酒精酵母原生质体制备与再生条件研究

对南阳酒精酵母(Saccharomycescerevisiae)1308原生质体制备和再生条件进行了研究。结果表明,取对数中期的酵母细胞,用0.1%-β巯基乙醇进行预处理后,再用5mL内含4mg/mL蜗牛酶和4mg/mL纤维素酶的混合酶液酶解1.5h,酒精酵母1308的原生质体制备率达93.6%,再生率达15.9%。     

产酯酵母和耐高温酵母原生质体形成与再生条件研究

选取脱壁预处理时间、蜗牛酶浓度、酶解时间三因素设计三因素三水平正交试验来研究产酯酵母和耐高温酵母原生质体形成与再生条件。结果表明,产酯酵母原生质体形成与再生最佳条件为：预处理20min、1%蜗牛酶酶解30min;耐高温酵母为：预处理10min,1.5%蜗牛酶酶解60min。     

K氏酵母与糖化酵母原生质体的形成与再生条件

对影响K氏酵母及糖化酵母形成与再生的因素菌龄、酶浓度、温度、酶解时间、预处理剂的浓度和作用时间及渗透压稳定剂的选择进行了研究，确定了原生质体形成与再生的最佳条件：菌龄为14-16h，0．1％β-巯基乙醇作用10min；在30℃下，2．0％的蜗牛酶对K氏酵母酶解1．5h，对糖化酵母酶解1．0h；配制酶解液时渗透压稳定剂采用0．8MKCl，在稀释及配制再生培养基时则采用0．53M蔗糖。     

酿酒酵母和马克斯克鲁维酵母原生质体制备与再生研究

研究了菌龄、酶浓度、渗透压稳定剂及酶解时间等因素对酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)和马克斯克鲁维酵母菌(Kluyveromyces marxianus)原生质体形成与再生的影响。实验结果表明,原生质体形成与再生的最佳条件为酿酒酵母菌龄9h,采用1.5%蜗牛酶+0.5%纤维素酶,30℃酶解70min;马克斯克鲁维酵母菌龄8h,采用1.0%蜗牛酶+0.5%纤维素酶,30℃酶解时间50min;配制酶液时渗透压稳定剂采用4%氯化钠高渗缓冲液,在稀释和配制再生培养基时则采用15%的蔗糖高渗缓冲液。     

马克斯克鲁维酵母原生质体制备和再生条件的研究

研究了菌龄、酶解温度、酶解时间、酶浓度4个单因素对马克斯克鲁维酵母原生质体形成率和再生率的影响,采用菌龄、酶解温度、酶解时间、酶浓度、稳渗剂进行5因素4水平的正交试验,分析各因素的极差值,评价各因素的影响程度。结果表明,酶浓度的极差值最高,其次为酶解时间,然后依次为菌龄、稳渗剂、酶解温度,酶浓度为影响原生质体形成的主要因素,原生质体形成和再生的最佳条件为：菌龄为12h,蜗牛酶浓度为1．5％,酶解时间为lh,酶解温度为28℃,稳渗剂为KCl,在此条件下,原生质体形成率为92．3％,再生率为29．6％。     

红发夫酵母原生质体的形成和再生

研究了用NOVOZYME234酶，制备红发夫酵母的原生质体和再生的条件。     

粗柄羊肚菌原生质体制备和再生条件研究

对粗柄羊肚菌(Morchella crassipes)原生质体形成、再生条件进行了研究.原生质体形成的合适条件:酶解系统为4%蜗牛酶、5%溶壁酶、4%纤维素酶;缓冲系统为0.6 mol/L KCl的磷酸缓冲液(pH 6.98),酶解时间4h,酶解温度30℃,菌龄56h;原生质体产量为5.3×104个/mg.经0.3mol/L KCl 0.3mol/L环己六醇的PSA再生培养基培养,再生率为9%.     

2株酵母菌单倍体原生质体形成与再生条件的研究

对酒精高产酿酒酵母GGFS16和GJ2008单倍体原生质体的形成与再生条件进行了研究.结果表明,在菌龄8h、o.2％p-巯基乙醇和0.1％ EDTA-Na2预处理20min、1.5％的蜗牛酶37℃处理30min以及使用浓度170g/L的蔗糖作为渗透压稳定剂的条件下,GGFS16和GJ2008单倍体原生质体的形成率和再生率均达到最大.形成率分别是98.14％和97.19％,再生率分别是17.29％和15.78％.     

安琪酿酒酵母与管囊酵母原生质体制备和再生

通过紫外诱变筛选得到呼吸缺陷型酿酒酵母R40,再以R40和管囊酵母P01为亲本,进行原生质体制备与再生的研究,考察了酶浓度、酶解温度和酶解时间对两亲本原生质体制备和再生的影响。结果表明,当酶解时间为1 h,酶浓度为2%时,35℃下酶解酿酒酵母R40所得原生质体的形成率和再生率分别达到96.1%和12.5%;30℃下酶解管囊酵母P01所得原生质体的形成率和再生率为97.2%和10.1%。     

青稞酒曲中酿酒酵母与假丝酵母原生质体形成与再生条件的研究

本实验通过研究酶种类、菌龄、酶浓度及酶的作用时间、菌体预处理及渗透压稳定剂等不同因素对原生质体形成与再生的影响，得出了青稞酒曲酵母ZY2，ZY8原生质体制备和再生的最佳条件：酵母ZY2在菌龄为10h，0.1mol/LEDTA＋0.1%β-巯基乙醇为预处理剂作用10min；30℃下用1.5%的蜗牛酶酶解1h；酵母ZY8在菌龄为10h，0.1mol/LEDTA＋20mmol/L2-硫苏糖醇混合于蜗牛酶1.5%＋溶壁酶1%的酶解体系中，30℃下酶解1h；配制酶解液时渗透压稳定剂采用0.7mol/LKC1，在稀释及配制再生培养基时采用17%蔗糖的条件下，酵母ZY2形成率达94.15%，再生率达13.85%；酵母ZY8形成率达88.78%，再生率达23.02%。     

酒精发酵酵母与产黄酮类色素酵母原生质体融合研究

以酒精发酵酵母K211和产黄酮类色素酵母PY-1两酵母菌株为亲本,进行双亲灭活原生质体融合育种实验;以期得到既带色素又有一定产酒力的酒精发酵酵母新菌株.另,过程中对于灭活参数进行初步优化,得到:85℃下对酵母菌K211灭活35min,85℃下对酵母菌PY-1灭活30min,为最佳条件.在融合子初步筛选过程中,通过感官评价进行反复比较筛选,最终得剑6株产酒、产色明显的融合子.通过发酵实验及传代培养,成功地分离出1株产酒力较高的融合子KP8-2.     

出芽短梗霉原生质体制备及再生的研究

研究不同的酶解液、茵龄、酶处理的时间和温度、培养方法及其他因素对出芽短梗霉原生质体的形成率和再生率的影响.结果表明:出芽短梗霉原生质体制备所需的最佳条件是酶浓度5 mg/mL(蜗牛酶、纤维素酶)、菌龄24 h、酶解温度37℃、酶解时间1 h,在此条件下原生质体形成率达100%.再生率为64.6%.     

米曲霉沪酿3.042原生质体制备和再生的研究

研究了酶液组成、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂、培养基成分、再生培养方式等因素对米曲霉沪酿3.042原生质体制备和再生的影响,建立了米曲霉沪酿3.042原生质体制备和再生的适宜方法,即在查氏液体培养基中28℃培养10h,菌体用0.8mol/L NaCl配制的3%溶壁酶、1%纤维素酶、1%蜗牛酶、0.5%溶菌酶的复合酶液,30℃酶解4h￣6h后,经0.8mol/L NaCl再生固体培养基,双层平板培养法进行原生质体再生,可获得超过70%的再生率。为进一步通过原生质体技术选育优良的酱制品生产用菌株奠定了方法学基础。     

谷氨酸棒杆菌ATCC13032原生质体的制备与再生

以谷氨酸棒杆菌ATCC13032为出发菌,研究了青霉素浓度及溶菌酶浓度对原生质体形成率的影响,以及氯化钙和二甲基亚砜等物质的添加对其再生率的影响.结果表明最佳青霉素浓度及溶菌酶浓度分别为0.6 U/mL和1 mg/mL,在此条件下谷氨酸棒杆菌ATCC13032原生质体形成率达96％.为进一步提高原生质体再生率,尝试了4种添加物,其中氯化钙及二甲基亚砜能显著提高原生质体再生率.当3 g/L氯化钙和10 mL/L的二甲基亚砜组合添加时原生质体再生率更可达34％,是未添加的2.1倍,达到采用夹层法培养能获得再生率的最大值.     

葡萄原生质体培养研究进展

本文以国内外葡萄原生质体培养研究的文献为基础，介绍了葡萄原生质体培养研究的概况；对影响葡萄原生质体分离、培养及植株再生的因素进行了综述，并提出了葡萄原生质体培养研究的重点。     

杏鲍菇原生质体制备技术的研究

本文详细地探讨了杏鲍菇原生质体制备条件。结果表明:用0.6mol/L的甘露醇配制成质量比为2.5%,pH值为4.5～5的溶壁酶酶液,在酶液量与菌丝体的比值为20:1(V/W),温度30℃,转速为50r/min条件下酶解3h,可得到最高的原生质体得率。其原生质体数可达15.35×107个/ml。本研究为今后进行杏鲍菇原生质体的诱变及融合育种奠定基础。     

林肯链霉菌原生质体制备条件的研究

对林肯链霉菌SL98原生质体制备条件进行了探索.其原生质形成最佳培养基中含甘氨酸浓度为0.4%,蔗糖浓度为34%;酶解条件是采用溶菌酶浓度4mg/mL,菌龄72h,酶解时间5h,酶解温度为30℃.其最高的原生质体的制备率达16.3%.