分析不同贮藏期三文鱼的菌相变化,并分离、纯化、鉴定出1 株4 ℃贮藏环境下三文鱼的优势腐败菌——莓实假单胞菌MS 02（Pseudomonas fragi MS 02）。再以分离出的莓实假单胞菌MS 02为靶标菌,深入探究芳樟醇对其抑菌性能及其抑菌机理。结果表明：4 ℃贮藏三文鱼的菌相呈现动态变化的趋势,其中发光杆菌属、假单胞菌属、青枯菌属和不动杆菌属细菌在三文鱼贮藏中占主要地位。随着贮藏时间的延长,假单胞菌属的相对丰度逐渐增大,而莓实假单胞菌是三文鱼在贮藏期间增长速率最快的菌种。以分离鉴定出的莓实假单胞菌MS 02为研究对象,发现芳樟醇对其具有良好的抑菌效果,扫描电子显微镜观察结果表明芳樟醇能使细菌细胞膜产生凹陷褶皱,而电导率、OD260 nm、二乙酸荧光素荧光强度和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）、钠钾ATP酶活力测定结果证明芳樟醇能破坏莓实假单胞菌的细胞膜和细胞壁的通透性和完整性,进而影响细菌细胞正常能量代谢,最终导致菌体死亡。     

芳樟醇对莓实假单胞菌的抑菌活性及机制

食品在生产、运输和贮藏过程中易受致病菌污染而引起食源性疾病。芳樟醇具有抗菌作用,但其作用机制尚不明确。研究芳樟醇对莓实假单胞菌的抑菌活性及作用机制,可为其作为天然食品防腐剂的开发提供理论依据。通过测定最小抑菌浓度、绘制细菌生长曲线评价芳樟醇的抑菌活性;通过扫描电子显微镜观察、结晶紫染色实验、二乙酸荧光素染色实验以及测定电导率、核酸泄漏、呼吸代谢活力和呼吸链脱氢酶活性的变化探究芳樟醇的抑菌机制。结果表明：芳樟醇对莓实假单胞菌具有较强的抑制作用,最小抑菌浓度为1.5 mL/L;芳樟醇能破坏莓实假单胞菌细胞的结构形态和细胞膜的完整性,增加细胞膜的通透性,导致胞内物质泄漏、膜外电导率升高;能抑制呼吸代谢活力和呼吸链脱氢酶活性,破坏呼吸链,导致胞内代谢紊乱。研究认为,芳樟醇可通过破坏莓实假单胞菌的细胞结构和抑制其呼吸代谢而发挥抑菌作用,有望作为天然防腐剂应用于食品的防腐保鲜。     

假单胞菌BL11产碱性脂肪酶发酵条件的优化

通过单因素实验和均匀设计对已分离到的一株假单胞菌BL11产碱性脂肪酶的培养基配方和摇瓶发酵条件进行初步优化.优化后的最佳培养基组成为(w/v):麦芽糖2.5％,蛋白胨3.0％,豆油0.5％,K2HPO40.2％;最佳发酵条件为:起始pH7.5,装液量40mL/250mL三角瓶,培养温度33℃,摇床转速180r/min,发酵周期60h.在上述条件下,BL11菌株产脂肪酶酶活可高达223U/mL.     

冷鲜鸡肉中莓实假单胞菌NMC25的全基因组测序及分析

通过PacBio RS II测序平台,对在腐败冷鲜鸡肉中分离到的1 株莓实假单胞菌（Pseudomonas fragi NMC25）进行基因组完成图测序,并对测序数据进行组装、基因预测和功能注释。同时与已公布全基因组序列的铜绿假单胞菌PAO1（P. aeruginosa PAO1）、恶臭假单胞菌KT2440（P. putida KT2440）和荧光假单胞菌F113（P. fluorescens F113）及另外2 株莓实假单胞菌分离株（P121和NRRLB-727）进行初步比较基因组分析。结果显示NMC25菌株基因组大小为5.152?13?Mb,GC含量为59.21%,包含1?个染色体和3?个质粒。通过对COG、GO、KEGG和CAZy数据库的比对分析发现基因组中包含大量致腐相关基因。比较基因组结果表明莓实假单胞菌NMC25与其他3 种假单胞菌的共线性序列比例较小,而同种之间与P. fragi P121的共线性比例也不足70%,说明不同环境来源的莓实假单胞菌分离株基因组存在较大差异。本研究结果从基因水平上证明了莓实假单胞菌NMC25确实有较强的致腐潜力,有助于深入了解莓实假单胞菌的代谢特征,为今后阐明其对冷鲜鸡肉的致腐机制提供理论支撑。     

假单胞菌BL11产碱性脂肪酶发酵条件的优化

通过单因素实验和均匀设计对已分离到的一株假单胞菌BL11产碱性脂肪酶的培养基配方和摇瓶发酵条件进行初步优化。优化后的最佳培养基组成为(w/v):麦芽糖2.5%,蛋白胨3.0%,豆油0.5%,K2HPO40.2%;最佳发酵条件为:起始pH7.5,装液量40mL/250mL三角瓶,培养温度33℃,摇床转速180r/min,发酵周期60h。在上述条件下,BL11菌株产脂肪酶酶活可高达223U/mL。      

铜绿假单胞菌Gxun-2产铁载体发酵条件优化及其抑菌效果

鉴定铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）Gxun-2分泌铁载体类型,确定其最佳发酵工艺条件,同时考察铁载体发酵液对植物病原菌拮抗效果,为该菌株在农业中的应用提供理论依据。本试验先用铬天青（chrome azurol sulfonate,CAS）平板和全波段紫外光吸收法对P. aeruginosa Gxun-2产铁载体进行定性和定量分析,进一步通过单因素、Plackett-Burman及正交试验相结合的方法对其产铁载体培养基及培养条件进行了优化,最后利用平板对峙法测定产铁载体发酵液对香蕉枯萎病病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum f. sp. cubense,FOC）的拮抗效果。结果表明,菌株Gxun-2所产铁载体类型为异羟肟酸型,确定产铁载体最佳发酵工艺为：琥珀酸钠2 g/L、甘油10 g/L、硫酸铵1 g/L,初始pH6.8、温度35℃、接种量1%(v/v)、装液量140 mL/250 mL;在此条件下,菌株Gxun-2产铁载体活性单位（Su）达到81.20%±0.24%,较优化前提高了82.84%±0.82%,对FOC的抑菌率达70.60%...     

交替假单胞菌H_7产甲壳素酶发酵条件的研究

系统地研究了氮源、起始pH、培养基装量、培养温度和时间等因素对交替假单胞菌H7产甲壳素酶的影响。通过正交实验对H7的发酵条件进行了优化,最佳发酵条件为:培养温度37℃,起始pH7.0,底物浓度0.1%,装瓶量125mL。优化后菌株H7的酶活力由原来的0.59U/mL提高至0.69U/mL。     

沼泽红假单胞菌产类胡萝卜素培养条件的优化研究

对沼泽红假单胞茵产类胡萝卜素的最佳培养基和最佳培养条件进行了研究。结果表明：菌株N，在培养基组成为KH2PO40．6g，K2HPO4 0.9g，酵母膏1．5g，蛋白胨2．0g，NaCl0．5g。自来水1000mL的培养基中，在接种量为3．0％左右，28℃，1500lx，培养基的自然pH值（6．5—8．5）条件下培养5d后，类胡萝卜素产量可达4．84mg／L。     

Characterization of Extracellular Polymeric Substances Produced by Pseudomonas fragi Under Air and Modified Atmosphere Packaging

Extracellular polymeric substances (EPS) play an important role in bacterial biochemical properties. The characteristics of EPS from 2 strains of Pseudomonas fragi cultured in meat aerobically (control) and in modified atmosphere packaging (MAP) were studied. The amount and components of EPS, the surface properties, and the effect on biofilm formation of several spoilage organisms were evaluated. The results showed that MAP inhibited the growth of the P. fragi strains. Compared with the control, more loose and less bound EPS (containing protein and carbohydrate) were produced by P. fragi in MAP samples. MAP also caused increased cell autoaggregation and surface hydrophobicity. After the removal of the EPS, the surface property changes were strain‐dependent, suggesting that membrane compositions were also changed. In addition, the EPS displayed significant antibiofilm activity on Pseudomonas fluorescens and Serratia liquefaciens. In conclusion, P. fragi strains not only modified the amount, components, and surface properties of EPS but also changed the cell membrane compositions to adapt to MAP stress. Moreover, EPS may play an important role in microbial community competitions.     

Pseudomonadaceae sp.胆固醇氧化酶产酶条件优化及其初步纯化

Pseudomonadaceae sp.可以发酵生产胆固醇氧化酶。本文对Pseudomonadaceae sp.进行产酶条件的优化及产物的初步分离。确定其最适培养基及培养条件,优化后胆固醇氧化酶的酶活力可达1691.72U/L,比优化前839.35U/L有较大提高。经过(NH4)2SO4沉淀及Sephadex G-75凝胶过滤层析初步纯化后酶比活力达24.95U/mg,纯化倍数为9.18。     

烟曲霉菌株发酵产壳聚糖酶条件的优化

通过单因子试验和正交试验对选育的一株产壳聚糖酶菌株UC-233进行发酵条件优化,结果表明其最适氮源是黄豆粕粉,最适碳源是壳聚糖,其最适发酵条件是:黄豆粕粉3.3%,胶体壳聚糖1.5%,培养基初始pH为4.0,250mL三角瓶装液量为50mL,接种量为1mL,发酵温度是30℃,发酵时间为48h,在此条件下菌株发酵液的壳聚糖酶活力达39.5U/mL,是优化前的1.43倍.     

高产阿魏酸酯酶菌株的筛选及其产酶条件优化

通过初筛、复筛从茯砖茶中筛选到了1株产阿魏酸酯酶活力较高的菌株,经个体形态和菌落特征初步鉴定其为冠突散囊菌;以阿魏酸酯酶酶活为衡量指标,选取黑毛茶含水量、接种量、培养温度、培养时间为因子,研究确定筛选出来的冠突散囊菌进行固态发酵黑毛茶的产酶条件。结果表明:黑毛茶固态发酵实验中,黑毛茶含水量26%,接种量1‰,温度30℃条件下培养4d,其酶活力最高可以达到142m U/g。      

耐低温菌株的鉴定、低温生长特征及耐低温机理初步研究

该研究以分离自长白山常年积雪覆盖的苔原带土样的耐低温菌株7a-3为研究对象,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并对其生长特性及耐低温机制进行初步研究。结果表明,菌株7a-3被鉴定为莓实假单胞菌（Pseudomonas fragi）,其生长温度范围为4～33 ℃,最适生长温度为30 ℃,表面活性剂不能促进该菌株在37 ℃条件下生长,但其自身低温发酵代谢物可促进该菌在37 ℃条件下生长。相对于30 ℃,4 ℃条件下,菌株7a-3细胞膜的脂肪酸种类由长链脂肪酸向短链脂肪酸转化,不饱和脂肪酸的相对含量增加,且单不饱和脂肪酸相对含量的变化较大,细胞膜较为粗糙,初步推测其耐低温能力与细胞膜不饱和脂肪酸含量增加导致细胞膜流动性增强相关。     

高产酯化酶细菌的复合诱变选育及固态发酵条件优化

为了获得高产酯化酶的细菌,该研究以先期分离获得的贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)Nz 1.201为出发菌株,利用紫外线(ultraviolet,UV)及硫酸二乙酯(diethyl sulfate,DES)复合诱变技术进行诱变育种.采用透明圈法初筛、酯化酶酶活力测定法复筛,选育出高产突变菌株D27...     

假单胞菌SWU-M生产弹性蛋白酶发酵条件的研究

研究弹性蛋白酶的产生与发酵条件,应用微生物学方法从牛肚中分离筛选了1株弹性蛋白酶用于生产菌株PseudomonassspSWU-M。研究结果表明,产生弹性蛋白酶的最佳发酵条件是:蔗糖6%、葡萄糖2%、干酪素3%、Na2HPO40.4%、MgSO·47H2O0.01%,起始pH值为7.0,摇振转速为150r/min。在后12h添加营养素和变温培养能提高酶的产量。