超声-微波协同萃取法提取油菜蜂花粉中黄酮类物质

采用超声-微波协同萃取法提取油菜蜂花粉中黄酮类物质,以总黄酮提取率为指标,研究分析乙醇体积分数、提取时间、料液比、微波功率4个因素对提取效果的影响,并利用正交实验优化提取工艺,确定最佳条件为乙醇体积分数90%,液料比(mL∶g)30∶1,微波功率260 W,提取时间180 s。此条件下,总黄酮提取率达3.36%。与热回流、超声法、微波法相比,超声-微波协同萃取法提取效率明显提高,同时具有节能,安全的优点。液质分析结果表明,超声-微波协同萃取得到的油菜蜂花粉黄酮类物质主要有4种,分别为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3,4'-双-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。     

莱菔子化学成分的分离与鉴定

目的：研究莱菔子化学成分,探索生品莱菔子的物质基础。方法：采用大孔吸附树脂HP-20、聚苯乙烯型大孔吸附树脂（MCI gel）、ODS、硅胶及LiChroprep RP-18等色谱技术进行分离纯化,运用光谱学方法对得到的化合物进行结构鉴定。结果：从莱菔子甲醇提取物中分离鉴定了16?个化合物：顺-13-二十二碳烯酸（1）、豆甾-4-烯-3-酮（2）、（22E,24R）-麦角甾-5,22-二烯-3β-醇（3）、豆甾-5-烯-3β-醇（4）、反-阿魏酸甲酯（5）、反-芥子酸甲酯（6）、β-豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（7）、α-D-吡喃半乳糖基-（1-6）-α-D-吡喃葡萄糖基-（1-2）-β-D-呋喃果糖苷（8）、β-D-呋喃果糖基-α-D-（6-芥子酰基）葡萄糖苷（9）、β-D-（3-芥子酰基）呋喃果糖基-α-D-葡萄糖苷（10）、β-D-（3-芥子酰基）呋喃果糖基-α-D-（6-芥子酰基）葡萄糖苷（11）、β-D-（3,4-二芥子酰基）呋喃果糖基-α-D-（6-芥子酰基）葡萄糖苷（12）、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷（13）、异鼠李素-3,4’-O-β-D-二葡萄糖苷（14）、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（15）、3’-O-甲基-（－）-表儿茶素-7-O-β-D-葡萄糖苷（16）。结论：化合物2、3、7～10、13～16为首次在该植物中得到。     

油菜蜂花粉中黄酮的分离纯化及结构鉴定

研究油菜蜂花粉黄酮的组成,采用乙醇提取,石油醚萃取脱脂和柱层析分离方法对油菜蜂花粉黄酮进行研究,得3个黄酮类化合物,经1 H-NMR、13 C-NMR,分别鉴定出3个黄酮类化合物化学结构为山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷和槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,与HPLC-MS检测结果一致。     

油茶粕中黄酮化合物的分离鉴定及抗氧化性研究

为了探索油茶粕中黄酮化合物的分子组成及其抗氧化活性,本研究运用优化的分离纯化方法对油茶粕中黄酮进行粗提和HZ816大孔吸附树脂富集纯化,然后再经硅胶柱对其黄酮化合物层析,得到2种黄酮化合物,分别记为化合物Ⅰ和化合物Ⅱ。随后利用核磁共振、质谱、红外和紫外光谱对上述分离得到的2种黄酮化合物进行结构鉴定。结果表明:这2种物质分别为山奈酚3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷（化合物Ⅰ）和山奈酚3-O-[2-O-β-D-半乳糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷（化合物Ⅱ）。对分离的黄酮化合物采用1,1-二苯基-3-硝基苯肼自由基清除法（DPPH法）、邻苯三酚自氧化法在体外进行抗氧化实验,结果显示总黄酮、化合物Ⅰ和化合物Ⅱ清除DPPH自由基半抑制浓度(IC₅₀)分别为0.44、1.88、2.41 mg/m L,清除超氧阴离子IC₅₀分别为1.38、1.13、1.29 mg/m L。      

荞麦壳提取物有效组分的分离及体外抗糖尿病活性

目的:研究荞麦壳提取物经大孔树脂分离纯化后各组分的体外活性。方法:荞麦壳提取物(buckwheat hull extract,BHE)、一次纯化后获得的精制物(purified buckwheat hull extract,PBHE)、二次纯化后分为的5个组分(BHE-M1、BHE-M2、BHE-M3、BHE-M4、BHE-M5)分别用于测定α-葡萄糖苷酶活力和蛋白质糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)抑制率。结果:BHE一次纯化后荞麦壳总黄酮含量从30.8 g/100 g升高到65.3 g/100 g,二次纯化后BHE-M4组分总黄酮含量最高,为89.2 g/100 g。当质量浓度为1.000 mg/m L时各组分的α-葡萄糖苷酶活力抑制率分别为16.03%(BHE)、24.39%(PBHE)、18.04%(BHE-M2)、25.46%(BHE-M3)、28.23%(BHE-M4)、26.24%(BHE-M5),显著高于阳性对照组阿拉伯糖;抗AGEs活性实验结果显示,在葡萄糖-牛血清白蛋白、果糖-牛血清白蛋白体系中除BHE-M1组分外,其余组分活性均高于阳性对照胺基胍,其中BHE-M4组分活性最高;BHE-M4组分的高效液相色谱-质谱联用分析结果显示,BHE-M4中含有的黄酮类化合物可能为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷或山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、牡荆素、芦丁、异槲皮苷或金丝桃苷、槲皮苷。结论:荞麦壳提取物经纯化后高黄酮组分的α-葡萄糖苷酶抑制活性以及抗AGEs活性最高,即荞麦壳黄酮是荞麦壳抗糖尿病活性的主要组成成分。     

南山茶籽中4个多酚化合物的鉴定

为了综合开发利用油茶资源,对南山茶饼乙醇提取物的组分进行制备和鉴定。将经过乙酸乙酯萃取和硅胶柱层析分离纯化收集的XVII、XXVII、XXVIII和XXXIV4个组分进行HPLC制备,得到了5个纯度较高的化合物。化合物4的解析已另文报道,通过波谱分析确定4个化合物分别为:原儿茶酸(化合物1)、芹菜素-6-β-D-吡喃葡萄糖甙(化合物2)、山奈酚3-O-[α-L-吡喃鼠李糖-(1-3)-2,4-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖-(1-6)-]-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物3)和山奈酚3-O-[α-L-鼠李糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-6)]-β-D-葡萄糖甙(化合物5)。对山茶属植物中提取到的化合物3和南山茶中分离到的化合物2和化合物5进行了详细解析,对这3个化合物的~1 H和~(13) C化学位移信号进行了全归属。     

洋甘菊抑制酪氨酸酶活性成分研究

研究了罗马洋甘菊乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶活性的影响并对有效成分进行分离纯化。实验中以L-酪氨酸为底物,空白对照,采用比色法测定了罗马洋甘菊乙醇提取物不同乙醇浓度的洗脱物对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用。结果表明:MCI30%(体积分数)乙醇浓度洗脱物对酪氨酸酶活性的抑制率最灵敏。该部分洗脱物经MCI、ODS-A柱分离,得到了3个单体化合物:山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-(6"-3-羟基-3-甲基-戊二酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷。     

油菜蜂花粉的抗氧化活性

油菜蜂花粉粉碎后经体积分数90%乙醇回流提取,浓缩后依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物以及萃余物4个部分。其中石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物具有明显的抗氧作用,并能显著降低D-半乳糖诱导衰老小鼠肝组织中丙二醛(MDA)含量(P<0.05)和脑组织中单胺氧化酶(MAO)活力(P<0.05)。从石油醚萃取物得到物质主要为3个亚麻酸类化合物,分别为:α-亚麻酸、α-亚麻酸甘油酯、3'-甲氧基-α-亚麻酸甘油酯,从乙酸乙酯萃取物得到的主要物质为3个黄酮类化合物分别为山奈酚-3-O-β-D吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。表明油菜蜂花粉中抗氧化性活性成分主要为亚麻酸类和黄酮类化合物。     

HPLC法测定“长林”系列油茶籽种仁中2个主要黄酮苷含量

采用正交试验设计优化了油茶籽种仁中2个主要黄酮苷山奈酚-3-O-{β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷}(Ⅰ)和山奈酚-3-O-{β-D-吡喃木糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷}(Ⅱ)的提取工艺;采用Venusil MP C18色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水溶液流动相,线性梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长220 nm,柱温25℃,建立了2个主要黄酮苷的HPLC含量测定方法。结果表明以80%甲醇按照料液比1∶50(g/m L)在80℃条件下回流提取60 min,2个黄酮苷的得率最高,11个品种油茶籽种仁中黄酮苷Ⅰ质量分数为1.28%~2.98%,黄酮苷Ⅱ质量分数为1.42%~2.37%。该含量测定方法专属性强、准确度高、重复性好,可用于测定不同品种油茶籽种仁中主要黄酮苷的含量。     

白藜芦醇葡萄糖苷的生物合成

为研究淀粉蔗糖酶催化白藜芦醇的性质,从中度嗜热菌Deinococcus geothermalis克隆淀粉蔗糖酶基因dgas并在大肠杆菌中诱导表达,纯化淀粉蔗糖酶DGAS。经SDS-PAGE检测DGAS的分子量为73.0 kDa。以蔗糖为葡萄糖基供体,白藜芦醇为受体,DGAS催化合成2个白藜芦醇葡萄糖苷。大规模培养表达制备淀粉蔗糖酶DGAS,催化白藜芦醇进行糖基化反应,经柱层析分离纯化得到2个化合物1和2。经NMR波谱解析化合物1和2分别鉴定为白藜芦醇-4’-O-α-D-吡喃葡萄糖苷和白藜芦醇-4’-O-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-α-D-吡喃葡萄糖苷。在室温条件下,白藜芦醇-4’-O-α-D-吡喃葡萄糖苷在水中溶解度为2.26 mg/mL。     

麻栎叶黄酮的大孔树脂分离及其对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用

研究麻栎叶黄酮的大孔吸附树脂分离纯化工艺,并考察其对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。通过大孔树脂静态吸附动力学实验,在确定大孔树脂类型的基础上,探索其最佳纯化工艺,结果表明,X-5是适用于麻栎叶黄酮吸附分离的较理想的树脂类型。X-5大孔吸附树脂分离纯化麻栎叶黄酮的最佳条件为:上柱液浓度52.79μg/mL左右,上柱液量为50mL,上柱液流速为0.5mL/min,上柱液pH为5。用95%乙醇进行洗脱,洗脱液流速为1.0mL/min,洗脱液量为30mL。在上述最佳条件下,X-5大孔吸附树脂分离纯化麻栎叶黄酮的纯度达58.33%。麻栎叶黄酮具有很强的抑制α-葡萄糖苷酶活性,IC为13.11μg/mL。      

HPLC法测定不同采收期的云南甜柿叶中三种黄酮的含量

利用回流提取法对不同采收期的云南甜柿叶进行预处理,采用高效液相色谱法测定样品中山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量。具体方法为:提取条件为提取溶剂45%乙醇,液固比20∶1,提取4次,提取时间90 min;液相色谱条件为采用ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱分离,甲醇-0.4%磷酸溶液为洗脱系统进行梯度洗脱,检测波长265 nm;三种黄酮的相对标准偏差均小于1%,平均回收率均在99%以上。该方法具有较好的分离效果和较高的稳定性,适用于用来分析不同采收期的云南甜柿叶中上述三种黄酮的含量,测定结果表明三种黄酮在叶中积累具有规律性,随柿果实成长不断积累,并且果实成熟时达到最高。      

牡丹花中三种活性成分的快速分离方法

建立应用高速逆流色谱快速分离牡丹花中黄酮及酚酸类活性成分方法。实验采用70%乙醇浸提牡丹花瓣,浸提物减压浓缩后经D101大孔树脂乙醇洗脱富集后,采用乙酸乙酯∶甲醇∶正丁醇∶水=5∶1∶0.5∶4两相系统进行高速逆流色谱分离,化合物结构通过1H NMR、13C NMR、MS确定。从牡丹花中一次性分离出三种化学成分,分别为野漆树苷（Ⅰ）、没食子酸（Ⅱ）、芹菜素-7-O-β-D葡萄糖苷（Ⅲ）,化合物纯度经高效液相色谱检测均达到95%以上。实验建立的方法是快速分离富集纯化牡丹花中三种黄酮、酚酸类活性成分的有效方法。      

杨梅果渣醇提物降糖活性组分筛选及其功能评价

目的:筛选杨梅果渣醇提物降糖活性组分,评价其体内降糖活性.方法:采用AB-8大孔树脂吸附杨梅果渣粗提物,采用不同体积分数的乙醇(10％,30％,50％,70％和90％)洗脱,筛选主要活性成分含量和α-葡萄糖苷酶抑制活性高的组分,采用糖尿病小鼠模型评价其体内降糖活性.结果:30％乙醇洗脱组分(EC30)的总花色苷、总黄酮...     

大孔吸附树脂分离纯化甘草中α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究

目的:筛选纯化甘草α-葡萄糖苷酶抑制物质的最佳大孔吸附树脂,并对影响纯化的各种因素进行系统的研究,为工业化生产提供参考。方法:通过检测大孔树脂吸附甘草液中α-葡萄糖苷酶抑制物质的量,以α-葡萄糖苷酶抑制物质酶活性抑制率为指标对工艺进行评价,确定甘草中α-葡萄糖苷酶抑制物质的最佳纯化工艺。结果:OU-2型大孔树脂纯化效果最好,其最佳工艺为药材与树脂的比例为1/25、pH为5～6,吸附完全后,先以水洗脱,再以3BV70%乙醇洗脱。经OU-2处理后的甘草α-葡萄糖苷酶抑制物质酶活性抑制率高达95%。结论:此法简单可行,分离效果好,能满足大生产的要求。     

HPLC法同时测定枣叶中5种黄酮的含量

建立了一种枣叶中黄酮类成分定量分析的HPLC方法,并对14个品种的大枣及酸枣叶中这5种黄酮的含量进行了分析。结果得到采用Hypersil BDS C18色谱柱,以乙腈与0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1 m L/min,柱温30℃,检测波长360 nm,实现了槲皮素-3-O-洋槐糖苷、芦丁、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-（1→2）-α-L-鼠李糖苷5种黄酮苷的同时检测,最低检出限为1.44².59μg/m L,加标回收率在93.8%¹05.9%之间。5种黄酮苷的含量测定结果表明不同品种的枣叶中黄酮类成分的组成和含量差异较大,其中芦丁和槲皮素-3-O-洋槐糖苷的含量较高,平均为7.83 mg/g D.W和4.61 mg/g D.W;8个品种枣叶中检测到槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-（1→2）-α-L-鼠李糖苷,平均5.32 mg/g D.W;而槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量较低,分别为0.14 mg/g D.W和0.41 mg/g D.W。      

燕麦中的黄酮提取与结构鉴定

通过响应面分析法确定了以燕麦为原料提取黄酮的最佳工艺:70%乙醇、温度55℃、料液比1∶16、提取时间90min,提取率达3.091%。将燕麦黄酮经AB-8大孔树脂、聚酰胺和ODS反相柱层析分离,得到三种黄酮化合物A、B、C,利用核磁共振技术鉴定出A为芦丁;B为莰菲醇-3-O-芸香糖苷;C为莰菲醇-3-O-果糖-α-葡萄糖苷。其中化合物C在禾本科植物中属首次报道。     

大孔树脂法纯化覆盆子中黄酮化合物

目的 覆盆子是药食两用资源,山奈酚-3-O-芸香糖苷为其中的代表性黄酮。通过比较不同大孔树脂及纯化条件对覆盆子提取物中黄酮的纯化率,确定最佳的覆盆子黄酮纯化条件。方法 以覆盆子总黄酮的吸附率和解吸率为指标,筛选出最佳的大孔树脂及分离纯化参数;利用HPLC分析纯化物中的黄酮种类和含量。 结果 从D101、NAK-9、AB-8、HPD 500、HZ 806、S-8筛选出最适的分离纯化树脂AB-8,最佳分离纯化条件为：液体样品与树脂量比为0.6：1（V/M）,吸附时间为4 h,最适解吸溶剂为70%乙醇（V/V）,洗脱液体积为样品量的4倍,静态解吸时间为4 h。经大孔树脂纯化后,覆盆子黄酮纯度较纯化前提高了3.3倍。通过HPLC分析,纯化物中黄酮以山奈酚-3-O-芸香糖苷和椴树苷为主,含量分别为0.059 mg/g-PDS和0.0046 mg/g-PDS,占覆盆子原料干重的0.032%和0.024%。结论 本研究所得纯化方法可大幅提高覆盆子黄酮提取物的纯度,为覆盆子提取物在营养健康食品中的应用提供参考和借鉴。