牡蛎和泥蚶过氧化氢酶的性质比较

对牡蛎和泥蚶过氧化氢酶(Cat)的性质进行比较。结果表明两者的PAGE谱带于同一位置，相对分了质量约为230kD，含有4个亚基。影响酶活力的温度相同，50℃以上酶活力明显下降；酶的最适pH5～8，但牡蛎Cat在酸碱条件下酶活力下降明显。     

苹果过氧化氢酶的纯化及性质研究

新鲜苹果经匀浆、抽提、硫酸铵盐析、DEAE-Cellulose柱层析,获得纯化苹果过氧化氢酶(CAT)液。纯化CAT酶液蛋白含量26.8mg/mL,活力843Units/mL,比活力31.5Units/mg。经过温度和pH考察,酶的最适温度为50℃、最适pH值为5.0。金属离子影响为:Cu2 和Mn2 对该酶有不同程度的激活作用,Na 对该酶有一定程度的抑制作用。以过氧化氢为底物,Lineweaver-Burk双倒数作图法求得此酶的Km和Vmax分别为2.27mmol/L和2.5μmol/min。     

芦荟过氧化氢酶的分离纯化和性质研究

目的：获得库拉索芦荟过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究。方法：采用硫酸铵分级沉淀,DEAESepharose阴离子交换层析,CM-Sepharose 阳离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE 鉴定酶的纯度、分子质量。结果：从芦荟中分离纯化获得电泳纯的过氧化氢酶,纯化倍数为228.05倍,酶活力回收率为14.10%,比活力达17427.30U/mg。该酶的分子质量为239.90kD,亚基分子质量为60.60kD。推测该酶由4 个相同亚基构成。该酶最适温度为45℃,最适pH 值为7.5,以过氧化氢为底物测定该酶的表观Km 为34mmol/L。结论：成功分离纯化获得过氧化氢酶,该酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受性。     

大豆过氧化氢酶的分离纯化及性质研究

新鲜大豆芽经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的过氧化氢酶。该酶酶活回收率为30.92%,纯化倍数为293.09,酶比活力达到26 322.43 U/mg。该酶全分子质量为234.9 kD,亚基分子质量为57.42 kD;最适pH值为7.2,最适温度为30 ℃,在pH 4.0～10.6及25～35 ℃范围内有较好的稳定性;在30 ℃、pH 7.2条件下测得该酶对过氧化氢的Km值为31.82 mmol/L;十二烷基硫酸钠、草酸、Ag+、Cu2+对该酶有强烈的抑制作用,Pb2+对该酶有双重作用,低浓度时有激活作用而高浓度时抑制酶活性。     

重组葡萄糖脱氢酶酶学性质研究

葡萄糖脱氢酶可用于高纯度低聚果糖和葡萄糖酸钙的生产，一种重组葡萄糖脱氢酶表达、纯化后，对该酶酶学性质进行了研究。最适反应pH值8．4，最适反应温度37℃，在温度低于45℃条件下，酶活力稳定性好。在最适温度和pH条件下，以葡萄糖为底物时葡萄糖脱氢酶的米氏常数Km=20．09mmol／L，以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）为底物时的米氏常数Km=0．10mmol／L。     

甘南牦牛肝过氧化氢酶超滤纯化工艺及酶学性质研究

采用超滤工艺从甘南牦牛肝中分离纯化过氧化氢酶,得出的超滤最佳工艺为超滤膜截留分子质量250 kDa、超滤温度25 ℃、压力0.20 MPa、流速30 m/s、浓缩倍数为3倍。酶学性质研究结果显示,该酶最适温度、pH值分别为35 ℃和7.5,米氏常数（Km）值为53.8 mmol/L。     

定点突变提高过氧化氢酶热稳定性和催化效率

过氧化氢酶催化过氧化氢分解形成水和氧,主要作用是保护细胞免受活性氧(ROS)的损伤,尽管其在工业上被广泛使用,但因热稳定的不足限制了它的使用前景。本研究以Bacillus pumilus ML413来源的血红素过氧化氢酶(Kat X2)为研究对象,采用定点突变技术提高其热稳定性及催化效率。利用Po PMu Si C algorithm软件计算并预测了其潜在突变位点的折叠自由能,根据预测的结果,选择了其中自由能最低的3个位点(K117V, K117I和K117M)进行突变。结果发现,对K117位点进行突变,可以有效提高Kat X2的热稳定性,突变体K117V在60℃下半衰期比野生型Kat X2提高38 min,催化效率较突变前提高31.7%。根据结构分析发现,该点突变并未改变Kat X2的二级结构。突变体K117V具有良好的工业应用潜力。     

粘质沙雷氏菌马来酸顺反异构酶表达纯化及酶学性质

从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)中扩增得到马来酸顺反异构酶基因。将该基因连接到p ET24a载体上,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现了成功表达。酶学性质研究表明,重组酶的比酶活力为48.01 U/mg。其最适温度为37℃,最适p H为8.4。在最适反应条件下,Km值为4.20 mmol/L,Vmax为1.27 mmol/(L·min),kcat为4.38 s-1,催化效率kcat/Km为1.04 L/(mmol·s)。研究结果进一步显示,马来酸顺反异构酶具备良好的热稳定性(55℃半衰期为1.5 h)及高达99%以上的转化率,为马来酸顺反异构酶的进一步研究和工业应用制备高纯度的富马酸提供了理论基础和支持。     

TG酶性质及在肉类重组产品中的应用

TG酶是一种能够催化蛋白质分子内或分子间产生交联作用的生物酶,因此作为肉类重组加工的一种手段而得到应用。近些年来,国内外对TG酶在肉类重组制品中的应用进行了许多研究。随着消费人群对健康食品认识的提高,食品的营养价值及其安全性越来越受到人们的关注。TG酶作为新型的食品添加剂,其来源广、添加量少、不会有副产物生成,对人体是非常安全健康的。本文概述了TG酶的催化机制,并从TG酶的基本性质和在肉类重组制品中的应用方面进行综合分析。具体讨论了TG酶的分子与结构、热稳定性、pH稳定性、钙离子对其酶活性的影响、高压对其催化的影响、TG酶底物、TG酶浓度对重组肉制品粘接性的影响、金属离子对其酶活性的影响与TG酶催化不同肉类蛋白发生交联的能力。     

贻贝过氧化氢酶的纯化及部分性质

新鲜贻贝肉匀浆抽提液经硫酸铵盐析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层纯化,得到一种过氧化氢酶。该酶为糖蛋白,亚基分子量约为７６０００,中性糖含量约为１０．５６％,研究结果表明,贻贝过氧化氢酶的最佳ＰＨ７．０左右,对热不稳定,４５℃保温１５ｍｉｎ,酶的残余活力约为７０％;６０℃保温１５ｍｉｎ,则酶的残余活力仅剩１０．６％左右。ＮａＮ３、ＫＣＮ及某些金属离子如Ｐｂ＾２＋、Ｈｇ＾２＋、Ｆｅ＾２＋、Ｃｄ     

烟草与黄瓜花叶病毒互作中过氧化氢酶活性的变化

研究了12个不同抗性水平的烟草品种接种黄瓜花叶病毒前后过氧化氢酶活性的动态变化及其与烟草抗病性的关系。结果表明,接种病毒后抗、感品种的过氧化氢酶活性总体水平比对照降低,但酶活性的动态变化规律与烟草抗病性之间的相关性并不显著。利用DPS数据处理系统分析表明:酶活性变化差值及其平均值与病情指数之间均不存在显著相关性,说明以接种前后植物体内酶活性的变化值作为抗病性鉴定的指标在烟草-黄瓜花叶病毒体系中是不可行的。     

重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性研究

目的研究重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性。方法测定其酶学动力学参数Km和Vmax,最适pH和最适温度;研究不同pH和不同温度条件下酶的稳定性,以及金属离子和EDTA对酶的活性与稳定性的影响。结果重组猪羧肽酶B的Km为0.27 mmol/L,Vmax为222.22μmol/min,最适pH为7.65,最适催化温度为25℃;pH在5.0~9.0范围内,温度在4~30℃稳定性良好,Cu2+和EDTA抑制酶活性,Co2+促进酶活性。结论重组猪羧肽酶B的酶学性质与报道的提取猪羧肽酶B的性质基本相同,pH5.0~9.0范围内稳定,在4~30℃时稳定性好。     

Microbial Transglutaminase and Recombinant Cystatin Effects on Improving the Quality of Mackerel Surimi

ABSTRACT: Effects of microbial transglutaminase (MTGase), recombinant cystatin, or their combination on the gel properties of mackerel surimi were investigated. The addition of MTGase caused the cross-linking of myosin heavy chain (MHC) and substantially increased the gel strength (from 536.6 to 2012.4 g × cm), while the recombinant cystatin could effectively prevent the MHC degradation and gel softening during the production of mackerel surimi-based products. Combined use of MTGase and recombinant cystatin revealed synergistic effectiveness on improving the quality of mackerel surimi (increased from 435 to 2438 g × cm, set at 45 °C for 20 min).     

不同处理对烟草种子萌发及过氧化氢酶活性的影响

以烤烟型品种NC89为材料 ,通过浸种处理研究了不同K+浓度、H+浓度、渗透势及H2 O2 等对烟草种子萌发过程中呼吸速率和过氧化氢酶活性的影响。 0 .0 1～ 0 .1mol/LKNO3处理对种子萌发过程中活力指数和过氧化氢酶活性有明显的促进作用 ;0 .0 0 1～ 0 .0 1mol/LHCl处理后其活力指数、第 4天的过氧化氢酶活性和呼吸速率都比对照高 ;2 0 0～ 30 0g/L的PEG - 6 0 0 0溶液浸种 2 4h ,对烟草种子活力的提高也有明显效果 ;0 .3%H2 O2 虽能提高烟草种子的呼吸速率 ,但其发芽势及活力指数均低于对照     

重组羧肽酶原B突变体C383A的纯化与性质研究

目的纯化羧肽酶原B突变体C383A并研究其酶学性质。方法用DEAE-FF离子交换树脂纯化C383A,测定其动力学参数,温度对酶活性的影响、温度稳定性、最适pH以及pH稳定性等酶学性质,并与野生型比较。结果纯化后获得高纯度突变体C383A,与野生型相比,催化效率及稳定性均有提高,但与底物的亲和力降低,随着温度的上升催化速率的增长率低于野生型。结论将重组羧肽酶原B第383位Cys突变为Ala可对酶的性质产生影响,与野生型比较,C383A提高了酶的催化效率及温度和pH稳定性。     

Improvement of Hairtail Surimi Gel Properties by NADPH-Sulfite Reductase, Recombinant Cystatin, and Microbial Transglutaminase

ABSTRACT: Effects of nicotinamide dinucleotide phosphate (NADPH)-sulfite reductase, recombinant cystatin, and microbial transglutaminase (MTGase) or their combination on hairtail surimi quality were investigated. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showed that adding NADPH-sulfite reductase could effectively recover native myosin. Apparent cross-linking of hairtail myosin during the setting process was observed with added MTGase, while myosin degradation on the heating process was substantially retarded with recombinant chicken cystatin. The combined use of NADPH-sulfite reductase, recombinant chicken cystatin, and MTGase exhibited a greater effect on improving hairtail surimi quality.     

重组人透明质酸酶3种活性测定方法的比较

目的采用不同的检测方法测定重组人透明质酸酶活性,以确定不同条件下最适宜的检测方法。方法采用3,5-二硝基水杨酸法、对-二甲氨基苯甲醛法、浊度法测定重组毕赤酵母发酵上清液和凝胶过滤分离产物中透明质酸酶活性,并分析比较其结果。结果 3,5-二硝基水杨酸法与对-二甲氨基苯甲醛法的线性范围分别是50～450 U/mL,50～350 U/mL。浊度法的线性范围较小,为0～10U/mL。3种方法的RSD值分别是2.71%,11.71%,0.65%。结论发酵上清液中的透明质酸酶适合用3,5-二硝基水杨酸法测定,凝胶过滤产物用浊度法测定效果良好。     

高效降解牛奶过敏原蛋白酶菌种筛选及其重组植物过氧化氢酶的功能验证

αs1酪蛋白是奶制品中主要的过敏原,为了高效地去除过敏原,从3 000株左右野生菌中筛选获得一株脱敏效果好的枯草芽孢杆菌S7,并分别采用高效液相色谱技术(HPLC)和液相色谱串联二级质谱(LC-MS/MS)分析了 目标菌中关键酶制备的脱敏奶制品的风味与生成的生物活性多肽.通过与另一株枯草芽孢杆菌S21对比后发现,S7具...