毕赤酵母产类人胶原蛋白发酵条件的优化

胶原蛋白是结缔组织中一种重要蛋白质,具有抗皱、抗老化和补钙壮骨的功效,在食品工业中应用广泛.由于胶原蛋白的需求量大,因此利用重组微生物生产胶原蛋白成为近年来的研究热点.该文采用重组有类人胶原蛋白基因的毕赤酵母,通过优化培养基成分,使其在无机盐培养基中表达胶原蛋白.首先,类人胶原蛋白在每24 h补加体积分数1.5％甲醇诱...     

类人胶原蛋白—锌螯合物的制备及相关研究

为了获得生物利用率高且生物安全性良好的补锌制剂,本文采用水体系合成法制备类人胶原蛋白（human-like collagen,HLC）-锌螯合物,考察pH值和配位比对锌螯合率的影响,并通过紫外—可见吸收光谱和傅立叶红外光谱研究该锌螯合物。优化的最佳工艺条件为：体系pH值6.0且类人胶原蛋白与ZnSO4的质量比10∶4。光谱研究结果表明,类人胶原蛋白和Zn2＋之间存在相互作用,生成的锌螯合物是一种不同于HLC的新化合物;羰基和亚氨基均参与HLC-Zn螯合物的形成过程,且该螯合物保持HLC分子原有的α-螺旋结构。因此,本文的研究结果为类人胶原蛋白—锌螯合物的大规模制备和进一步研究开发做出了有益探索。     

鱼骨胶原蛋白的纯化及其特性的初步研究

本文研究了鲨鱼、鲢鱼、草鱼和罗非鱼鱼骨胶原蛋白的纯化方法并对其特性进行了初步研究.SDS-PAGE电泳结果表明,所提取的四种胶原蛋白纯度均较高,相比之下,鲨鱼骨胶原蛋白纯度最高.通过蛋白酶解研究发现,四种鱼鱼骨胶原蛋白均可被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,水解产物分予量大小各异,成分复杂.酶解蛋白图谱结果表明,不同鱼种鱼骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱有一定差异.鱼品种越接近,提取的骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱差异越小;反之,鱼品种差异越大,骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱差异也越大.氨基酸组成分析表明,鲨鱼和鲢鱼骨胶原蛋白中,甘氨酸含量最丰富,依次是丙氨酸、谷氨酸和精氨酸.     

黑木耳胶原蛋白酶法提取及分离纯化研究

为获得优质的黑木耳胶原蛋白,本研究通过单因素实验和响应面法对碱性蛋白酶法提取黑木耳胶原蛋白的工艺条件进行优化,并采用盐析、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤等方法对黑木耳胶原蛋白进行分离纯化。结果表明：在酶解温度55℃、pH 8.5条件下优化得到的黑木耳胶原蛋白最佳提取条件为：碱性蛋白酶（2240 IU/mg）添加量7%、料液比1∶68 g/mL、酶解时间2.0 h,此条件下,黑木耳胶原蛋白得率为0.65%;最佳盐析条件为：4 mol/L NaCl、24 h、15℃;最佳DEAE-52分离条件为：洗脱时间160 min、上样浓度300μg/mL、上样pH 7.2、NaCl洗脱浓度0.2 mol/L;经Sephadex G-75凝胶过滤层析后胶原蛋白纯度可达到72.6%,胶原蛋白回收率74.3%。因此,碱性蛋白酶法及盐析、DEAE-52、Sephadex G-75层析可有效提取纯化黑木耳胶原蛋白,为黑木耳胶原蛋白的深入研究及应用开发提供了理论依据。     

胶原蛋白的分离纯化及氨基酸组成分析

以新鲜猪皮为原料,用酶法提取胶原蛋白。对提取物用超滤、盐析等方法进行分离纯化,超滤方法较合适。通过电泳方法确定胃酶提取物中胶原蛋白的分子量分布范围在8～10ku,胰酶提取物中胶原蛋白的分子量分布范围在3～5ku。氨基酸分析表明胶原蛋白中Hyp含量达8.5%。     

重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽在大肠杆菌中的表达纯化及功能鉴定

本研究构建了编码重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽基因的原核表达载体pET28a-rhCⅠ,并将其转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达。采用PCR的方法扩增重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽的cDNA序列,并将其克隆到原核表达载体pET28a上;重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达,并优化表达条件。利用SDS-PAGE和WesternBlot检测表达产物。大量表达重组蛋白,采用镍亲和层析进行纯化,并对纯化后的蛋白进行体外抗氧化研究以及促细胞增殖分析。结果表明,通过大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达获得了分子量约为40ku的重组蛋白,与预期相符。经镍亲和层析获得纯度较高的蛋白,通过DPPH实验证明其有一定的抗氧化活性;而且MTT实验证实该蛋白可以促进小鼠成纤维细胞3T3细胞的增殖,为其在食品、化妆品和医疗行业的应用提供一定的理论依据。     

鲨鱼鱼皮、鱼骨胶原蛋白的纯化及其特性的初步研究

胶原蛋白有许多优良性质且用途广泛。水产动物下脚料如皮、骨、鳍等含丰富的胶原蛋白。本文研究了灰星鲨鱼皮、骨胶原蛋白的提取及纯化方法。SDS-PAGE电泳分析结果显示,所提取的胶原蛋白纯度均较高。通过酶解性质的研究发现:灰星鲨鱼皮、骨胶原蛋白均可被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,水解产物相对分子质量大小各异,成分复杂。酶解蛋白图谱结果提示:鲨鱼皮、骨胶原蛋白一级结构相近。氨基酸组成分析表明,灰星鲨鱼皮及骨胶原蛋白中,甘氨酸含量最高,其余依次是丙氨酸、谷氨酸和精氨酸。     

白鲢鱼鳞胶原蛋白提取工艺条件优化研究

利用白鲢鱼鳞为原料,采用酶法提取胶原蛋白,并利用响应面分析法对影响鱼鳞胶原蛋白提取率的关键因素的分析,得到酶法提取白鲢鱼鳞胶原蛋白的最佳工艺条件为底物浓度2.89％、加酶量0.26％、酶解温度58℃、酶解时间54min,在此条件下提取,提取液中胶原蛋白提取率可达57.84％以上.     

金枪鱼皮胶原蛋白肽分离纯化工艺的研究

采用超滤法、凝胶层析柱法、离子交换法、高效液相分析法等研究金枪鱼皮胶原蛋白肽(TSCP)的分离纯化工艺。结果表明:通过超滤分离分子量越低TSCP组分DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子清除率越高,且分子量小于3kDa的TSCP-IV组分的清除率最高,IC50值分别为0.17,0.20,1.64mg/mL。对TSCP-IV进行Sephadex G-25凝胶柱过滤层析后得到4个峰,峰GP-I的得率较高,且峰GP-I对DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子的清除率较高,IC50值分别为50.01,86.56,623.75μg/mL。将凝胶过滤组分GP-I经离子交换柱用不同pH值溶液梯度洗脱后得到4个峰,pH 5.61时的洗脱峰IP-II的得率较高,且IP-II对DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子清除率较高,IC50值分别为21.59,20.28,121.23μg/mL。用高效液相色谱分析表明,IP-II为纯度较高的金枪鱼皮胶原抗氧化肽段。     

胶原蛋白的制备，分离纯化和鉴定表征

本文介绍了胶蛋白的制备方法然后讨论了色谱技术在胶原及其水解产物的分离纯化万面的应用．最后介绍了胶原蛋白的鉴定表征方法。     

海洋胶原低聚肽的分离纯化及其抗氧化活性研究

通过总抗氧化能力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力及还原能力实验,对海洋胶原低聚肽的体外抗氧化活性进行考察,然后采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,测定收集得到的11个组分的总抗氧化能力。结果表明,海洋胶原低聚肽具有一定的总抗氧化能力、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除能力,并且具有一定的还原能力;RP-HPLC分离纯化后,5个组分的抗氧化活性显著提高,对总肽整体的抗氧化活性起到了重要的作用,并且疏水性肽组分对抗氧化活性的贡献大于亲水性肽组分。      

鲢鱼鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽提纯及结构鉴定研究进展

为了利用鲢鱼鱼鳞生产胶原蛋白,采用生物酶解技术制备胶原蛋白抗氧化活性肽,可以提高水产品加工附加值且更好地保护环境。本文综述了鲢鱼鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽的不同制备方式(包括固相化学合成法、液相化学合成法、酶水解法、DNA重组法等)和分离纯化方法(包括超滤法、离子交换色谱法、凝胶色谱法、反相高效液相色谱法等),并对其结构鉴定方式(包括质谱分析、连续流快原子轰击质谱、电喷雾离子化质谱、基质辅助激光解析等)做了阐述,以期为鲢鱼鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽的进一步开发利用提供理论依据。     

海洋骨胶原低聚肽钙的分离纯化及结构鉴定

以三文鱼骨作为原料,以碳酸钙作为钙源制备出海洋骨胶原低聚肽钙,对其总蛋白含量、螯合率、得率进行测定,结果表明总蛋白含量为62.56%±0.26%,螯合率为51.38%±0.09%,螯合物得率为42.06%±0.10%。然后利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对其进行分离纯化,收集得到8个组分峰,利用Q-TOF质谱仪测定肽序列,共分析出22个肽段,分子量大多在1000 u以下。      

骨胶原蛋白的制备及性能表征研究进展

胶原蛋白具有良好的功能特性和生物相容性,在食品、医药和化工等领域显示出极大的应用前景。对动物骨胶原蛋白的提取、分离纯化及主要性能研究现状进行了综述。     

一种胶原蛋白寡肽促进皮肤胶原蛋白与透明质酸合成的研究

研究罗非鱼鱼鳞胶原蛋白寡肽对人皮肤成纤维细胞透明质酸分泌以及对小鼠真皮中胶原蛋白合成的影响。采用WST-8法测定了该胶原蛋白寡肽对人皮肤成纤维细胞增殖的影响,ELISA法检测了胶原蛋白寡肽对人皮肤成纤维细胞透明质酸分泌的影响;以D-半乳糖衰老模型小鼠为实验对象,考察胶原蛋白寡肽对小鼠真皮中胶原蛋白合成的影响。结果表明,胶原蛋白寡肽能促进人皮肤成纤维细胞增殖（p<0.01）,能促进人皮肤成纤维细胞透明质酸和小鼠真皮中胶原蛋白的合成（p<0.05）。说明该胶原蛋白寡肽能有效促进透明质酸和胶原蛋白的合成。      

超声波辅助酶法提取草鱼皮胶原蛋白及其纯化

本文研究了超声波辅助提取草鱼皮胶原蛋白的工艺。以超声功率、超声时间和酶解时间为实验因素,胶原蛋白提取率为响应值,利用Box-Behnken设计实验及响应面法分析实验,确定其最佳提取工艺条件。结果显示:最佳工艺条件为超声功率310 W,超声时间10 min,酶解时间29 h,此时胶原蛋白提取率达到68.67%,与模型理论预测值（68.80%）较为相近,相对误差仅为0.189%。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱（SDS-PAGE）和傅里叶红外光谱（FTIR）谱图,对比超声波作用下与无超声波作用的胶原蛋白发现,超声波对胶原蛋白结构无明显影响。      

Alcalase 2.4L催化牛骨胶原蛋白水解反应及其动力学研究

对碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解牛骨胶原蛋白的工艺以及动力学特征进行了研究。探讨底物浓度、酶量、温度、pH、时间等因素对胶原蛋白水解度的影响,研究确定了碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解牛骨胶原蛋白的最佳水解条件为:在pH8.5,60℃,底物浓度为80g/L,加酶量为40μL/g条件下水解3h,水解度可达13.5%,优于其他蛋白酶。根据所建立的pH-stat酶解体系确定了Km为1.6362mol/L,Vmax为0.3444mol/L·h,为更有效地利用胶原蛋白资源奠定了理论基础。      

甲基丙烯酸酐改性胶原蛋白的研究

用甲基丙烯酸酐改性胶原蛋白,采用单因素和正交试验研究所得的胶原蛋白乙烯基化改性条件为：温度50℃,反应时间2h,甲基丙烯酸酐的用量为1．5mL。通过核磁（^1H-NMR）和红外光谱（FT-IR）对乙烯基化改性前后的胶原蛋白进行表征,证明胶原蛋白被成功改性并在其分子链上引入C—C双键。并对3种不同相对分子质量的胶原蛋白G1、G2和G3进行乙烯基化改性,发现小分子质量的胶原蛋白改性得到的乙烯基胶原蛋白的取代度较大。