银增感免疫电镜的效果观察

胶体金免疫民镜技术是利用抗原和抗体特异性结合，在电镜下检测与抗体结合电子密度高的胶体金，确定抗原位置。因此已成为研究细胞化学的重要技术，得到广泛应用。但被检的胶体金粒子直径一般在10nm左右，很难在低倍下、大视野观察不同细胞的标记情况，为此，增大胶体金颗粒十分必要。     

免疫毒素细胞内传递途径的免疫金双标记研究

应用免疫金双标记技术对免疫毒素在细胞内传递途径进行了亚显微形态研究。采用5nm胶体金颗粒标记羊抗鼠、15nm胶体金颗粒标记兔抗蓖麻毒素以及免疫毒素(由抗CD_5、CD_2、CD_8及抗金T细胞的单抗DS27、JN205、P218、P81和蓖麻毒素构成),对免疫毒素与Molt-4细胞(人T淋巴细胞系)的相互作用进行了动态观察及超微结构定位。电镜下,在不同时期的实验动态观察中,两种不同粒径的金颗粒相伴随,共同定位于细胞膜及其突起表面、细胞膜被膜小凹(Coated pit)中,随后进入细胞内,定位于内吞小体(endosome)及其所属小管、小泡、多泡小体及溶酶体,并迅速到达跨高尔基氏复合体网状系统(trans-Golgi network)。实验中还观察到细胞膜表面有分布     

采用免疫胶体金标记结合负染色电镜技术对体外组装的中间纤维定性

将免疫胶体金标记与电镜负染色技术相结合，清晰显示体外组装的波形纤维具有１０ｎｍ中间纤维结构特征，抗波形纤维蛋白－金颗粒特异地标记在波形纤维上，用抗波形纤维蛋白－金颗粒对体外组装的微管进行标记则呈阴性反应。实验结果表明将免疫胶体金标记与电镜负染色技术相结合可以同时显示体外组装的细胞骨架纤维的精细结构和蛋白属性。     

胶体金免疫电镜技术用于植物病毒的检测

胶体金免疫电镜技术具有步骤简便。胶体金探针能精确定位、电镜下分辨率高等优点,给细胞化学标记体系带来了一种改革,近年来越来越多地应用于生物学和医学研究中,如:细胞内某些生物活性物质的定位研究、组织细胞形态发生研究、酶的研究等,但在农业科研中的应用还很少。尤其在病毒检测方面,目前国内只见到以胶体金免疫电镜技术检测动物病毒的报道,而用于植物病毒检测的报道尚无。本文报道了以改良的柠檬酸钠—鞣酸还原法制备大小适于植物病毒标记的胶体金颗粒的方法,制备的胶     

单抗—药物偶合物对HL60细胞特异性结合与内化的研究

我们在电镜水平上用胶体金标记技术研究H198单抗与柔红霉素(DNR)偶合物(HI98-DNR-Au)对HI98抗元的特异性结合和内化作用。结果表明HI98-DNR-Au与HL60细胞在4℃孵育60分钟后,可见金颗粒与100％HL60细胞的表面膜结合;在上述条件孵育后,然后再在37℃中孵育15分钟,金颗粒可在30％的细胞胞浆内以及8％的核内出现;胞浆内的金颗粒可随孵育时间的延长(30’,60’,120’和240’)而明显增加,而表面膜上的金颗粒则随时间的延长而减少,金颗粒通过吞饮泡的形成而内化。在吞饮泡内簇集的金颗粒可融合成金斑块或破碎成细粒,一些金颗粒通过吞饮泡的膜或胞膜进入胞浆以及通过核膜而进入核内。但作为对照,HI98-DNR-Au与CEM细胞以及葡萄球菌A-蛋白     

应用电镜原位分子杂交技术对腺病毒DNA在宿主细胞内进行定位

以Biotin标记的dATP(Bio-7-dATP)通过缺刻翻译(Nick Translation)制备腺病毒的基因组探针,建立了电镜原位杂交技术,并研究腺病毒感染的HeLa细胞内病毒DNA的分布。结果表明,免疫胶体金颗粒特异地标记在腺病毒感染的细胞核内,并且在核内呈区域性分布。整装抽提后的细胞原位杂交结果显示出,胶体金颗粒呈族状马串珠状结合在核骨架上,从而在形态学上证实了腺病毒DNA与核骨架的紧密结合关系。     

中间纤维结构体系及其免疫胶体金标记定性

应用分级抽提方法~[1],结合整装细胞电镜技术(Whole mount ceu EM)、非树脂包埋——去包埋剂电镜技术(embedment—free EM)~[2]及扫描电镜技术对HeLa细胞和牛肾传代细胞的中间纤维体系进行了观察,同时还应用角蛋白(Keratin)单克隆抗体——胶体金免疫电镜技术对HeLa细胞的中间纤维进行了定性研究。中间纤维在整装细胞电镜、DGD(Diethylene Glycol Distearate)包埋——去包埋剂电镜及扫描电镜下,均呈致密网状,其单丝直径均约10nm,这说明中间纤维在非离子去垢剂如Triton x—100及(NH_4)_2SO_4溶液的分级提取过程中是稳定的;同时也可以观察到较粗的纤维,这显然是单丝聚合形成的束。     

胰腺胰岛分泌细胞的免疫金标记

本实验应用豚鼠抗胰岛素抗体及胶体金探针对常规Epon812包坦后的大鼠胰腺组织胰岛素分泌细胞进行电镜免疫金染色,获得较满意的结果。材料与方法:取大鼠新鲜胰腺组织,常规透射电镜制样。半薄切片光镜下精确定位胰岛。超薄切片捞于不锈钢载网上。免疫金染色程序为:①8％高碘酸钠室温腐蚀20分钟;②0.01MPBS(含1％BSA)pH7.2洗涤3次,每次5分钟;③5％BSA孵育20分钟,以封闭非特异性结合位点;④豚鼠抗胰岛素抗体     

精子质膜凝集素受体金标表面复型术

精子质膜凝集素受体金标表面复型术江一平，吴翊钦，钟秀容，林芸秀，熊良玉（福建医学院组胚教研室，福建医学院组胚电镜室，福州３５０００４）为了对细胞膜表面受体分布进行高分辨率、大视野的立体观察，本文将胶体金标记与金属喷镀表面复型技术相结合，建立了金标表面...     

胶体金免疫电镜技术检测番茄环纹斑点病毒

本实验利用胶体金免疫电镜技术检测番茄环纹斑点病毒（ tomato zonate spot virus, TZSV）,分别以TZSV的N 蛋白多克隆抗体及TZSV的Gn蛋白多克隆抗体为一抗,然后以胶体金标记羊抗兔IgG?gold（10 nm）为二抗对病毒进行胶体金标记,电镜观察用TZSV Gn蛋白抗体标记的胶体金颗粒能很好地结合到病毒粒体上。结果表明该方法可以实现对TZSV更为准确可靠地检测。     

急性镉中毒大鼠肝脏金属硫蛋白的免疫电镜定位

目的：研究急性镉中毒大鼠肝细胞中金属硫蛋白（ＭＴ）在超微结构水平的分布。方法： 羊抗兔ＩｇＧ－１０ｎｍ胶体金,结合自制的兔抗大鼠ＭＴ抗血清,在灌注固定的急性镉 中毒大鼠肝中,进行ＭＴ的包埋后免疫胶体金电镜定位观察。结果：镉暴露６ｈ大鼠肝细胞中有大量胶体金颗粒分布于胞质与细胞核内,而正常组肝细胞肿中胶体金颗粒数量很少。结论：急性镉中毒６ｈ的大鼠肝细胞中证实已有大量ＭＴ诱导产生,并旅游分布于胞质与细胞     

纤维联接蛋白FN、凝血酶敏感蛋白(TSP)在成纤维细胞及骨髓基质细胞的免疫电镜定位

本文用免疫电镜技术(过氧化酶标记和胶体金标记)在来自兔角膜瘢痕的纤维母细胞和来自小鼠骨髓的长期培养的基质上进行了纤维粘连蛋白(FN),血小板凝血酶敏感蛋白(TSP)定位。结果显示在纤维母细胞和骨髓基质细胞表面以及细胞外细纤维构成的网中。另外,有时在上述二种细胞胞浆中也可以看到FN和TSP的定位。应用免疫电镜技术可以研究各种结缔组织增生性疾病,FN和TSP的分布以及它们和结缔组织增生的关系,为纤维化形成机制以及胶原形成细胞、基质细胞和其它细胞的关系提供了形态学依据。     

用免疫电镜的方法观察间充质干细胞及再生纤维的超微结构和胶体金标记

本文研究神经再生过程中雪旺氏细胞的功能和作用 ,观察间充质干细胞在体内的存活和功能情况。方法 :以逆转录病毒为载体 ,将EGFP报告基因导入大鼠的骨髓间充质干细胞后 ,注入受损伤的周围神经组织内。三周后取材 ,用FA GA混合固定 ,分为二组 ,A组用K4M低温包埋切片后标记anti EGFP,IgG Au ;B组经冷冻超薄切片后标记anti EGFP ,IgG Au ;观察其超微结构及胶体金标记情况。结果 :电镜下可以观察到A、B二组均呈明显的阳性反应 ,胶体金颗粒均匀地分布在细胞核内及胞浆内。其中K4M低温包埋方法的金颗粒为散在分布 ,超微结构较好 (图 1…     

免疫胶体金标记定位昆诺藜中的胼胝质和胼胝质降解酶

运用免疫胶体金技术研究了感染蚕豆萎蔫病毒2号以及健康昆诺藜细胞中胼胝质和胼胝质降解酶的分布情况。电镜观察发现胶体金特异性标记在含有VP37小管的胞间运动通道周围,其余区域感病和健康细胞的胼胝质及胼胝质降解酶分布差别不大,胼胝质主要分布于细胞间隙的大块电子致密物质以及细胞壁结构发生较大变化的区域,胼胝质降解酶主要分布于筛板、维管束细胞紧贴细胞壁区域的大块电子致密物质上,在细胞壁结构发生较大改变的区域也有胼胝质降解酶的分布。推测胼胝质在昆诺藜细胞中的积累和降解可能与细胞壁结构成分改变有关。     

白血病的电镜诊断

应用电镜分别对5例不同类型白血病患者骨髓穿刺细胞进行了观察,观察结果表明例一、二均为急性早幼粒细胞白血病,两例骨髓细胞中均见有许多异常早幼粒细胞胞浆内含有Auer小体,但两例细胞内Auer小体结构呈明显差异,例三、四为不同类型毛细胸白血病,即典型毛细胞白血病（Ⅰ型）及变异型毛细胞白血病（Ⅱ型）,两型细胞在结构上的差异主要表现为细胞膜表面毛样突起的长度及数量不同,变异型毛细胞白血病细胞的特点仅在电镜下才能辨认。例五为急性粒细胞白血病的部分分化型,其中早幼粒细胞胞浆内仅具极少数小的电子致密颗粒,电镜对该种细胞的分辨显示出光镜所不具有的优势,并提示电镜在白现诊断中的重要意义。     

用胶体金显示PbGv在脂肪体中的免疫化学定位

胶体金作为标记物最早由 Faulk和 Toylor( 1 971 ) Romano等 ( 1 974)用于电镜免疫细胞化学研究。近年来胶体金探针已成为定位和分析多种蛋白质、多肽、多糖的有力工具。特别是在抗原酶及激素等物质的细胞免疫化学定位中更加显示了其独特的威力。利用 Ig G的双价性 ,它的一臂可结合到事先包被有抗原的胶体金上 ,也可以把抗体分子包被在胶体金上 ,对细胞内的抗原进行定位。昆虫病毒在感染细胞中有很强的能力。其中杆状病毒包含体蛋白的复制量可达到死虫的2 0 %是当前所了解的真核细胞中表达量最大的病毒蛋白质。为了了解这蛋白合成和代谢的…     

NK,LAK细胞与肿瘤细胞的杀伤

自然杀伤(NK)细胞与淋巴因子激活之杀伤(LAK)细胞皆能不经事先免疫应答,不受MHC限制,非特异性地杀伤肿瘤细胞。但LAK细胞的细胞毒活性高于NK细胞,且能杀伤对NK活性不敏感的肿瘤。用免疫电镜方法研究它们致死肿瘤细胞的过程,并分析其异同,有助于对它们的杀伤机制的阐明。近年来很多研究结果支持NK细胞杀伤机制的“刺激分泌学说”。为对此学说提供直接证据,本研究组应用胶体金标记免疫电镜技术研究了大鼠NK/LGL(大颗粒淋巴细胞)在杀伤YAC—1肿瘤细胞时向后者释放其胞浆颗粒内容物的过程。     

中毒所致肝细胞中间丝及其抗原决定簇的改变

应用电镜及免疫电镜技术我们观察了CCl_4中毒引起的肝细胞中间丝(IF)及其抗原决定簇的改变。结果表明,中毒10天后,IF构成的毛细胆管鞘(PCS)增粗,壁增厚,IF表面突起增多,细胞角蛋白(CK)19阳性金颗粒首先出现于IF突起及分支处,与CK18阳性金颗粒可位于同一段IF,甚至同一突起上;至中毒第40和第50天(肝硬变期),某些肝细胞胞浆内遍布密集的IF,与胆管上皮相似,CK19阳性IF比例显著增加,而且CK19阳性金颗粒可见于许多IF主干上。这提示,CCl_4性肝炎及肝硬变中,某些肝细胞在IF结构及CK组型上都发生了向“胆管型”的转变。     

辛德比斯病毒6K蛋白在宿主细胞内的分布

6k蛋白是Sindbis病毒(SbV)26S基因组编码的一个仅有55个氨基酸的小分子蛋白质,其生物学功能甚至在细胞内的分布至今尚不清楚。最近在M.Schlesinger实验室中用人工合成的6k多肽得到抗6k蛋白的抗体,使我们的上述工作得到进行。本实验用直径20nm的胶体金—proteinA和直径为5nm的胶体金—羊抗兔抗体的复合物,用常规的免疫电镜技术,先后标记了SbV感染的整装细胞及用于冰冻蚀刻的样品,以观察6k蛋白在细胞表面的分布,又标记了Triton×100处理的整装细胞以研究6k蛋白与细胞骨架的关系。同时还标记了低温包埋剂(LK4M)     

纳米金胶体的制备及其对血液光吸收性的影响

纳米金是指粒径介于1~100 nm之间的金粒子,具有良好的生物兼容性、结构稳定性和光学性质,可用于强化激光治疗血管性皮肤病的光吸收。采用柠檬酸钠还原法制备纳米金胶体,研究了温度、加热时间、柠檬酸钠还原剂用量等因素对其粒径和吸收光谱的影响,得到了制备纳米金胶体的最佳条件。取制备得到的粒径为16 nm左右的纳米金胶体与血液混合后稀释,研究了胶体金对血液光吸收性能的影响及其随温度的变化规律。结果表明,加入胶体金后血液的光吸收性能随着加入体积比的增大而增强,当胶体金与血液的体积比为5时,血液在545 nm和581 nm处的吸收峰值分别提高了1.33倍和1.09倍。在变温条件下,胶体金不会对血液的动态吸收特性产生影响。