实时定量PCR法对牛肉中鸡源性成份的量化检测

目的实现样品中牛源性成份和鸡源性成份的量化分析。方法通过在基因组单拷贝基因上设计引物,绘制模板DNA扩增标准曲线以及确定牛肉、鸡肉质量与DNA浓度的比值常数,利用实时荧光定量PCR技术对四种不同掺混比例的牛鸡瘦肉混合样本中牛源性成份和鸡源性成份所占的质量百分比含量进行分析。结果通过荧光实时定量PCR反应的Ct值、模板DNA扩增标准曲线和质量与DNA的比值常数可以计算出样品中所含牛源性成份和鸡源性成份的质量百分比含量,检测值与理论值之间的绝对误差可控制在5%以内,量化研究结果基本准确。结论对于组织成份单一的样品,可以通过在基因组单拷贝基因上设计特异性的引物,利用PCR技术实现在质量水平上对食品中动物源性成份的量化分析,该技术方法的建立可以为肉类掺假监管工作提供有力的技术支撑。     

利用PCR法检测熟牛肉的肉源性

本文旨在建立实时荧光PCR检测熟牛肉中牛、猪、马等动物源性成分的方法。通过对菏泽市市售熟牛肉进行采样检测,提取熟牛肉中总DNA后进行实时荧光PCR检测,确定Ct值,分析样品熟牛肉中牛、猪、马源性成分。通过检测DNA提取液(纯度1.6~1.7),便能满足实时荧光PCR的检测要求。本次采样检测的12批样品中,2批既检出牛源性成分又检出马源性成分,说明样本可能存在马肉掺假为牛肉的问题。     

多重位点特异性PCR快速检测牛肉中常见掺假动物源性成分

目的:基于动物线粒体cytb基因的多态性位点,建立一种特异性多重PCR体系检测牛肉、猪肉和鸡肉的方法。方法:提取肉类的基因组DNA,利用不同物种mtDNA cytb基因序列的SNP位点的差异,设计特异性引物。进行多重PCR扩增,利用扩增产物片段大小不同,检测牛肉中常见的掺假动物源性成分。通过灵敏性试验,确定最低检测量。结果:实验设计的引物特异性良好,在同一反应体系中,在同一退火温度52℃条件下,牛肉DNA扩增后产生149 bp的特异性条带,猪肉DNA扩增片段为261 bp,鸡肉DNA扩增片段为554 bp,未发生非特异性扩增。且检测的最低浓度达到100 pg/μL,具有高度的灵敏性和适用性。结论:根据动物线粒体cytb基因的差异性位点,开发的多重PCR体系,可一次性地同时检测牛肉、猪肉和鸡肉,可快速、灵敏、高通量地分析食品中掺假动物成分的来源。     

利用多重PCR方法检测牛肉中的掺假肉

应用多重PCR方法鉴别牛肉中掺杂其他肉类。通过查阅相关文献,确定牛肉、猪肉、鸡肉、鼠肉的特异性片段设计引物。牛肉样品通过基因提取试剂盒提取组织DNA,然后加入相应特异性牛肉、猪肉、鸡肉、鼠肉引物和反应试剂,采用多重PCR法同时检测牛肉中掺杂鸡肉、猪肉、鼠肉任意三种肉类混合样品。试验建立的复式PCR方法特异性强,操作简便,对于牛肉中掺杂鸡肉、猪肉、鼠肉的检出限均达到1%(W/W)掺杂量。     

基于rpoB靶基因的PCR法快速检测弓形菌

建立了一种弓形菌(Arcobacter)快速、敏感、特异的PCR检测方法。采用PCR技术扩增弓形菌编码RNA聚合酶β亚基的rpoB基因,并对该方法进行特异性和敏感性测试。结果只有弓形菌在205bp处出现目的扩增带,其他菌株扩增结果均为阴性。该法对弓形菌的检测限可达8.20×102cfu/mL。建立的PCR方法具有操作简便、准确可靠以及灵敏特异的特点,为食品中弓形菌的快速检测提供了新的手段。      

PCR法快速检测熟肉制品中肉类来源

应用分子生物学技术进行熟肉制品种类来源的快速检测是目前市场监控方面的空白.通过查阅国内外的相关文献,同时进行基因序列的比对,确定针时市场上常见肉类猪、牛、羊、鸡的特异性线粒体序列的引物.经过多次重复试验证明,所选定的引物只有在同一种属模板DNA存在的情况下才会发生PCR扩增,特异性强,灵敏度高.建立的方法仅需20 mg的样品,而样品中含有1 mg的待检肉类就可以被检出.     

PCR方法检测花生油掺假研究

采用常规PCR方法和实时荧光PCR方法对花生油中掺入的大豆油和棕榈油进行检测。以5%⁵0%的体积百分比将大豆油和棕榈油掺入到花生油中进行检测,当掺入的大豆油和棕榈油比达到10%时,实时荧光PCR和常规PCR均能检测到大豆和棕榈的内源基因,且重复性和特异性较好。在该研究中,实时荧光PCR方法和常规PCR方法在灵敏度方面并没有显著差异。     

基于PCR原理的常见肉品快速真伪鉴别技术探讨

肉品掺假作为欺骗消费者、违反市场规则的恶性手段,不仅会降低消费者对市场和商家的信任,而且某些恶劣的掺假肉类会危害消费者的健康.因此,肉品快速真伪鉴别技术具有非常重要的意义.     

实时荧光PCR技术快速检测食品中的牛源成分

目的:建立基于实时荧光PCR技术的食品中牛源性成分快速检测方法。方法:以牛线粒体细胞色素b为目的基因,设计特异性引物和探针,通过特异性、灵敏性实验,及模拟混合肉样和市售肉制品检测,对该体系进行验证。结果:该牛源荧光PCR检测体系具有很好的特异性及灵敏性,可检测1pg牛源DNA的存在,对于各模拟肉类样品中掺杂的牛源性成分,其检测限低至0.5%,且经市售加工食品验证具有较好的应用能力。结论:所建立的牛引物探针体系具有特异性好、灵敏度高,快速高效等优点,可用于对食品中牛源性成分的掺假鉴别检测。      

PCR鉴定牛羊肉串搀杂猪肉的方法建立

建立了一种鉴定牛羊肉中掺杂猪肉的PCR检测方法.确定了一对可在牛羊肉中特异并灵敏地检测出所掺杂猪肉成分的引物对,以猪细胞色素b基因组为模板.特异性扩增出130bp的目的片段,而无其他扩增片段影响.在牛羊肉中分别掺杂2%、4%、6%的猪肉,均可灵敏地检测出猪肉成分,无显著性差异;分别经120℃、10min,120℃、30min,115℃、30min,70%、16h处理猪肉,也可灵敏地扩增出特定目的条带,无显著性差异.     

苹果汁和桃汁种类特异性PCR检测方法的研究

本文采用苹果属过敏原蛋白的mal d 4.02基因,桃属微卫星标记MA023a分别作为苹果汁和桃汁特异性引物,并以植物高度保守的叶绿体AccD基因作为内标物,利用PCR检测方法对两种果汁进行种属鉴定。结果表明,特异性PCR检测方法可以准确的对苹果和桃产品进行种属鉴定,苹果、桃属特异性PCR检测方法的最低检测限分别为5、10ng/μL,此方法能快速、准确对苹果汁和桃汁种类进行定性鉴定和掺假检测。      

4种方法提取牛肉干DNA的效果比较

目的探求熟肉干制品最佳的DNA提取方案。方法采用4种不同的方法:CTAB法及3种市售试剂盒法,提取11种不同牛肉干样品的DNA,通过对方法的提取耗时,提取DNA的质量及提取DNA用于实时荧光PCR扩增的效果3方面进行比较。结果 TAKARA试剂盒法提取DNA耗时最短仅需要0.5 h,OMEGA试剂盒法提取的DNA的纯度较好,A 260/A 280比值最接近1.8,Tiangen的深加工食品DNA提取试剂盒法提取的DNA做实时荧光PCR的CT值最小,扩增效果最佳。结论 Tiangen试剂盒法对于熟肉干制品DNA的提取效果更为理想。     

肉制品中牛源性成分多重实时荧光PCR检测 方法的建立及初步应用

目的建立肉制品中牛源性成分的荧光PCR检测方法。方法根据牛特异性线粒体DNA片段,设计合成两对引物,以生、熟牛肉及超市牛肉加工品为材料,建立肉制品中牛源性成分的多重实时荧光PCR检测方法,并用该法与国标法同时对市售的25份肉制品同时进行检测,通过对其他种类的肉源DNA进行扩增验证方法的特异性;对含有不同比例牛肉成分的DNA样本进行检测确定检出限。结果该方法可成功检测出肉制品中的牛源性成分。在25份肉制品检测中,与国标法检测结果一致。该法的特异性为100%,灵敏度检测线为1%。结论本研究成功建立牛源性肉制品的检测方法,该方法快速简便,且具有较高的特异性和灵敏度,可用于市售肉制品中牛源性成分的鉴定。     

食用油脂中DNA高效快速提取方法及实时荧光PCR检测技术的研究

针对食用油脂中提取高纯度和高得率DNA比较难的问题,通过与CTAB法比较研究,并用改良的试剂盒法从食用油脂中高效快速提取到了高纯度和高浓度的DNA,并用实时荧光PCR技术成功地检测出了食用油脂中的内源基因和外源基因.     

Characterization and identification of yeasts from fresh and spoiled ground beef

From 28 samples of fresh and 4 of spoiled ground beef, 197 yeast isolates were obtained. Following identification, 79 strains resulted representing five genera with the genus Candida accounting for 82% of the strains and 61% of the identified species. Other genera found were Rhodotorula, Torulopsis, Trichosporon, and Cryptoccus. With one exception, only Candida was recovered from spoiled beef. The findings indicate that the yeast flora of fresh ground beef is characterized almost exclusively by Candida. Although not definitive, it appears that C. lipolytica, the most frequently isolated species, and C. zeylanoides are more indigenous to ground beef than any of the other 21 species identified.     

乳酸在生鲜牛肉加工中的应用

主要论述乳酸在生鲜牛肉加工中的作用,其中胴体减菌作用、保鲜作用、护色作用、嫩化作用得到重点的阐述。希望为冷鲜牛肉的生产、品质的改善提供理论依据和技术支持。     

基于多重荧光PCR检测的肉及其制品中鸭DNA成分的鉴别方法

针对现有肉制品中鸭DNA成分检测方法不能检测番鸭DNA成分的问题,通过下载番鸭、家鸭及其相近物种的12SrDNA序列,使用CLUSTAL X2进行序列比对,筛选特异性序列,设计了一对通用引物及两条番鸭、家鸭特异性探针,构建了可同时检测番鸭、家鸭DNA成分的实时荧光PCR方法。结果表明:最终构建的检测方法可在掺伪量为0.1%的情况下,检测出样品中的家鸭或番鸭DNA成分。该方法相比普通PCR或单重荧光PCR检测方法节省了劳动力,提高了检测效率,补充了现有检测方法的不足,为更有效地识别掺伪肉类提供技术支持。     

生鲜牛肉调理配制方法对高氧MAP保鲜包装产品保鲜效果的影响研究

以超市新鲜牛肉为原料,以食盐、复合香辛料、料酒添加量作为正交实验因素,研究生鲜调理牛肉在MAP包装下的微生物、色差和pH的变化。实验结果表明,经过调理的生鲜牛肉样品结合高氧MAP包装,在4℃储藏条件下最优组样品第6d产品菌落总数为4.933lgCFU/mL,pH5.76,a*值12.23,符合国家二级生鲜牛肉标准。以菌落总数为目标值进行回归方程优化并试验验证得到最优调理配方为:食盐添加量0.9%、料酒添加量2.0%、香辛料添加量0.6%。