水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

实验是以水牛奶为原料,分离纯化后得到乳清蛋白。利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶5种不同的蛋白酶对水牛奶乳清蛋白酶解以制备抗氧化活性多肽。酶筛选结果显示,中性蛋白酶是最适宜酶解水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽,其酶解液的还原能力和DPPH自由基清除率较其他4种酶高。探讨酶解反应时pH、温度、时间、酶浓度对酶解反应的水解度、酶解液的还原能力和DPPH自由基的清除率的影响,在单因素试验基础上,采用响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明,中性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳工艺参数为:pH为7.4,温度为50.5℃,酶与底物浓度比为2.1%,酶解时间5.0h,此时2mg/mL酶解物的DPPH自由基清除率为32.58%。实测结果与预测值吻合效果良好。     

酶解发酵酸肉制备抗氧化肽的工艺优化

以侗族酸肉、苗族酸肉两种酸肉为原料,采用木瓜、碱性、风味及中性蛋白酶四种蛋白酶进行酶解,测定酶解液短肽得率、羟自由基及DPPH自由基清除率,结果表明碱性蛋白酶酶解液的短肽得率(侗族86.01%,苗族82.52%)、羟自由基(侗族87.48%,苗族79.88%)及DPPH自由基(侗族74.63%,苗族87.87%)清除率最高。通过比较分析苗族酸肉较侗族酸肉短肽得率更高,因此选择以蛋白酶种类、加酶量、酶解时间及料液比为自变量的单因素试验基础上,以苗族酸肉短肽得率及DPPH自由基清除率为评价指标,采用响应面优化最佳酶解条件。结果表明,酸肉抗氧化肽最佳酶解工艺为:碱性蛋白酶添加量12600 U/g、酶解时间1 h、料液比1:1.09(m:V)。在此最优条件下酶解获得的抗氧化肽得率为83.35%,是预测值的98.99%,DPPH自由基清除率力为84.01%,是预测值的97.33%,与预测值基本一致,表明以碱性蛋白酶酶解的酸肉肽具有较高的抗氧化活性及营养价值,同时为酸肉抗氧化肽的开发及利用提供理论依据。     

酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的研究

为优化Alcalase蛋白酶酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,以DPPH自由基清除率作为指标,通过单因素试验考察酶解温度、底物浓度、酶与底物浓度比([E]/[S])、酶解pH和时间对DPPH自由基清除率的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计,建立并分析各因素与清除率之间关系的数学模型;并对酸枣仁蛋白酶解产物的氨基酸组成及含量进行分析。结果表明:酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶解温度51.2℃、酶解pH8.1、底物浓度4.7%,在此条件下DPPH自由基清除率的最大理论值为91.59%,该回归模型具有较好的预测性能,可用于指导生产实践。酸枣仁蛋白酶解产物共含有17种氨基酸,富含脯氨酸、甘氨酸和谷氨酸。     

酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的研究

为优化Alcalase蛋白酶酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,以DPPH自由基清除率作为指标,通过单因素试验考察酶解温度、底物浓度、酶与底物浓度比（[E]/[S]）、酶解pH和时间对DPPH自由基清除率的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计,建立并分析各因素与清除率之间关系的数学模型;并对酸枣仁蛋白酶解产物的氨基酸组成及含量进行分析。结果表明:酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶解温度51.2℃、酶解pH8.1、底物浓度4.7%,在此条件下DPPH自由基清除率的最大理论值为91.59%,该回归模型具有较好的预测性能,可用于指导生产实践。酸枣仁蛋白酶解产物共含有17种氨基酸,富含脯氨酸、甘氨酸和谷氨酸。      

响应面法优化莜麦蛋白的酶解工艺及酶解物抗氧化活性的研究

以莜麦蛋白为原料,采用响应面分析法优化莜麦蛋白制备抗氧化肽工艺。以酶解液的还原能力为指标,研究pH值、加酶量、酶解温度和酶解时间对莜麦蛋白酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素试验的基础上,采用4因素3水平的响应面分析法优化莜麦蛋白制备抗氧化肽工艺,同时研究其酶解物抗氧化活性。结果表明,胰蛋白酶酶解莜麦蛋白的最佳工艺条件为:pH8.1,加酶量16 900U/g,酶解温度55℃,酶解时间2.62h,该条件下制备的莜麦蛋白酶解物具有较好的抗氧化活性。     

酪蛋白抗氧化肽制备工艺及酶解产物特性研究

采用不同蛋白酶酶解酪蛋白,确定AS1,398中性蛋白酶是酶解酪蛋白制备抗氧化肽的优良酶源.通过单因素和响应面回归分析.得到AS1,398中性蛋白酶酶解酪蛋白的优化工艺条件为:底物浓度30mg/mL,水解时间90min,pH7.2.酶底比为2%(w/w),温度为50℃.优化酶解条件下,10mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率为80.43%,IC50为3.96mg/mL,显现出良好的抗氧化性能.高效液相排阻色谱(HPSEC)分析表明,优化条件下产物主要是3500Da以下的一些短肽.     

酪蛋白抗氧化肽制备工艺及酶解产物特性研究

采用不同蛋白酶酶解酪蛋白,确定AS1,398中性蛋白酶是酶解酪蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到AS1,398中性蛋白酶酶解酪蛋白的优化工艺条件为:底物浓度30mg/mL,水解时间90min,pH7.2,酶底比为2%（w/w）,温度为50℃。优化酶解条件下,10mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率为80.43%,IC₅₀为3.96mg/mL,显现出良好的抗氧化性能。高效液相排阻色谱（HPSEC）分析表明,优化条件下产物主要是3500Da以下的一些短肽。      

响应面法优化酶解草菇蛋白制备抗氧化肽工艺

以草菇蛋白为原料,以DPPH自由基清除率为评价指标,采用单因素试验和响应面试验优化酶解工艺,探讨酶种类、酶解温度、酶解时间、底物浓度和酶浓度对抗氧化肽活性的影响,并采用Box-Behnken试验设计的响应面(response surfacemethodology,RSM)分析方法优化工艺.结果表明,木瓜蛋白酶为最佳酶,...     

碱性蛋白酶酶解红花籽蛋白制备抗氧化肽工艺的研究

以红花籽蛋白为原料,2709碱性蛋白酶为实验用酶,红花籽抗氧化肽液吸光度为指标,研究酶解温度、酶解时间、酶添加量、酶解pH、底物质量分数对红花籽抗氧化肽还原能力的影响,并通过响应面分析对酶解工艺条件进行了优化。得到红花籽蛋白酶解的最佳工艺条件为:酶解pH 8.6,酶解温度49℃,酶添加量7 700 U/g(以底物质量计),底物质量分数5.0%,酶解时间2 h。在最佳条件下,红花籽蛋白水解度为6.389%,红花籽抗氧化肽液吸光度为1.017,还原能力较强。     

超声辅助酶解海带蛋白制备抗氧化肽及其活性研究

海带是一种食药两用的海生褐藻植物,营养丰富,其蛋白质含量高、氨基酸种类齐全、比例适当,是酶法制备生物活性肽的理想蛋白原料。实验以海带蛋白为原料,以DPPH自由基清除率为评价指标,采用单因素试验和响应面试验优化超声辅助酶解海带蛋白制备抗氧化肽工艺,探讨酶种类,超声时间、酶底比、酶解温度、pH和超声功率对制备抗氧化肽的影响,并采用Box-Behnken试验设计的响应面（response surface methodology,RSM）分析方法优化工艺。结果表明,中性蛋白酶为最佳酶,酶解海带蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶底比2.3%、超声时间91min、超声功率240、酶解温度44℃,所得的DPPH自由基清除率为84.25%。对所得抗氧化肽DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、还原能力、羟基自由基清除率测定,结果表明其具有较好的抗氧化活性。本实验为酶解海带蛋白制备抗氧化肽工艺优化及海带蛋白抗氧化肽在抗氧化保健食品中的开发应用提供了依据。     

分步酶解制备鲢鱼抗氧化肽的工艺研究

用分步酶解法制备鲢鱼抗氧化肽,首先从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶中筛选出碱性蛋白酶作为第一步酶解用酶,以水解度作评价指标,并得到酶解工艺条件:底物浓度15%,pH9.0,温度50℃,加酶量为24AU/kg。再从剩下的三种酶中筛选出胰蛋白酶与碱性蛋白酶复配,作为第二步酶解用酶,用响应面法进一步优化酶解工艺,考虑到成本和工艺的要求,最终确定的酶解工艺为:碱性蛋白酶水解时间为59.12min,胰蛋白酶水解时间为82.24min,两种酶的添加比例为1:1.48,即碱性蛋白酶添加量为24AU/kg,胰蛋白酶的添加量为35.5AU/kg。最终得到的鲢鱼抗氧化肽可溶性氮70.84%,多肽69.38%,水分4.21%,灰分25.67%;多肽浓度为2mg/mL时对DPPH自由基清除率为19.33%。      

酶解水牛奶制备抗凝血肽的工艺研究

目的:本文以新鲜水牛奶为原料,研究木瓜蛋白酶、中性蛋白酶及碱性蛋白酶复合酶解、混合酶解水牛奶的作用,比较不同水解方式的作用效果;并采用凝血酶滴定改进法测定水解液抗凝血活性。方法:分别进行三种蛋白酶单因素水解实验,确定各种酶的最适水解条件;在此基础上进行复合酶解与混合酶解实验,测定水解度和抗凝血活性。结果:木瓜蛋白酶的最适水解条件为:水解温度60℃、水解时间2.0 h、p H5.0、料水比1∶2（v/v）、酶用量6000 U/（m L底物）;中性蛋白酶的最适条件为:水解温度40℃、水解时间3.0 h、料水比1∶2（v/v）、p H6.0、酶用量6000 U/（m L底物）;碱性蛋白酶的最适条件为:水解温度50℃、水解时间4.0 h、料水比1∶2（v/v）、p H8.0、酶用量6000 U/（m L底物）。复合酶解法制备的水解液其抗凝血活性均高于混合酶解,最高抗凝血活性为52.0 ATU/m L。结论:本实验条件下,加酶组合为\     

响应面优化酶解法制备蒲公英籽蛋白抗氧化肽工艺

以蒲公英籽蛋白质抽提物为原料,采用响应面分析法(RSM)优化酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺。采用碱性蛋白酶酶解制备蒲公英籽抗氧化肽,以酶解产物对DPPH自由基清除力为评价指标,考察酶解p H、底物浓度、酶底比及酶解温度对酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素实验的基础上,采用三因素三水平的响应面分析法确定酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。以酶解时间、酶底比和酶解p H为自变量,研究这3个因素的交互作用及最佳酶解工艺条件并进行验证。研究表明,对酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺的影响因素主次顺序为:p H>酶底比>酶解时间,最佳酶解工艺条件:酶解时间4.90 h,p H8.5和酶底比7.80%。在最佳工艺条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为79.13%。      

鱿鱼肌肉蛋白肽的制备工艺优化及其抗氧化活性

以鱿鱼肌肉为原料,先考察了酶解时间、温度和加酶量对鱿鱼蛋白肽清除羟自由基的影响,再采用BoxBehnken实验设计和响应面分析对鱿鱼肌肉酶解工艺条件进行优化。同时采用清除自由基和小鼠体内抗氧化活性对抗氧化肽的抗氧化活性进行了研究。结果表明:酶解时间、加酶量对羟自由基清除率影响最为显著（p<0.01）,最佳工艺条件为:酶解时间6 h,加酶量0.07 g/10 g,酶解温度55℃。在该条件下,羟自由基清除率的验证值为90.31%±0.54%。鱿鱼抗氧化肽对DPPH·、OH·和O-2·的EC50分别为8.8、16.5和10.3 mg/m L。鱿鱼抗氧化肽高低剂量组的小鼠体内SOD活性分别比空白组高19.2%和14.2%。抗氧化肽高低剂量组小鼠体内的GSH比空白组提高了23.4%和14%。鱿鱼抗氧化肽具有较强的抗氧化活性。      

酶解牡丹籽粕蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

利用制备的牡丹籽粕蛋白为原料,对其进行酶解以获得具有抗氧化活性的多肽,为牡丹籽粕的精深加工提供理论依据。首先进行蛋白酶的筛选,选取最佳的碱性蛋白酶对碱溶酸沉法制备的牡丹籽饼粕蛋白进行酶解;以水解度和DPPH自由基清除力为指标进行单因素实验,分别考察底物浓度、酶解时间、加酶量、pH和酶解温度对制备抗氧化活性肽的影响;以DPPH自由基清除力为响应值,对牡丹籽粕蛋白抗氧化肽的制备工艺进行响应面法优化,确定的最佳制备工艺为:底物浓度0.7%、酶解时间2 h、酶用量4.60%、酶解温度56℃和pH8.0。抗氧化实验结果表明,制备的抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为52.49%;经17种水解氨基酸组成分析证明,必需氨基酸占水解氨基酸总量的32.24%,具有较高的营养价值。     

酶法水解苦荞麦蛋白制备生物活性肽的研究

介绍了采用2709碱性蛋白酶水解苦荞麦蛋白粉制备生物活性肽,并对其纯化效果、抗氧化性、氨基酸组成进行了研究,结果表明：苦荞麦活性肽经Sep Hadex G-25层析后基本上得到了纯化;苦荞麦活性肽对超氧阴离子自由基有很强的清除作用,清除率达到28．67%;氨基酸组成分析表明,苦荞麦活性肽由17种氨基酸组成,含有7种人体必需的氨基酸（Val、Ile、Leu、Phe、Met、Thr、Lys）,占苦荞麦活性肽氨基酸总含量的31．11%,具有较高的营养价值和较强的保健功能。     

基于Plackett-Burman设计和响应面法优化羊肝抗氧化肽的制备工艺

以羊肝为原料,分别测定5种蛋白酶酶切羊肝所得的酶解液的羟基自由基清除率和肽得率。结果表明,风味蛋白酶羟自由基清除率（84.50%）和肽得率（22.49%）最好。在单因素试验基础上,以羟基自由基清除率为评价指标,采用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,羊肝抗氧化肽制备的最佳酶解条件为料液比1∶3（g∶mL）、加酶量2 400 U/g、酶解温度50 ℃、pH7.50、酶解时间2.8 h。在此优化条件下,测得实际羟自由基清除率为93.70%,与模型理论值相接近。羊肝酶解产物中总氨基酸含量为57.23 g/100 g,其中疏水性氨基酸和必需氨基酸占总氨基酸含量分别为46.47%和41.63%,表明以风味蛋白酶酶解羊肝产物具有较高的抗氧化活性和营养价值。     

Casein hydrolysis by Bifidobacterium longum KACC91563 and antioxidant activities of peptides derived therefrom

Milk protein is a well-known precursor protein for the generation of bioactive peptides using lactic acid bacteria. This study investigated the antioxidant activity of bovine casein hydrolysate after fermentation with Bifidobacterium longum KACC91563 using the 2,2′-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) assay and total phenolic content (TPC). The antioxidant activities of the 24-h and 48-h hydrolysates were higher than that of the 4-h hydrolysate (2,045.5 and 1,629.3 μM gallic acid equivalents, respectively, vs. 40.3 μM) in the ABTS assay. In contrast, TPC values showed activities of 43.2 and 52.4 μM gallic acid equivalents for the 4-h and 24-h hydrolysates, respectively. Three fractions (≥10 kDa, ≥3 but <10 kDa, and <3 kDa) were separated from the 24-h hydrolysate by ultrafiltration. Among these fractions, the <3 kDa fraction exhibited the highest antioxidant activity (936.7 μM) compared with the other fractions (42.1 and 34.2 μM for >10 kDa and 3–10 kDa fractions, respectively). Through liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry analysis, 2 peptides, VLSLSQSKVLPVPQK and VLSLSQSKVLPVPQKAVPYPQRDMPIQA, containing the fragment VLPVPQ that has antioxidant properties, were identified in the <3 kDa fraction after 24 h of hydrolysis. The present study demonstrates the possibility of antioxidant peptide production from bovine casein using Bifidobacterium longum.