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地衣芽孢杆菌弹性蛋白酶纯化和性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用地衣芽孢杆菌发酵液制备弹性蛋白酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀和Sephadex凝胶柱层析的方法分离纯化弹性蛋白酶,并对弹性蛋白酶的酶学性质进行研究。结果表明:弹性蛋白酶粗酶液经40%~70%饱和度的硫酸铵纯化后比活力提高到120U/mg,经凝胶柱层析纯化后比活力可达到292U/mg,纯化倍数为12.6,SDS-PAGE法证实弹性蛋白酶分子质量为29.5kD。对酶学性质的研究结果表明:弹性蛋白酶最适反应温度为55℃,最适反应pH值为7.4,以刚果红-弹性蛋白为底物,米氏常数Km为9.67mg/mL。低浓度金属离子Ca2+和K+对酶活力有促进作用,而Mg2+、Mn2+、Zn2+和Al3+对酶活力则有抑制作用。 相似文献
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利用超滤、硫酸铵盐析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、Sephadex G-75分子筛柱层析对一株南海深海来源菌苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)SWJS07所产蛋白酶进行分离纯化,纯化后经SDS-PAGE鉴定达到电泳纯,相对分子质量为37.0 k Da,酶的比活力提高了6.39倍,回收率为37.14%。研究其酶学性质表明,该蛋白酶最适催化温度为55℃,在30℃~45℃下稳定性较高,保温300 min残留酶活在80%以上;最适p H 6.5,在p H 6.0~9.0蛋白酶稳定,4℃放置24 h残留酶活在80%以上;2 m M Ca2+、Mn2+对蛋白酶有不同程度的激活作用,而Hg2+、Cd2+、Al3+则强烈地抑制蛋白酶活;当在蛋白酶中添加2 m M Ca2+、Mn2+时,其最适催化温度分别为60℃和55℃,蛋白酶活分别提高了32.86%和28.35%,60℃保温30 min相对酶活基本保持不变,与纯酶(相对酶活残留21.02%)相比蛋白酶的热稳定性显著提高;EDTA-Na2可强烈抑制蛋白酶活,推测该蛋白酶属于金属蛋白酶。 相似文献
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表面活性剂稳定性碱性蛋白酶纯化及性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)XG12发酵液中分离纯化表面活性剂稳定性碱性蛋白酶,并对酶学性质进行研究。利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的酶蛋白,酶纯度提高了42.6倍,回收率为25.3%。SDS-PAGE及Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析显示酶蛋白为单亚基蛋白,分子质量约为29.5kD。在pH7.0~11.0范围内酶活性及稳定性较高,最适作用pH值为10.0,最适作用温度40℃。Mg2+、Ca2+及Mn2+对酶有明显激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂强烈抑制酶活性,表明所纯化到的蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。酶分别对终质量浓度为0.1g/100mL的阴离子表面活性剂SDS、阳离子表面活性剂CTAB和体积分数为1%的非离子型表面活性剂Tween-80、Tween-20、Triton X-100以及氧化剂均具有很强的稳定性。 相似文献
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两株枯草芽孢杆菌蛋白酶的提取及产酱香研究 总被引:7,自引:0,他引:7
对两株产酱香的枯草芽孢杆菌E20和B1⑥分泌的胞外蛋白酶进行了提取和产酱香研究.其合适提取溶液为硫酸铵溶液,当提取浓度为20%,饱和浓度为70%时获得粗酶.Sephadex G100层析分别获得2个分子量不同的蛋白峰,并且都具有酶活性;提取的酶在固体大豆上发酵,均可产酱香. 相似文献
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为了研究枯草芽孢杆菌SC-2发酵液主要抗菌活性物质,以临床致病菌株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、白色念珠菌等为指示菌,采用打孔法检测抑菌活性,对SC-2发酵液抑菌粗提物进行分离纯化。抑菌粗提物经硅胶柱层析、LH-20凝胶柱层析和高效液相色谱法分离制备得到抑菌单体化合物GNH-2。该物质表现出广谱的抗菌活性,在质量浓度为1 mg/mL时对白色念珠菌、大肠杆菌和大肠埃希氏菌抑菌圈直径分别为34±0.30 mm、18±0.15 mm、19±0.10 mm,对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的抑菌活性分别为28±0.10 mm、30±0.10 mm、56±0.35 mm,优于同等浓度的万古霉素。通过能与茚三酮直接显色等实验结果,初步推断GNH-2属于直链的肽类化合物,为后续结构确证和新药开发提供依据。 相似文献
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一种枯草芽孢杆菌氨肽酶的纯化及酶学性质 总被引:3,自引:1,他引:3
利用乙醇分级沉淀(37.5%~60%)、SephadexG75凝胶过滤、Phenylsepharose6FF疏水色谱三步分离使一种枯草芽孢杆菌氨肽酶得到纯化,比活1.5567×106U/mg;SDSPAGE鉴定为纯酶,分子质量75ku,全酶含2个亚基。纯酶最适温度60℃,温度稳定范围20~70℃。最适pH8.5,pH稳定范围8.0~10.0。Zn2+、Ni2+有较大的抑制作用,Co2+则对酶活有较强的激活作用。酶活性中心可能结合了2个Zn2+,米氏常数Km为1μmol/L,最大反应速度Vmax为5000μmol/(L·min)。 相似文献
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为探索芽孢杆菌B15胞外蛋白酶和淀粉酶在饲用酶制剂方面的应用,试验对其产酶情况及胞外酶的酶学性质进行了研究。结果显示,该菌株产蛋白酶和淀粉酶的最高酶活性分别为(181.9±3.5)U/mL和(50.2±1.6)U/mL。蛋白酶和淀粉酶的最适作用温度范围分别为40℃~50℃和40℃~70℃,最适作用pH值为7和5~7。蛋白酶和淀粉酶经40℃~50℃热处理,以及在pH值为5~9的缓冲液中较稳定。蛋白酶被EDTA所抑制,属金属蛋白酶,金属离子(10mmol/L)Mg2+和K+对其有激活作用,Fe2+有抑制作用,而Fe2+对淀粉酶有一定的激活作用。 相似文献
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本研究采用硫酸铵分级盐析、交联葡聚糖凝胶分子层析(Sephadex G-75)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)等方法对生防菌枯草芽孢杆菌CF-3无菌发酵液对复端孢霉F中的主要抑菌蛋白进行了分离与鉴定。结果表明:CF-3无菌发酵液中抑菌蛋白的硫酸铵最佳沉淀饱和度为60%~70%,蛋白质沉淀量为149.03μg/mL,极显著高于其他浓度(p≤0.01);利用60%~70%饱和度的硫酸铵提取的粗蛋白质经Sephadex G-75凝胶柱层析后获得2个吸收峰,8管收集液,其中第2管峰收集液抑菌活性显著高于其他管(p≤0.05);将流分2收集液进一步分离纯化后,将抑菌效果最好的2.3号流分的两条蛋白条带割胶回收,利用生物质谱技术鉴定为γ-谷氨酰转肽酶和胞内丝氨酸蛋白酶,分子量分别约为42.5 ku和33.9 ku。以上结果可为该菌株及其抑菌蛋白的开发应用奠定基础。 相似文献
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为了筛选高产蛋白酶活性细菌,以大豆及其发酵制品为目标样品,采用酪蛋白平皿筛选到一株既可产中性蛋白酶又可产碱性蛋白酶的细菌菌株W1,经形态学及16S rDNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. Subtilis),其产中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力分别为28.99 U/mL和33.19 U/mL。通过单因素试验对其产蛋白酶的培养条件进行初步优化,并在此基础上以总蛋白酶活力为指标对其产蛋白酶条件进一步进行正交试验优化,最佳条件为培养基初始pH 9.0,接种量4%,培养温度35℃,培养时间48 h,此条件下中性蛋白酶活力为40.39 U/mL,碱性蛋白酶活力为52.02 U/mL,总蛋白酶活力为92.41 U/mL,优化后相应酶活力分别提高了39.3%、56.7%和48.6%,这将为枯草芽孢杆菌W1菌株蛋白酶的酶学性质研究提供帮助,同时也是对蛋白酶活性枯草芽孢杆菌资源库的丰富。 相似文献
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地衣芽孢杆菌产碱性蛋白酶发酵条件优化 总被引:1,自引:0,他引:1
碱性蛋白酶是一类重要的工业用酶,广泛应用于洗涤、制革、酿造等行业,发挥着重要作用。为提高地衣芽孢杆菌的产酶活力,在单因素实验的基础上,采用3因素3水平的响应面分析法,以蛋白酶活力为响应值,对影响地衣芽孢杆菌20203产碱性蛋白酶的因素进行研究分析,得到了最佳发酵条件为:葡萄糖1.5%,豆粕6%,乳糖4%,磷酸铵1.2%,KCl 0.03%,CaCl2 0.07%,MgSO4 0.02%,吐温80 0.05%,初始pH9.0,培养温度37℃,摇瓶转速300r/min,5d后发酵液酶活为2382u/mL。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法得到该蛋白酶的分子量为35ku。 相似文献
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在摇瓶发酵条件下,利用响应面法优化枯草芽孢杆菌BS3菌株产蛋白酶的培养基,在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman实验设计(PB)对影响枯草芽孢杆菌BS3产蛋白酶的培养基组分进行了筛选,确定主要影响因子为玉米浆、氯化铵和玉米淀粉.然后通过最陡爬坡实验、中心组合实验设计和响应面分析法,确定了主要的影响因子及其浓度.优化后的培养基组成为:玉米淀粉1.586g/100g,玉米浆3.170/100g,氯化铵1.998/100g,其他组分维持低添加量,在此培养基条件下,活菌数为12.640×109cfu/g,蛋白酶活为162.309U/g. 相似文献