农药人工抗原合成方法的设计与优选

农药人工抗原的合成直接影响后期制备抗体的质量,对于建立农药分子特异、灵敏的免疫分析方法具有关键性作用.综述了国内外农药人工抗原合成过程中的农药分子半抗原的设计原则、合成方法,人工抗原的设计、优选及影响因素等方面的研究进展.并对农药残留免疫分析技术存在的问题和应用前景进行了讨论.     

农药分子半抗原合成的研究进展

农药分子半抗原的合成直接影响后期制备抗体的质量,对于建立农药分子特异、灵敏的免疫分析方法具有关键性作用。综述了国内外农药人工抗原合成过程中的农药分子半抗原的设计原则、合成方法及影响因素等方面的研究进展。     

氰戊菊酯免疫分析关键试剂人工抗原的合成与应用效果

以氰戊菊酸、间苯氧基苯甲醛为原料,利用酰氯与伯胺的活泼反应,合成了一种含有3个碳原子长度连接臂的氰戊菊酯半抗原,并通过核磁共振鉴定;用活泼酯法将合成的氰戊菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和检测抗原,紫外-可见连续光谱扫描结果显示,所制备的人工抗原的图谱具有载体蛋白和半抗原的特征峰叠加现象,表明偶联成功;人工抗原的免疫结果显示,以BSA偶联物免疫小鼠后获得抗血清效价分别为160 000、140 000和110 000,间接竞争ELISA(酶联免疫吸附分析)测定抗体IC50(半数抑制浓度)值为35.1 μg/L,与其他供试农药的交叉反应率均＜1%,为氰戊菊酯抗体研制及免疫分析检测技术研究提供了关键试剂.     

农药多残留免疫分析研究进展

农药多残留免疫分析在农药多残留分析中发挥越来越大的作用,其主要途径有设计通用半抗原、合成多决定簇人工抗原和混合使用多种抗体.介绍了农药多残留免疫分析的研究进展、各种方法的研究现状,讨论了其存在的问题和发展前景.     

三唑磷人工半抗原、抗原、抗体的制备方法

本发明是关于三唑磷人工半抗原、人工抗原和特异性抗体的制备方法，属于农药免疫化学技术领域。以O-乙基硫代磷酰二氯为原料，与三唑磷的合成中间体1-苯基-1，2，4-三唑醇在催化剂作用下反应生成一氯物，一氯物与氨基丁酸在缚酸剂的作用下反应生成三唑磷半抗原TZLBu，     

拟除虫菊酯类农药通用人工抗原合成及免疫原性鉴定

[目的]为建立拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析方法,对拟除虫菊酯通用人工抗原的合成鉴定进行研究。[方法]根据拟除虫菊酯农药公共结构设计合成了3种通用半抗原,并通过高分辨质谱和核磁共振氢谱对其结构进行鉴定。通过活性酯法将3种通用半抗原分别与多聚赖氨酸(PLL)和牛血清蛋白(BSA)偶联制备成免疫抗原和包被抗原,采用紫外吸收法鉴定。将3种免疫抗原免疫小鼠,制备了拟除虫菊酯抗血清,非竞争间接酶联免疫吸附分析方法测定抗血清效价。[结果]通用半抗原和人工抗原制备成功,合成的人工抗原具有较高的免疫原性,3种抗血清效价分别达到3.2×104、3.2×104、6.4×104。[结论]成功制备了拟除虫菊酯通用人工抗原,为拟除虫菊酯农药多残留免疫分析的方法研究奠定了基础。     

农药小分子半抗原合成的研究与应用

在农药残留免疫分析中,农药小分子半抗原的分子设计及合成是基础和关键。本文对近年来国内外关于农药小分子半抗原的设计及合成、合成的影响因素、半抗原与载体蛋白偶联方法的研究现状及应用作一综述。     

溴氰菊酯人工抗原及多克隆抗体制备

以二溴菊酸和4-[(4-硝基苯)氧基[苯甲醛为原料经4步反应合成了溴氰菊酯半抗原1-氰基[4-(4-氨基苯)苯基]甲基-2,2-二甲基3-(2',2'-二溴乙烯基)环丙烷羧酸酯;用重氮化法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)相偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法估算偶联比分别为11:l和8:1;以BSA偶联物作免疫抗原免疫日本大耳白兔制备溴氰菊酯多克隆抗体,间接非竞争ELISA法测定两个抗血清效价分别为100000和80000,间接竞争ELISA法测定抗体特异性结果表明所制备的抗体测定溴氰菊酯的IC50值为0.16 mg/L,与其他供试农药的交叉反应率均≤1%.制备的溴氰菊酯人工抗原和多克隆抗体为研究建立溴氰菊酯农残免疫快速测定方法奠定了基础.     

一种新型氰戊菊酯农药人工抗原的合成鉴定与免疫效果的探索

文献报道的氰戊菊酯半抗原结构有多种,分别从氰戊菊酯二苯醚和α-氰基部位引出连接臂合成人工抗原。为了探寻抗体与目标分子互作取向规律,以氰戊菊酯为载体,基于半抗原不同连接臂位点,同时也考虑到二苯醚和α-氰基结构为多种菊酯农药所共有,因此从其特征结构氰戊菊酸苯环结构上引出连接臂位点设计了一种新半抗原,采用α-异丙基苯乙腈等为主要原料,分别经过6和7步反应合成了两种连接臂不同的新结构的半抗原,并采用质谱和核磁共振手段对该新化合物进行结构表征;然后通过重氮化和活泼酯法将两种半抗原共价偶联到牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA),经过紫外光谱扫描、电泳进行鉴定,证明偶联成功,免疫小鼠结果 IC50值为δ2.4,与相关拟除虫菊酯农药有一定交叉反应,为抗原抗体识别位点和机制的探索提供了新的数据支撑。     

烟嘧磺隆人工抗原的合成与鼠源多克隆抗体的制备

为了制备烟嘧磺隆的多克隆抗体、建立烟嘧磺隆残留的免疫分析方法,以2-氨基磺酰基-N,N-二甲基烟酰胺(ASDM)和琥珀酸酐为原料合成半抗原,采用活泼酯法制备人工抗原并免疫小鼠。结果表明:经紫外可见吸收光谱扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,人工抗原合成成功,半抗原与卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)的偶联比分别为10.5∶1和26.9∶1。5次免疫后小鼠抗血清的效价均达到1∶16 000以上,以ASDM-BSA为免疫原的小鼠产生了抑制烟嘧磺隆的多克隆抗体,建立的间接竞争ELISA方法对烟嘧磺隆的检测范围是1ng·mL-1~10μg·mL-1。为进一步建立更为高效、灵敏和方便的烟嘧磺隆ELISA检测方法提供了参考。     

咪唑乙烟酸人工抗原的合成与鉴定

[目的]合成咪唑乙烟酸完全抗原并加以鉴定。[方法]以除草剂咪唑乙烟酸原药、草酰氯以及六氨基己酸等为起始原料,通过亲核取代、水解等反应合成了咪唑乙烟酸的半抗原。用碳二亚胺法将半抗原与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,用混合酸酐法将半抗原与鸡卵清蛋白偶联制备包被原。[结果]半抗原的结构经IR、UV、1H NMR以及HPLC-MS确证。经紫外光谱分析,计算得出半抗原与牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白的结合比为18∶1和7∶1。[结论]紫外光谱分析证实咪唑乙烟酸抗原合成成功,该抗原可用于咪唑乙烟酸多克隆抗体和ELISA检测试剂盒的研制。     

一种新型溴氰菊酯农药半抗原的合成及应用效果

利用化学方法合成了一种溴氰菊酯新型半抗原,并通过核磁共振鉴定;用活泼酯法和EDC法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法鉴定表明吸收峰出现在305nm,发生了红移,计算偶联比分别为7:1和6:1;免疫小鼠后获得抗体的效价为64 000,IC<,50>为0.16μg/mL.研究为研制溴氰菊酯农药残留免疫速测试剂,建立免疫速测技术奠定了基础.     

赖氨酸化甲胺磷的合成与鉴定

甲胺磷是一种高效剧毒有机磷农药,为了建立其免疫快速分析方法,合成赖氨酸化甲胺磷中间体是制备高质量甲胺磷人工抗原、抗甲胺磷抗体的前提。用O,S-二甲基硫代磷酰氯与赖氨酸直接反应,通过元素分析、红外光谱和质谱方法对赖氨酸化甲胺磷进行鉴定。     

环境荷尔蒙邻苯二甲酸二甲酯的人工全抗原合成与表征

4-硝基邻苯二甲酸经过酯化、还原和与牛血清白蛋白偶联,成功合成了邻苯二甲酸二甲酯人工抗原,为其免疫分析方法的建立提供了条件。产物经红外光谱、紫外光谱和核磁共振鉴定分析确定。     

毒死蜱人工抗原的合成及多克隆抗体制备

由毒死蜱与3-巯基丙酸在碱性条件下反应,合成了毒死蜱半抗原。然后通过碳二亚胺法将毒死蜱半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)共价偶联,得到了免疫抗原和包被抗原。用免疫抗原免疫兔子获得了高效价的多克隆抗体,抗血清效价达到了1:160000。通过试验确立了毒死蜱标准曲线,检测限为0.5μg.L-1,抑制中浓度I50为18.2μg.L-1,检测线性范围为1.8～1000μg.L-1。     

一种新型高效电化学发光免疫检测标记物三联吡啶钌衍生物的合成

电化学发光免疫测定是电化学发光和免疫测定相结合的产物.它的标记物的发光原理是通过标记物与抗原或抗体连接,制成抗原、抗体标记物,然后在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应.三联吡啶钌衍生物为水溶性,在电化学发光反应中表现高效和稳定,被广泛应用于电化学发光免疫测定.探索了新型高效的三联吡啶钌的合成,以4,4′-二甲基-2,2′-联吡啶为原料,成功合成了双(2,2′-联吡啶)[4-(4-甲基-4′-正丁酸)-2,2′-联吡啶]钌(Ⅱ)双六氟磷酸盐.     

In vitro evolution of an antibody fragment population to find high-affinity hapten binders

Recently, we constructed a focused antibody library tailored to interact with haptens. High functionality of this library was demonstrated, as specific binders could be retrieved to a range of different haptens. In the current study we have developed a mutagenesis and selection strategy in order to further fine-tune the hapten binding properties of these antibody fragments. Testosterone was chosen as model antigen for the investigation. A population, rather than a single clone, originating from this focused library and enriched for testosterone binders, was subjected to random mutagenesis and different phage display selection strategies of various stringencies. These included consecutively lowering the antigen concentration and having, or not having, soluble hapten present during the phage capture and elution steps. The different selection procedures resulted in a considerable increase in apparent affinities for several of the selected populations, from which the highest affinity antibody isolated had a K(D) of 2 nM, corresponding to an approximately 200-fold affinity improvement compared with the best clone of the starting population. Importantly, the polyclonal nature of the starting material allowed for the identification of novel unrelated variants that differed in fine-specificity, demonstrating that this approach is valuable for exploring different parts of structure space.