海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究．结果表明，最佳提取条件为：pH6．0的磷酸盐浸提液0．05mol／L，NaCl浓度为0．05mol／L，缓冲液体积与海参肠质量之比为4：1，硫酸铵饱和度为80％；该酶最适反应条件为：温度40℃，pH6．0；该酶在10-40℃，pH5．O～6．5酶活力稳定．Mn^2＋对酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Cd^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋、Bd^2＋、K^＋、Ag^＋对酶存在不同程度的抑制，其中Cu^2＋对酶的抑制作用最强．     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

2-氨基丁酸的酶拆分

为了得到右旋的2-氨基丁酸,对2-氨基丁酸的拆分进行了研究.通过从猪肾中提取的氨基酰化酶选择性地水解(R,S)-2-N-乙酰氨基丁酸,得到了(S)-2-氨基丁酸,旋光度 = +21.58°(C=2,5 mol/L HCl),收率为71.8%.试验结果表明最佳拆分条件为:底物浓度为0.1 mol/L;底物与酶质量比为100∶1;pH 6.8～7.0;温度为37 ℃;反应时间为24 h.     

白头翁皂苷糖苷酶的纯化及其酶学性质

本实验对由Absidiasp.B00菌产的白头翁皂苷糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯酶蛋白,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为79 ku,酶反应的最适pH和温度分别为5.0和40℃,在40℃以下,pH 3.0~7.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Zn2+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究表明,vmax=0.16 mmol/(L.h),km=7.17 mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

假单胞菌Ⅷ T 39壳聚糖酶的纯化和性质研究

粗酶液经硫酸铵盐析、透析、脱盐、SephadexG-100柱层析,假单胞菌ⅧT39壳聚糖酶被纯化了19.72倍,SDS-PAGE鉴定为一条带.试验表明,该酶为内切型水解酶,无CMCase活性,最适pH5.6～6.0,最适作用温度60～70℃,纯酶作用于可溶性壳聚糖的米氏常数为1.67mg/mL,最大反应速度为2.56μmol/mL.min.SDS-PAGE测定的相对分子质量为51.3×103.Mn2+、AL2+、Co2+对该酶有激活作用,Ag+、Cu2+、Fe2+、Fe3+、Zn2+对酶有强烈抑制作用.     

绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及酶性质的研究

为得到纯的绞股蓝皂苷糖苷酶,对Absidiasp.GYP4r菌所产的酶进行了分离提纯,并对其酶反应条件进行优化。该酶经75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52阴离子交换柱分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,分子质量约为68ku。酶学性质研究表明,酶反应的最适温度为40℃,在20～60℃稳定,最适pH为5.0,在pH 2.2～8.0稳定。Cu2+对该酶的活性有一定的抑制作用,Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ca2+对酶的活性没有影响。该酶的米氏常数为14.20mmol/L,最大反应速率为0.46mmol/(L.h)。     

白头翁皂苷H3糖苷酶的分离纯化及酶性质

对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷H3糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯的酶蛋白,并对其性质做了进一步研究。结果表明,该酶分子质量约为40ku;最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0;在pH 4.0~7.0,温度低于40℃条件下具有相对稳定的酶活力;金属离子Na+、K+、Mg2+对酶反应无显著影响,而Fe3+、Cu2+、Zn2+对其有较强的抑制作用;米氏常数为17.01mmol/L,最大反应速度为0.38mmol/(L·min)。     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

褐藻酸降解菌AGN12制备褐藻酸裂解酶的反应条件

新分离菌AGN12能够降解褐藻酸,具有褐藻酸裂解酶活性。褐藻酸裂解酶降解褐藻酸的最适反应条件是:温度30℃,pH 7.0,底物浓度8 g/L。褐藻酸裂解酶稳定性对温度高度敏感,50℃保温1 h酶活力基本消失。Mn2+、Mg2+浓度高低对褐藻酸裂解酶均有激活作用,K+在5 mmol/L浓度下对该酶有激活作用,而Cu2+、Fe3+对该酶具有抑制作用。     

2-氨基丁酸的酶拆分

为了得到右旋的2-氨基丁酸,对2-氨基丁酸的拆分进行了研究．通过从猪肾中提取的氨基酰化酶选择性地水解（R,S）-2-N-乙酰氨基丁酸,得到了（S）-2-氨基丁酸,旋光度=＋21．58℃（C=2,5mol／LHCl）,收率为71．8％．试验结果表明最佳拆分条件为：底物浓度为0．1mol／L;底物与酶质量比为100：1;pH6．8～7．0;温度为37℃;反应时间为24h．     

海参肠碱性磷酸酶的提取及粗酶的特性研究

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)是最重要的磷酸酶之一,在生物体内直接参与磷酸基团的转移和代谢过程。本文研究了海参肠碱性磷酸酶粗酶的提取,并分析了其酶学特性。经含有0.2%Triton X-100的Tris-HCl缓冲液(pH 8.9)浸提、正丁醇处理、70%硫酸铵沉淀和超滤等步骤获得海参肠ALP粗酶,纯化倍数达到2.74倍,得率为63.32%。ALP粗酶的最适反应pH为11.0,在pH 10.0～12.0稳定性较好;最适反应温度为45℃,在20～45℃具有很高的稳定性。金属离子Mg2+(1～30mmol/L)、Zn2+(<10mmol/L)对海参肠ALP粗酶具有显著的激活作用;Fe3+、Fe2+、Cu2+和Mn2+(10mmol/L)可明显抑制该酶活力。EDTA-Na2、DTT、Na2WO4及Na2HPO4对海参肠ALP粗酶有明显的抑制作用,抑制程度依次为:EDTA-Na2>DTT>Na2WO4>Na2HPO4。     

米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

对米曲霉 HDF-7 所产蛋白酶进行分离纯化,经硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析得到电泳纯的蛋白酶,经SDS-PAGE 电泳测定其相对分子质量约为30 KDa.该酶的最适反应温度为50℃,最适作用pH值为7.0,该酶在20℃时具有良好的热稳定性,在pH6.0～8.0的条件下酶是相对稳定的,Mn2+对该蛋白酶有明显的激活作用,Cu2+对该蛋白酶有强烈的抑制作用,Km值为78μg/mL,最大反应速度V max为6.29μg/min.     

海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶培养基优化及其酶学性质

以琼胶酶的酶活力为指标,对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养基组分进行优化,并研究琼胶酶粗酶液的酶学性质。通过单因素和正交试验对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养条件进行优化,结果表明最佳营养组分为:酵母膏的质量浓度为12g/L,琼脂粉质量浓度为3g/L,NaCl质量浓度为45g/L,在该条件下酶活力达到7.689U/g。其粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH为7,在pH范围为6~8的内酶活性较稳定,温度在20~40℃时酶的稳定性较好,但温度达到80℃基本失活。     

新型载体 PEI/SiO2 固定化青霉素酰化酶的酶学性质

以 PEI/SiO2 为复合载体, 制备了固定化青霉素酰化酶. 考察了游离酶与固定化酶催化反应的最适宜 pH 值, 最适宜温度, 固定化酶的连续操作稳定性, 以及二者对金属离子的耐受性能及米氏常数. 实验结果表明: 游离酶和固定化酶催化反应的最适宜 pH 值分别为 9.32 和 7.34, 即固定化酶的最适宜 pH 值向酸性方向发生了移动, 且适宜的 pH 值范围变大. 游离酶催化反应的最适宜温度为 50 ℃, 在较低或较高的温度, 其活性都低;而固定化酶的最适宜温度为 40 ℃, 且温度范围显著变宽, 在 (20～60) ℃范围内, 固定化酶都能保持较高的活性. 固定化酶具有良好的连续操作稳定性, 且比游离酶具有较好的抗金属离子性能;二者的米氏常数分别为 2.38×10-1 mol/L 和 5.44×10-2 mol/L.     

储粮主要危害性霉菌过氧化氢酶特性研究

从不同来源的储粮样品中分离了4株灰绿曲霉、3株白曲霉,将培养后菌体破碎得到的粗酶液分别经硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析纯化得到过氧化氢酶.对分离酶的主要特性研究结果表明,这些过氧化氢酶的最适温度均为35℃左右,在水溶液中对热不稳定.酶催化适宜的pH范围为4～9,最适pH均在7 0左右,酶的Km值在33.3～41.7mmol/L范围,金属离子及化合物对酶活力的影响基本相同;1mmol/L浓度的Cu2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+对酶活力有激活作用,1mmol/L浓度的巯基乙醇、Fe3+、Ca2+对酶活力有抑制作用,1mmol/L的NaN3、Hg2+可使酶完全失活.该特性研究为酶学方法测定储粮霉菌的应用奠定了基础.     

缓冲体系和金属离子对漆酶催化活性的影响

探讨了3种不同的缓冲体系和6种常见的金属离子对漆酶催化活性的影响.结果表明:不同的缓冲体系对漆酶催化活性的影响较大.在pH为2.0的磷酸氢二钾一柠檬酸缓冲体系(0.1 mol/L)中漆酶的催化活性最大.金属离子对漆酶催化活性的影响与金属离子的种类和浓度有关,在浓度低于0.1 mmol/L时,Pb2+、Ag+、Hg2+对漆酶的催化活性起激活作用,高于0.1 mmol/L时起抑制作用.在浓度低于20 mmol/L时,Mg2+、Zn2+、Cu2+对漆酶的催化活性起激活作用,高于20 mmol/L时起抑制作用.     

固态发酵产木聚糖酶条件优化及其酶学性质初步研究

以树干毕赤酵母作为发酵菌株对其固态发酵产木聚糖酶的条件进行优化,并对木聚糖酶的性质进行初步研究.由试验结果可知,最优培养条件为玉米芯与小麦麸皮质量比为1∶1,初始水分含量为80%,培养基的基质密度为0.7～0.9 g/mL.28℃下培养9 d,木聚糖酶活力最高达到5 536 U/g.该酶的最适反应pH为6,在pH 6~8时酶活稳定性较好,保温1 h后仍可保留90%以上的酶活;最适温度为60℃,在50~60℃时热稳定性较好;Zn2+、Ca2+和Cu2+对木聚糖酶的活力具有微弱促进作用,Fe2+、Fe3+和Mn2+对木聚糖酶的抑制作用比较明显.