果实特异性启动子驱动丙型肝炎病毒E2基因植物表达载体的构建

构建了果实特异性启动子驱动的含编码丙型肝炎病毒包膜蛋白E2基因的植物表达载体,为研制有效的转基因植物丙肝疫苗打下基础。以载体pCAMBIA2300为骨架引入pBIl21中的GUS基因,用目的片段E2基因替换其中的GUS基因构建了pCAM-BIA2300G-E2载体,将番茄的果实特异性启动子E8引入pCAMBIA2300G-E2载体中构建了pE8-E2植物表达载体。用限制性内切酶消化重组载体,结果表明重组载体都含有所插入的目的片段。果实特异性启动子驱动的含E2基因的植物表达载体的成功构建,为抗丙型肝炎病毒的口服疫苗研究提供了试验基础。     

番茄果实成熟基因Sl0658的功能研究

Sl0658属于NAC转录因子家族.本研究克隆了Sl0658的C-端特异性末端序列,利用农杆菌介导法将特异性片段导入受体番茄中进行遗传转化,获得干涉表达的转基因番茄.对转基因番茄果实成熟相关指标(包括果实乙烯释放量、果实呼吸速率、果实硬度、可溶性固形物含量等)和果实成熟相关基因表达量进行测定.研究结果显示,Sl0658干涉转基因番茄果实呈现黄色、乙烯释放量和呼吸速率显著降低、果实硬度提高、部分成熟基因表达量降低.表明Sl0658在调控番茄果实成熟过程中发挥重要作用.     

生长抑素pcDNA3s／SS质粒的构建与鉴定

动物生长抑制激素（Somatostatin,SS）基因克隆至含有乙肝表面抗原的pcDNA3s质粒载体上，生长抑制基因插入到乙肝表面抗原的5'末端，构建生长抑制DNA疫苗。经PCR反应扩增出含有SS和HBsAg的融合基因片段，并经测序证实SS基因已成功重组到pcDNA3s质粒上。     

多重PCR方法检测食品中转基因成分

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止子（NOS）的序列，设计合成了两对不同的引种和相对应的两种荧光双链探针（FDCP），分别建立了多重PCR，应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法，并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测，发现13份样品有6份检出35S启动子、NOS终止子，其余7份样品的检测结果为阴性，表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出35S和NOS成分，其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点，多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确。     

Survivin启动子介导的溶瘤腺病毒载体抗肿瘤研究

肿瘤特异性启动子用于调控溶瘤腺病毒载体靶向于肿瘤细胞,从而实现对肿瘤组织的特异性杀伤,肿瘤特异性启动子的应用已成为靶向基因病毒治疗中的一个重要策略.利用肿瘤靶向人源Survivin 启动子构建的重组腺病毒Ad.SP-E1A展开对多种肿瘤细胞和正常细胞杀伤实验研究,结果发现:Ad.SP-E1A具有较高的肿瘤靶向杀伤能力以及对正常细胞无毒副作用,为基因病毒治疗平台中选择高效安全的腺病毒载体提供参考.     

HBV S/HEV ORF2融合基因对番茄的遗传转化

应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在戊肝病毒(HEV)ORF2部分序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成融合基因BE。将融合基因BE克隆到植物双元表达载体pBin438上,获得pBin438BE,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA105中,侵染丽春番茄子叶和下胚轴,经预培养、共培养、筛选培养、生根培养获得了5株抗卡那霉素的番茄植株。提取抗性植株基因组DNA,进行PCR及PCR-Southern检测,4株获得阳性信号。初步表明目的基因已整合到了番茄基因组中。     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良 CTAB 法提取玉米产品的基因组 DNA,应用 PCR 检测方法,并以玉米特异性内源基因 IVR 为内参,花椰菜花叶病毒 35S 启动子(CaMV35S 启动子)、农杆茵胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分.实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品.     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良CTAB法提取玉米产品的基因组DNA,应用PCR检测方法,并以玉米特异性内源基因IVR为内参,花椰菜花叶病毒35S启动子（CaMV35S启动子）、农杆菌胭脂碱合成酶终止子（NOS终止子）为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分。实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品。     

Pichia stipitis木糖醇脱氢酶基因XYL2在酿酒酵母中的表达

通过PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶（XDH）基因XYL2。将该基因连入酵母表达载体pYX212的强启动子磷酸丙糖异构酶（TPI）启动子下，得到融合表达载体pYZ－XYL2。通过电转化方法将pYX－XYL2转入酿酒酵母Saccharomyces cereuisiaeW303-1A中，酶活测定表明在酿酒酵母中树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶基因XYL12得到活性表达，酿酒酵母转化子粗酶液中木糖醇脱氢酶比活为每毫克蛋白0．6U左右，约为供体菌的2．4倍。与基因供体菌不同，木糖醇脱氢酶基因在酿酒酵母中表达不需木糖诱导，为组成型表达。     

鱼腥藻PCC7120基因a113211和asl3212的克隆及其功能鉴定

鱼腥藻PCC7120染色体上的开放阅读框all3211和asl3212具有与大肠杆菌细胞染色体上毒素一抗毒素系统（TA,toxin-antitoxinsystem）相同的遗传结构,该系统由位于同一操纵子中的两个分别编码毒素蛋白和抗毒素蛋白的基因组成,介导细胞程序性死亡．基因all3211的编码产物与MazEF毒素一抗毒素系统中的毒素蛋白MazF同源．为证明这一对基因表达产物的毒素抗毒素作用,首先设计合适引物克隆了鱼腥藻PCC7120染色体上all3211和asl3212基因,并构建了含乳糖启动子和阿拉伯糖启动子的双启动子表达载体,将两个基因分别置于该载体的不同启动子下进行诱导表达,验证了各自表达产物对细胞的作用．结果显示：all3211基因的表达产物对细胞有一定的毒性作用,可抑制细胞生长;asl3212基因表达产物能减弱all3211表达产物对细胞的毒性作用,初步证明这一对基因构成了一个毒素一抗毒素系统,all3211为毒素基因,asl3212为抗毒素基因．     

The Photodestruction of Virus in Nano-TiO2 Suspension

Hepatitis B surface antigen （HBsAg） was selected as reference to evaluate the photodestructive effect of a self-prepared nano-TiO2 on viruses in aqueous suspension through sandwich ELISA assay （an in vitro enzyme immunoassay） under different conditions, and more general experiments on RNA （ribonucleic acid） and casein were carried out. Results indicate that TiO： is destructive at least to most viruses in water. The mechanism of destruction was discussed.     

HBsAg壳聚糖疫苗制备工艺及相关研究

研制以壳聚糖为载体的乙型肝炎疫苗,将乙肝病毒表面抗原疫苗包封在壳聚糖微球中,制备鼻腔免疫的新型微球疫苗,通过鼻腔注入免疫小鼠．普通乙肝疫苗由腹腔注入免疫小鼠．用ELISA方法检测血清中抗HBV的IgG,结果显示鼻腔及腹腔免疫效果无显著性差异．HBsAg壳聚糖微球疫苗的制备为鼻腔免疫乙型肝炎疫苗的开发提供了实验基础．     

超声波对果蔬渗糖的影响

以冬瓜、苹果、莲耦和番茄为实验材料，通过跟踪测定果蔬组织内糖含量的变化检验超声波对果蔬组织渗糖的促进效果。结果表明超声波可明显地提高果蔬组织的渗糖速率。用渗透促进液进行预处理，超声波提高果蔬组织渗糖的效率更加显著。     

高炉水渣用于无土栽培基质的可行性

进行了高炉水渣用于无土栽培基质的物理化学性质测定和番茄、花卉无土栽培实验。结果显示,高炉水渣的各项物理化学性质能够满足作为无土栽培基质的要求。用高炉水渣与草炭制成的混合基质,栽培的番茄植株长势良好,果实整齐肥大,色泽鲜艳,结果优于纯草炭（CK）;高炉水渣与苹炭体积比为1：1时,栽培的各种观赏性花卉长势良好。     

植株生长形态与环境监测系统的研究

针对植株生长形态与种植环境间的实时生长过程监测问题,本文以番茄生长过程为例,采用多传感器信息融合数据采集技术,研发植株生长形态与种植环境实时监测系统,在此基础上分析番茄生长形态参数与种植环境间的对应关系。研究结果表明,番茄生育的不同阶段对水分的需求也不同,因此应分段进行管理,在番茄苗期,土壤湿度对番茄生长的影响较为显著,通过对比实验发现,当土壤相对湿度保持在65%~85%的情况下,既有利于番茄幼苗成长,又有利于番茄开花结果。因此番茄幼苗期的灌溉水以每5~6d浇水1次为宜;但在番茄结果期,每株番茄每天则多浇1L水,使其能够保持足够的土壤湿度条件。通过系统研发及应用,该研究可进一步实现植株生长过程中的精准作业,为物联网技术在农业生产上的推广应用打下基础。     

水果中痕量己二烯酸的测定研究

水果中存在的痕量己二烯酸,采用水蒸气蒸馏,吸附树脂富集和重铬酸钾氧化的硫代巴比妥酸比色法测定.研究了蒸馏条件和树脂种类等对回收率的影响.结果表明,以GDX-502为吸附剂,对试样进行加标回收测定,回收率在91—109%范围内,测定了蕃茄、梨、草毒和桔中已二烯酸含量,对蕃茄10次测定,其标准偏差和相对标准偏差分别为0.02和4.01%.     

SX高效杀菌消毒餐巾纸的研制

研制一种以漂粉精为主原料加入适量助剂，能够快速杀菌消毒的实用餐巾纸，实验证明该餐巾纸对细菌、乙肝病毒具有强力杀灭作用和良好的贮存稳定性，成功地解决了含有效氯类消毒液贮存中易分解难题。     

SX高效杀菌消毒餐巾纸的研制

研制一种以漂粉精为主原料加入适量助剂,能够快速杀菌消毒的实用餐巾纸,实验证明该餐巾纸对细菌、乙肝病毒具有强力杀灭作用和良好的贮存稳定性,成功地解决了含有效氯类消毒液贮存中易分解难题。     

HCV e2-3pcx融合基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

构建了丙型肝炎病毒e2-3pcx融合基因的原核表达载体pET28b(+)-e2-3pcx,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中。IPTG诱导融合蛋白高效表达。经SDS-PAGE电泳分析,结果表明在43 ku处有一条蛋白质特异条带,与预期的目的产物蛋白带大小一致。     

大豆耐盐相关基因的分离及其功能鉴定

利用大肠杆菌功能表达体系,从大豆开花40d未成熟种子的cDNA表达文库中筛选获得了11个耐盐相关cDNA克隆.对其中3个克隆的插入片段进行测序.结果显示,其中的Gm1013为一尚未报道的新基因片段;GmRPS25 2编码的蛋白质序列与西红柿40S核糖体蛋白S25有91%的同源性;GmAIP 2编码的蛋白质序列与大豆根铝诱导蛋白SALI3 2有97%的同源性.其中GmAIP 2可表达分子量为30 8kD的多肽.pET GmAIP 2转化后的大肠杆菌在含800mmol/LNaCl和700mmol/LKCl的液体培养基中生长状况明显好于对照菌,即前者表现出较短的生长迟滞期和较高的生长量.