根霉产纤溶酶液体发酵培养基的优化

通过单因素,均匀设计和正交试验,从碳氮比、无机氮源、胰蛋白胨、pH值方面优化了根霉液体发酵产生纤溶酶的培养基组成.试验结果表明,试验范围内菌株液体发酵产纤溶酶的适宜培养基组成为:麸皮水5.6%,豆粕水解液5.3%,二者体积比为2∶3,磷酸氢二铵0.4%,硝酸钠0.5%,pH值自然.优化培养基的纤溶酶酶活力为140.00U/mL.     

豆粕水解液为原料根霉产纤溶酶液体发酵培养基的优化

以豆粕水解液为原料,研究根霉产纤溶酶液体发酵培养基的组成.实验结果表明,豆粕的最适水解时间为1.5 h,麸皮水与豆粕水解液的最适体积比例为2:3,金属离子对酶活力提高无显著作用,最适培养基配方是:5%麸皮水,6%豆粕水解液,0.1%氯化铵,0.2%硝酸钠,2.5%胰蛋白胨,初始pH4.3,酶活力为177.62 U/mL.     

产纤溶酶菌株根霉12~#的诱变育种及固态发酵培养基的优化

以产纤溶酶的菌株根霉 12 # 为出发菌株 ,对其进行紫外线 氯化锂复合诱变 ,筛选到74株制霉素抗性突变株。所有抗性突变株经进一步固态发酵筛选 ,获得了 4株稳定高产纤溶酶的正突变株 ,其纤溶酶产量分别比出发菌株提高 3 2 9%、2 1 5 %、2 2 3 %和 18 0 %。以其中的 1株为菌种 ,研究了固态发酵产生纤溶酶的培养基组成。采用单因素试验、均匀设计方法对固态发酵培养基的碳源、氮源、碳氮比、初始pH、加水量、无机盐加量进行了优化。结果表明 ,实验范围内根霉 12 # 固态发酵产生纤溶酶的适宜培养基组成为 :m (麸皮 )∶m (豆粕 )=1∶2 ,初始 pH5 0 ,加水量 0 75mL/g物料 ,MnSO4·H2 O和 (NH4) 2 SO4加量分别为 0 2 5 %和1 42 % (对物料 )。优化条件下的固态发酵纤溶酶产量平均达 744 5 7U/g物料。     

脉孢霉发酵豆渣产纤溶酶研究

以好食脉孢霉为产纤溶酶菌种,选用廉价物料新鲜豆渣和麸皮为初始发酵底物(15g(干重)/500 mL三角瓶),试验确定发酵培养基的组成是:豆渣:麸皮(4:1)+CaCl_2(0.75%)+FeSO_4·7H_2O(0.045%)。每瓶培养基接种3.4×10~5个孢子,在28℃恒温箱培养48h,然后用生理盐水(100 mL/瓶)浸提4～6 h。摇瓶优化后的酶产量约为220 U/g,浅盘发酵放大结果为330 U/g,10倍于初始产量。     

溶纤酶高产菌株液体发酵条件的优化

以突变株B2为出发菌株,对其液态发酵生产溶纤酶的培养基及培养条件进行了优化。实验确定最优产酶培养基组成为：可溶性淀粉60g／L,豆粕粉18g／L,玉米浆2g／L,CaCl2 0．5g／L,K2HP042g／L,MgSO40．5g／L,NaCl0．5g／L,初始pH值10．0。在此基础上,设计培养条件的优化实验,实验结果表明,在种龄14h,接种量5％,装液量为50mL／250mL．三角瓶,180r／min的条件下,7℃培养64h达到产酶高峰,产酶活力可达1215IU／mL。     

Rhizopus chinensis 12#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12#(Rhizopuschinensis12#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分.采用饱和度40%～70%的硫酸铵溶液分步盐析、OctylSepharoseFastFlow疏水层析、Q SepharoseHighPerformance离子交换层析和SephacrylS 100凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯,得到电泳纯的纤溶酶.SDS PAGE方法测定该酶相对分子质量为18000,凝胶过滤方法测定相对分子质量为16600,表明该酶由单亚基组成.     

根霉12^#酵产纤溶酶及分离纯化的探索

以根霉12^#为出发菌株，对其固体发酵产生的溶栓特性进行研究。通过Sephadex G-75凝腔过滤对根霉12^#纤溶酶进行分离纯化。利用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳得到验证。     

Rhizopus chinensis 12#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12#(Rhizopus chinensis 12#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分.采用饱和度40%～70%的硫酸铵溶液分步盐析、Octyl Sepharose Fast Flow疏水层析、Q-Sepharose High Performance 离子交换层析和Sephacryl S-100 凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯,得到电泳纯的纤溶酶.SDS-PAGE方法测定该酶相对分子质量为18 000,凝胶过滤方法测定相对分子质量为16 600,表明该酶由单亚基组成.     

中度嗜酸放线菌YY21液体发酵产纤溶酶条件的研究

为了提高中度嗜酸放线菌YY21产纤溶酶的产量,本文通过单因素实验对其液体发酵培养基和培养条件进行了研究。结果表明:发酵培养基组成为小米粉1.7%,葡萄糖2%,碳酸钙0.2%,氯化钠0.5%,蛋白胨0.6%;发酵条件为250 m L三角瓶装培养基50 m L,接种量5%,在22℃、转速160 r/min的条件下振荡培养4 d。在最适条件下,放线菌YY21液体发酵产物在血纤维蛋白平板上形成溶圈面积可达到164.38 mm~2,较初始产酶活力(溶圈面积87.58 mm~2)提高了88%,发酵时间缩短了3 d。通过对液体发酵培养基和培养条件的研究有效地提高了中度嗜酸放线菌YY21产纤溶酶的产量。      

毕赤酵母工程菌pk53产纤溶酶发酵条件的优化

对1株产纤溶酶毕赤酵母工程菌菌株pk53,利用单因素试验和正交试验确定该菌株的适宜廉价发酵培养基为:麸皮1.5%,豆粕粉2.0%,KH2PO40.5%,MgSO4.7H2O 0.05%;发酵条件为:接种龄14 h,接种量1%,甲醇添加量1.5%,培养基装液量30 mL(250 mL三角瓶),生长pH为5.5,诱导pH为6.0;在此条件下培养,纤溶酶酶活力达429.06 U/mL,是初始发酵条件下酶活力的8.88倍。     

中国根霉12菌株抗生物质产生条件和性质

中国根霉（ＲｈｉｚｏｐｕｓＣｈｉｎｅｓｉｓ）１２能产生一种对芽孢菌属细菌有独特抑制作用的抗生物质。其发酵条件研究结果表明：在以正交实验确定的最佳培养基（豆饼粉酶解液８０ｍｌ、玉米粉水解液２０ｍｌ、葡萄糖２ｇ、ｐＨ自然）和最适发酵工艺条件（种龄１８ｈ、接种量１％、发酵培养基初始ｐＨ６．０～６．５、装液量５０ｍｌ／２５０ｍｌ三角瓶，摇床转速１６０ｒ／ｍｉｎ、２８～３０℃培养４８ｈ）下，Ｒ．ｃｈｉｎｅｓｉｓ１２菌株产生的抗生物质的抑菌圈直径为２１．５ｍｍ，抑菌面积３０９．３６ｍｍ２，是对照少孢根霉（Ｒ．ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ）ＩＦＯ８６３１菌株的６倍。该物质可被胰蛋白酶所破坏，由纸电泳和茚三酮反应等实验结果判定该抗生物质为碱性多肽或蛋白质性质的物质。     

中国根霉12菌株抗生物质的分离提纯及分子量测定

中国根霉１２（Ｒ．ｃｈｉｎｅｓｉｓ１２）菌株产生的抗生物质存在于发酵液中，首先经过饱和度为７０％硫酸铵盐析处理，再经半透膜透析去离子后，通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ７５凝胶柱层析，浓缩含有活性组分的层析洗脱液，得到抗生物质粗制品。经ＨＰＬＣ和薄板层析法证明为一纯组分。而且用Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ７５凝胶柱层析法测得抗生物质的分子量为４８０００道尔顿     

Plackett-Burman和Box-Benhnken Design实验设计法优化华根霉产糖化酶发酵培养基的研究

应用Plackett-Burman设计法对影响华根霉发酵的培养基组分进行筛选,所选取的11个相关因素为:葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、橄榄油、蛋白胨、黄豆粉、酪蛋白胨、麦麸、MgSO4·7H2O、K2HPO4、KH2PO4。确定影响产糖化酶活的关键因素为橄榄油、酪蛋白胨、麦麸,接着进行最陡爬坡实验逼近3个关键因素的最大响应区域。在此基础上,采用Box-BenhnkenDesign实验设计法对发酵培养基组分进行优化,得出最佳条件。此时橄榄油为0.01%、酪蛋白胨为8.14%、麦麸为4.32%、糖化酶活为18.7U,比优化前提高81%。     

以豆粕粉为氮源的枯草芽孢杆菌液态发酵生产纳豆激酶

枯草芽孢杆菌液态发酵通常采用蛋白胨作为氮源生产纳豆激酶,导致生产成本过高,发酵液中酶活性较低。采用价格低廉的豆粕粉作为氮源不仅大幅度降低了原料成本,而且显著提高了发酵液中的酶活性。在摇瓶实验中优化确定豆粕粉最佳添加量,并在此基础上优化确定了最佳接种量、发酵液初始p H、发酵时间。最终摇瓶发酵液中酶活达到5 471 IU/m L,是等量胰蛋白胨作为氮源发酵的3.6倍。上述摇瓶发酵参数进一步在7 L发酵罐和200 L中试水平发酵罐进行验证,并优化确定发酵过程中控制溶氧水平为30%,纳豆激酶活性分别达到6 717 IU/m L和4 236 IU/m L。     

黑根霉固态发酵产木聚糖酶的研究

利用黑根霉降解甘蔗渣固态发酵生产木聚糖酶,运用正交试验研究了甘蔗渣与麸皮的比例、氮源、pH值、培养时间、水料比等对产木聚糖酶活力的影响。结果表明:甘蔗渣:麸皮为6:4,氮源为酵母膏,pH值为5,培养时间为5d,水料比为2.5:1,产酶量达406.18U/g。     

响应面优化北五味子米酒发酵工艺研究

以北五味子、大米为原料,以甜酒曲为糖化发酵剂,经混合发酵工艺,酿制北五味子米酒。在单因素试验基础上,选取北五味子果浆添加量、甜酒曲接种量、糖化时间、发酵时间为影响因素,以感官评分为响应值,进行响应面优化设计。结果表明,北五味子米酒最优的发酵工艺条件为北五味子果浆添加量16.3%、甜酒曲接种量2.2%,36 ℃糖化温度下发酵48.9 h,然后再于20 ℃继续发酵47.6 h。在此最佳工艺条件下,北五味子米酒中还原糖含量为11.94 g/100 g;酒精度为6.75%vol;总酸为0.86 g/100 g,感官评分为93.3分,北五味子米酒汤色呈现棕褐色,清澈透明,有典型的米酒发酵清香,酒味醇厚。     

米根霉液体发酵L-乳酸动力学模型的构建

由于研究生产L-乳酸代替D-乳酸和DL-乳酸已成为一种趋势,为构建米根霉液体发酵L-乳酸动力学模型,对米根霉发酵生产L-乳酸进行了初步研究。在米根霉分批发酵过程中,测定菌体生物量、还原糖和乳酸含量,经处理后得到菌体生长、乳酸生成和基质消耗的动力学模型及参数。对比实验数据与模型表明,两者能较好拟合,基本反映米根霉发酵L-乳酸动力学特征。