1名Am亚型患者的血型血清学鉴定及输血策略

目的对Am亚型患者的血型进行血清学鉴定,并为其输血选择适合的血液成分。方法对1名ABO正反定型不相符患者,用抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB和抗-H单抗检测红细胞ABH抗原;A、B、O型红细胞与血浆反应检测ABO血型抗体及不规则抗体;吸收放散试验检测红细胞弱抗原;中和抑制试验检测唾液中ABH血型物质。根据患者血型血清学检测结果,选择相容血液成分进行输血。结果该患者符合Am亚型的血型血清学特征,输入O型少白细胞红细胞6U,A型单采血小板1治疗量后,均能达到预期疗效,无不良反应。输血后3个月的血型血清学检测结果与输血前完全一致。结论ABO血型鉴定时坚持正、反定型,可避免将Am亚型误定为O型,对Am亚型的准确鉴定有赖于多种血型血清学试验。Am亚型患者输血时可选择O型红细胞、A型血小板、A型或AB型血浆。     

1份正反定型不符献血者标本的血清学及分子特性分析

目的对1份正反定型不符的献血者标本进行血清学及分子特性分析。方法采用吸收放散试验进行红细胞弱抗原检测,SSP-PCR方法进行基因分型,PCR产物克隆后进行测序分析。结果该标本血清学反应格局符合Ax亚型,分子生物学检测为A型。测序结果表明,Exon4含有2个连续碱基错义突变位点,分别为nt187G>A,nt188C>T,导致第63位氨基酸的改变(Arg63His)。结论该Ax亚型是由于Exon42个碱基突变,引起氨基酸的改变,导致糖基转移酶活性的降低,从而使红细胞上表达的A抗原大大减少。     

Bel亚型的血型血清学特征及其遗传背景分析

目的分析Bel亚型的血型血清学特征及其遗传背景。方法采用红细胞凝集试验检测先证者及其家庭成员红细胞上的A、B、H抗原和血清中的抗-A、抗-B抗体;凝集抑制试验检测唾液中的A、B、H血型物质;吸收放散试验检测红细胞表面是否存在B抗原。用序列特异性引物多聚酶链式反应技术(PCR-SSP)进行ABO血型基因分型。结果先证者与其父确定为Bel亚型;先证者的两个妹妹分别为ABel亚型和A型;先证者的母亲、配偶、女儿、儿子分别为A、AB、A和B型。结论Bel亚型有家族遗传性。     

韶关地区人群ABO、Rh、MN、P及Jk~(a-b-)血型分布

目的了解韶关地区人群的ABO、Rh、MN、P及Jk(a-b-)血型的分布规律,为献血者招募及科学合理储存血液提供理论依据。方法采用U型96孔微量板法,对献血者血样进行ABO正反定型及Rh、MN、P血型检测,结果可疑者用试管法确认,并进行Jk(a-b-)表型筛查。结果ABO血型基因频率r>p>q,表型分布规律为O>A>B>AB;Rh(D)阴性占0.16%;A2亚型在AB型的检出率高于A型;MN血型的基因频率m>n,表型分布规律为MN>M>N;P血型的基因频率p2>p1,表型分布特征为P2>P1;Jk(a-b-)表型检出率为1∶22161.5。结论韶关地区血型分布以O型所占比例最多,且A型多于B型,A2亚型检出率高,Rh(D)阴性率低,Jk(a-b-)表型更低;应加大O型、A型献血者的招募并相应增加其库存量,特别是要加强Rh(D)阴性和Jk(a-b-)表型献血者的档案管理、Rh(D)阴性血液和Jk(a-b-)血液的冰冻保存工作及Jk(a-b-)人员的自身储血工作。     

武汉地区呼吸道合胞病毒分离株的G蛋白基因遗传特征

目的分析武汉地区人呼吸道合胞病毒(RSV)分离株的G蛋白基因的遗传特征。方法使用不同的特异性引物,对武汉地区2006年分离的9株RSV进行G基因3′末端第2个高变区的序列测定,并进行基因分型和基因亲缘关系分析。结果分离的9株RSV中,33.3%(3/9)为A亚型,属GA2基因型;66.7%(6/9)为B亚型,其中1株属于BA基因型,5株属于GB8基因型。9株RSVG蛋白与原型株核苷酸同源性为84.5%～99.0%,且与原型株相比,在205～230位氨基酸中有5～8个位点氨基酸变异,还存在糖基化位点的改变。结论2006年初在武汉地区存在着由不同RSV株引起的传播链,A、B亚型共循环,B亚型是优势流行亚型;9株RSVG蛋白与原型比较,存在明显的差异。     

肠道病毒71型吉林分离株的全基因组序列分析

目的对2011年吉林省肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)分离株全基因组进行序列分析。方法将手足口病伴发重症脑炎患者的粪便样品接种至Vero细胞,分离EV71;采用RT-PCR法分8段扩增全基因组序列,进行双酶切及序列测定;应用Mega5软件构建EV71系统进化树;通过DNAMAN7和DNASTAR7软件进行EV71分离株核苷酸和氨基酸序列的同源性比较;经RDP4软件对EV71分离株进行同源重组分析。结果粪便样品接种至Vero细胞2 d后,细胞出现圆缩、透亮、聚堆的病变现象;各PCR扩增产物经双酶切鉴定,均可见与预期大小一致的目的条带;经种系进化树分析显示,EV71分离株属C4a亚型,命名为EV71-JiLin-11-China;其与A、B和C亚型间核苷酸序列的平均同源性分别为22.44%、17.72%和11.96%,与A、B和C亚型间氨基酸序列的平均同源性分别为96.0%、97.2%和97.3%;全基因同源重组分析显示,EV71分离株的165～1 946和7 289～7 366核苷酸区有重组现象,分别源于分离自湖北的C4a-EV71-Hubei-09-China及马来西亚的B4-SB2864-SAR-00和C1-S18062-SAR-98。结论 2011年吉林地区流行的EV71为C4a基因型,为EV71基因特征及流行病学的研究提供了实验依据。     

柯萨奇病毒A组16型免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析

目的对柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus groups A type 16,CoxA16)4个毒株进行免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析。方法提取CoxA16 G20、KM/M08、MY08和KM208病毒RNA,PCR扩增VP1基因,并进行测序;利用MEGA4.0软件中Bootstrap Test of phylogeny→Neighbor-joining方法对13株CoxA16基于VP1基因全序列构建CoxA16种系进化树并进行基因分型,使用DNAMAN软件对4个毒株VP1核苷酸序列的同源性及其蛋白质氨基酸序列差异位点进行分析。分别用纯化灭活后的4株CoxA16免疫BALB/c小鼠,于初次免疫和二次免疫后的第14、28天采血,分离血清,Western blot法检测G20毒株免疫的小鼠血清中抗体的的特异性;微量中和试验法检测血清中和抗体效价并进行交叉中和试验。结果 G20、MY08和KM208毒株属于B2b基因型,而KM/M08毒株属于B2a基因型;4个毒株间VP1基因核苷酸序列的同源性为91.8%～99.0%;MY08与其他3个毒株相比,在VP1的第102位(N→D)、241位(E→K)和248位(T→A)上存在3个差异氨基酸位点。G20毒株的抗血清可特异识别CoxA16的VP1和VP2蛋白,具有良好的免疫原性;各实验组二次免疫后第28天中和抗体效价均高于其他检测时期,其中MY08组中和抗体效价明显低于其他3组,差异有统计学意义(P﹤0.01);G20、KM/M08、和KM208毒株间的交叉保护能力优于MY08毒株对G20、KM/M08和KM208毒株的交叉保护能力,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4株CoxA16灭活后均能诱导机体产生相应的中和抗体和交叉保护能力,其中G20、KM/M08和KM208毒株在灭活后,显示了更好的免疫原性和毒株间交叉保护能力。     

鸡BF基因第2、3外显子序列及其多态性分析

目的分析鸡BF基因第2、3外显子序列及其多态性。方法从6羽霞烟鸡外周血淋巴白细胞(peripheral blood leukocytes,PBLs)中提取细胞DNA,以其为模板,经PCR法扩增BF基因的第2外显子、第2内含子和第3外显子,克隆至pGM-T载体上,构建重组质粒pGM-T-BF,并进行PCR、酶切和测序鉴定。利用生物信息学DNAStar软件将霞烟鸡与红原鸡第2、3外显子核苷酸及氨基酸序列进行多序列比对。结果经PCR、酶切及测序证明重组质粒pGM-T-BF构建正确。2种鸡BF基因序列的同源性可达88.6%~100%,第2、3外显子存在多态性变异位点91个,占总长度的17.04%,其中简约性信息位点66个,单变异位点25个;在编码相应的178个氨基酸残基中,多态变异位点49个,占总氨基酸残基数的27.53%,其中简约性信息位点37个,分单变异位点12个。结论鸡BF基因第2、3外显子呈高度多态性,且其多态性更多表现在氨基酸水平上。     

治疗用A型肉毒梭菌神经毒素全基因克隆及序列分析

目的对我国治疗用A型肉毒毒素生产用菌株Hall株神经毒素(BoNT)全基因进行克隆及序列分析,了解其遗传特性,为该制剂的质量控制提供依据。方法取生产用主代种子、工作种子,通过PCR扩增BoNT全基因片段,将其克隆至载体pGEM-T中,构建重组克隆质粒pGEM-T-BoNT,对克隆的BoNT基因进行序列测定与分析。结果测得的Hall株BoNT全基因序列3891bp,共编码1297个氨基酸。4种核苷酸的比例分别为:A:40.58%,G:16.17%,T:33.13%,C:10.13%;GC含量为26.29%,AT含量为73.71%。主代种子、工作种子核苷酸序列3591位的G变成A,为无义突变,未导致其推导的氨基酸的改变。序列测定结果与GenBank中登录的Hall标准株进行比较,主代种子、工作种子核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为99.99%和100%。结论 A型肉毒梭菌Hall株在实验室长期的保存和生产传代过程中,BoNT基因遗传特性非常稳定。     

2015年山东省烟台地区柯萨奇病毒A组16型VP1区基因特征分析

目的研究2015年山东省烟台地区手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)的病原谱,并分析病原谱中柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)流行株的进化及VP1区重要氨基酸位点的变异情况。方法采用实时荧光逆转录聚合酶链反应方法,对2015年烟台地区采集于HFMD患者的696份样品进行肠道病毒(enterovirus,EV)核酸检测和分子定型。根据EV的优势血清型,选取10株CV-A16扩增VP1区,并进行核苷酸序列及系统发育分析。结果从696份标本中检出EV 412株,其中101株为CV-A16,76株为EV-A71型。10株CV-A16的核苷酸序列相似性为88.4%~99.9%,氨基酸序列相似性为98.6%~100%。10株CV-A16烟台株分别属于B基因型的B1a和B1b进化分支,其中B1b进化分支为优势株。与参考株Tainan/5079/98(AF177911)相比,10株CVA16分离株氨基酸序列的第11、23、99、145、289位氨基酸出现突变,10株分离株的这些位点也有不同,表明烟台地区的CV-A16有其独特的突变位点。结论 CV-A16是引起2015年烟台地区HFMD发病的常见病原体,本次分离到的CV-A16均属于B基因型的Bla和B1b进化分支。     

IL-27p28基因多态性与中国朝鲜族人群哮喘的相关性

目的探讨IL-27p28基因启动子区g.-964 T>C、第2外显子区g.2905T>G和第4外显子区g.4730T>C 3个位点的多态性与中国朝鲜族人群哮喘的相关性。方法选取32例中国朝鲜族哮喘患者(病例组)和93名中国朝鲜族正常人(对照组)作为观察对象,采用PCR法扩增IL-27p28基因g.-964 T>C、g.2905T>G和g.4730T>C位点基因片段,单碱基延伸法进行基因分型,分析病例组和对照组的基因型频率及等位基因频率。结果病例组和对照组的基因型分布均符合Hardy-weinberg平衡定律(P>0.05)。g.-964位点的基因型频率及等位基因频率在病例组和对照组之间的分布差异有统计学意义(P<0.001);g.2905和g.4730位点的基因频率及等位基因频率在病例组和对照组之间的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-27p28基因多态位点g.-964 T>C可能与朝鲜族人群哮喘易感性相关,g.2905T>G和g.4730T>C多态性与朝鲜族人群哮喘未发现有相关性。     

Fc Gamma Receptor IIIB NA1/NA2/SH Polymorphisms Are Associated with Malaria Susceptibility and Antibody Levels to P. falciparum Merozoite Antigens in Beninese Children

This paper aimed to investigate the influence of polymorphisms in the FCGR2A gene encoding R131H FcgRIIA variants and in the FCGR3B gene (108G > C, 114C > T, 194 A > G, 233C > A, 244 G > A and 316G > A) encoding FcgRIIIB-NA1, -NA2 and -SH variants on malaria susceptibility and antibody responses against P. falciparum merozoite antigens in Beninese children. An active malaria follow-up was conducted in infants from birth to 24 months of age in Allada, Benin. FCGR3B exon 3 was sequenced and FCGR2A exon 4 was genotyped. Antibodies directed to GLURP and MSP3 were quantified by ELISA. Association studies were performed using mixed-effect models. Individual carriage of FCGR3B 194 AA genotype was associated with a high number of malaria infections and a low level of IgG1 against MSP3 and GLURP-R0. High parasitemia and increased malaria infections were observed in infants carrying the FCGR3B*05 108C-114T-194A-233C-244A-316A haplotype. A reduced risk of malaria infections and low parasitemia were related to the carriages of the FCGR3B 108C-114T-194G-233C-244G-316A (FCGR3B*06), FCGR3B 108C–114T–194G–233A–244A–316A (FCGR3B*03 encoding for FcgRIIIB-SH) haplotypes and FCGR3B 297 TT genotype. Our results highlight the impact of FCGR3B polymorphisms on the individual susceptibility to malaria and antibody responses against MSP3 and GLURP in Beninese children.     

Polymorphisms in Myostatin Gene and Associations with Growth Traits in the Common Carp (Cyprinus carpio L.)

Myostatin (MSTN) is a member of the transforming growth factor-β superfamily that negatively regulates skeletal muscle development and growth. In the present study, partial genomic fragments of MSTN were screened for single nucleotide polymorphisms (SNPs) in selected common carp individuals from wild populations, and two SNPs in intron 2 (c.371 + 749A > G, c.371 + 781T > C) and two synonymous SNPs in exon 3 (c.42A > G, c.72C > T) were identified. Genotyping by direct sequencing of polymerase chain reaction (PCR) products for these four SNPs were performed in 162 individuals from a commercial hatchery population. Association analysis showed that two SNPs in exon 3 were significantly associated with body weight (BW) and condition factor (K), and haplotype analyses revealed that haplotype H7H8 showed better growth performance. Our results demonstrated that some of the SNPs in MSTN may have positive effects on growth traits and suggested that MSTN could be a candidate gene for growth and marker-assisted selection in common carp.     

Pharmacogenetics of OATP Transporters Reveals That SLCO1B1 c.388A>G Variant Is Determinant of Increased Atorvastatin Response

Aims

The relationship between variants in SLCO1B1 and SLCO2B1 genes and lipid-lowering response to atorvastatin was investigated.

Material and Methods

One-hundred-thirty-six unrelated individuals with hypercholesterolemia were selected and treated with atorvastatin (10 mg/day/4 weeks). They were genotyped with a panel of ancestry informative markers for individual African component of ancestry (ACA) estimation by SNaPshot^® and SLCO1B1 (c.388A>G, c.463C>A and c.521T>C) and SLCO2B1 (−71T>C) gene polymorphisms were identified by TaqMan^® Real-time PCR.

Results

Subjects carrying SLCO1B1 c.388GG genotype exhibited significantly high low-density lipoprotein (LDL) cholesterol reduction relative to c.388AA+c.388AG carriers (41 vs. 37%, p = 0.034). Haplotype analysis revealed that homozygous of SLCO1B1*15 (c.521C and c.388G) variant had similar response to statin relative to heterozygous and non-carriers. A multivariate logistic regression analysis confirmed that c.388GG genotype was associated with higher LDL cholesterol reduction in the study population (OR: 3.2, CI95%:1.3–8.0, p < 0.05).

Conclusion

SLCO1B1 c.388A>G polymorphism causes significant increase in atorvastatin response and may be an important marker for predicting efficacy of lipid-lowering therapy.