毕赤酵母表达β-葡萄糖苷酶中试条件优化

通过单因素摇瓶培养结合50 L发酵罐参数优化,对毕赤酵母基因工程菌生产β-葡萄糖苷酶发酵条件进行研究,确定毕赤酵母β-葡萄糖苷酶工程菌摇瓶最佳产酶条件:增值阶段最适初始p H5.5、接种量10%、装液量100 m L/500 m L,50 L发酵罐中试条件:诱导p H6.0、诱导时间96 h、甲醇浓度1.0%(v/v)、溶氧控制20%~30%,在此条件下,酶活力可达98.85 IU/m L。进一步优化,可为提高木质纤维素生产纤维乙醇过程中酶解得率提供技术支撑。     

共表达伴侣蛋白对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶发酵过程的影响

通过分别共表达伴侣蛋白PDI和Bip获得β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的高效表达。根据Gen Bank公布的毕赤酵母PDI和Bip序列设计引物,以酵母基因组为模板PCR扩增目的基因片段,插入表达载体p PICZαA,分别整合到β-甘露聚糖酶工程菌中,筛选共表达二硫键异构酶的重组酵母(PM115)和共表达免疫球重链结合蛋白的重组酵母(BM115),在30 L发酵罐水平上分析两种共表达伴侣蛋白菌株与初始菌株(GM115)对β-甘露聚糖酶表达的差异。相同工艺下,PM115与原始菌株相比未有提高,而BM115发酵产酶能力高于原始菌株,最高酶活达到40 900 U/m L,最高总蛋白表达量13.22 g/L,最高比酶活达到3 150 U/mg,分别比初始菌株提高38%,22%和18%。毕赤酵母基因工程菌GM115通过共表达伴侣蛋白Bip,提高了β-甘露聚糖酶的产量和比活力,达到工业化生产水平。     

响应面法优化大肠杆菌产海藻糖合酶发酵培养基

以海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)为研究对象,以海藻糖合酶的酶活为考察指标,对海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)的培养基进行优化。首先运用单因素实验对大肠杆菌(E.Coli)产海藻糖合酶进行了优化,利用Plackett-Burman进行两因素两水平设计对影响其产酶因素进行评估并筛选出具显著效应的3种因素:葡萄糖、酵母浸粉和K2HPO4。用最陡爬坡实验逼近以上三种因素的最大响应面区域后,采用Box-Behnken进行三因素三水平的设计以及响应面分析,获得最佳产海藻糖合酶的培养基。结果表明,发酵大肠杆菌的最佳培养基配方为:葡萄糖7.2g/L,酵母浸粉6.6g/L,蛋白胨10g/L,(NH4)2SO45g/L,K2HPO415.7g/L,KH2PO44g/L,Mg SO4·7H2O1.6g/L,微量元素混合液0.5m L/L。在此条件下进行产酶重复实验5次,海藻糖合酶酶活为65U/mg,比优化前提高了91.2%。     

一种密码子优化的酸性普鲁兰酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达

根据毕赤酵母密码子偏好性对来源于Bacillus deramificans的普鲁兰酶基因进行优化并构建在细胞内表达普鲁兰酶的重组毕赤酵母。优化后普鲁兰酶编码基因Bd P4在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达水平平均比优化前的普鲁兰酶基因Bd P提高4倍以上。筛选到1株表达水平较高的重组菌Pichia pastoris GS115/p PIC9K-Bd P4 WB54。在5 L发酵罐获得了初步优化的发酵条件:发酵液p H 4.5,在菌体量达到87 g/L时开始甲醇流加,采用溶氧(DO)恒定策略控制甲醇流加,DO控制在25%的水平,甲醇流加速率为9.9 m L/(L·h),搅拌转速控制在最大值800 r/min,通风量2 V/(v·m)。在优化条件下重组菌发酵酶活在2 000 U/m L以上。重组酶最适p H为4.0,最适作用温度50℃,在50和55℃下酶活半衰期分别为32和18 h。     

毕赤酵母不同甲醇利用表型Mut~+和Mut~s表达FsGLUm基因的比较

将来源于产琥珀酸丝状杆菌的β-葡聚糖酶基因根据毕赤酵母的偏好性进行密码子优化,通过全基因合成该优化基因(Fs GLUm)并构建重组表达载体p PIC9K-Fs GLUm。将p PIC9K-Fs GLUm分别用SalⅠ和BglⅡ酶切线性化后电击转化入毕赤酵母GS115染色体DNA中,经过表型筛选和抗性筛选获得不同甲醇利用表型Mut+和Muts阳性菌株。经刚果红平板检测,在摇瓶水平下,Mut+型菌株表达产物产生的水解透明圈明显大于Muts型菌株表达产物。在发酵罐水平下,Mut+型菌株各时间段表达产物酶活性明显高于Muts型菌株。Mut+型菌株表达的酶活性在甲醇诱导96h达到最大值,为6424U/m L,比活性为2607U/mg,菌体干重为123.6g/L。Muts型菌株表达的酶活性在诱导后108h达到最大值,为119U/m L,比活性为1867U/mg,菌体干重为113.5g/L。以上结果表明,Mut+型毕赤酵母更有利于产琥珀酸丝状杆菌β-葡聚糖酶基因的表达。     

疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达和性质鉴定

通过密码子优化改造编码sn-1,3位置专一性疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)基因,同时通过重叠PCR技术合成该基因,并将其克隆到巴斯德毕赤酵母的表达载体p PIC9K中。结果表明,TLL脂肪酶被高效胞外表达,在摇瓶中发酵168 h得到的发酵液的上清脂肪酶表达量达到0.1 mg/m L,对应的p NPP水解酶活达到312.72U/m L。与对应的原始编码基因重组菌酶活(179.42 U/m L)相比,密码子优化后酶活提高74.29%,表明密码子优化策略成功提高了TLL在巴斯德毕赤酵母中的重组表达。比较毕赤酵母来源的重组TLL与商业化的米曲霉酶学性质发现它们具有相似的最适p H和温度耐受范围。另外,它们在有机溶剂耐受性、表面活性剂和金属离子效应以及位置选择性方面均较为相似,表明毕赤酵母来源的重组TLL同样具有商业化应用的潜力。     

NH+4离子对重组毕赤酵母产华根霉脂肪酶发酵过程的影响

利用重组毕赤酵母在7 L的发酵罐中进行分批补料高密度发酵,考察不同NH4+质量浓度对毕赤酵母基因工程菌表达华根霉脂肪酶的影响。结果表明,补加(NH4)2SO4溶液维持NH4+质量浓度在7 g/L时华根霉脂肪酶酶活最高,分别是不补加(NH4)2SO4溶液、补加并维持NH4+质量浓度在5 g/L、10 g/L条件下的1.41、1.11、1.08倍,而且在该氮源质量浓度条件下,胞外总蛋白质质量浓度最高,达到5.61 g/L。通过分析不同氮源条件下发酵参数比生长速率、产物比形成速率和底物比消耗速率的差异,发现发酵维持NH4+质量浓度在7 g/L时,产物比形成速率和底物比消耗速率均较高,这与该条件下产酶水平最高相一致。研究结果表明,对毕赤酵母基因工程菌发酵过程中的氮源进行优化,能够明显促进外源蛋白质的表达。     

低频超声场促进细丽毛壳菌发酵生产α葡聚糖酶的研究

为了解决细丽毛壳菌发酵过程中菌体絮凝对发酵产酶的影响,本研究利用低频超声场对细丽毛壳菌的发酵过程进行处理,通过实验确定低频超声场的作用时间、频率等因素对菌体生长以及产酶的影响。研究结果表明在低频超声处理的时间为20s/20min,超声频率为20k Hz,超声功率为300W的条件下,菌体絮凝现象得到显著缓解。同时,葡聚糖酶酶活从102.9U/m L提高至193.4U/m L,提高了87.9%。低频超声场处理有利于提高细丽毛壳菌发酵过程中的生理活性及产酶效率。     

重组毕赤酵母产果糖基转移酶发酵条件的优化

果糖基转移酶(EC 2.4.1.9)是利用蔗糖为底物制备低聚果糖的关键酶。利用前期构建的产果糖基转移酶的重组毕赤酵母为出发菌株,对其进行发酵优化。最适发酵产酶条件为:装液量30 m L/250 m L、V(甘油)∶V(甲醇)=1∶20、初始pH为5.5、诱导温度为30℃、初始甲醇浓度为1.0%、后续甲醇浓度为1.5%、硫酸铵浓度10 g/L、诱导时间为120 h。在优化的发酵产酶条件下,重组果糖基转移酶酶活力达218.3 U/m L,较优化前提高了5倍。     

田口方法优化菌株产菊粉酶的培养条件

鉴定一株从菊芋根际土壤中分离出的产外切型菊粉酶活力较高的菌株C-56。通过16S r DNA序列分析构建系统发育树,初步确定菌株的分类地位,利用单因素实验和田口方法优化培养基配方。实验发现菌株C-56属于伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia),单因素实验确定菌株产酶的最佳碳源、氮源、无机盐分别为菊粉、酵母膏、Mg SO4·7H2O。应用田口方法优化菌株的培养基,统计学分析发现菊粉对菌株产酶的影响最大,最佳培养基配方为菊粉50 g/L,酵母浸粉20 g/L,Mg SO4·7H2O 6 g/L,p H6.0。在最佳条件下获得的菊粉酶活力为(29.34±1.95)U/m L,比初始菊粉酶酶活力(6.25±0.84)U/m L提高了3.69倍。     

复合防腐剂在乳化香肠中的应用

复合防腐剂的研究一直是食品保鲜的重要技术措施。本研究针对乳化香肠这类食肉糜类制品的防腐措施进行了研究,研究表明采用单辛酸甘油酯、乳酸链球菌素、茶多酚、双乙酸钠等四种防腐剂按照0.02%、0.06%、0.04%、0.4%的比例复配成新型乳化香肠防腐剂,进行保鲜能有效的延长保质期,效果明显。该研究为复合防腐剂在食品保鲜上的推广应用提供理论依据。     

鸭蛋涂膜保鲜研究

用不同的涂膜剂对鸭蛋进行涂膜保鲜研究,在室温和35～36℃下分别进行了贮存保鲜试验。试验结果表明:猪油涂膜对鸭蛋的保鲜效果最好,其失重率最低,鸭蛋在猪油涂膜下能保存4个月不变质,且新鲜度较好。     

水蜜桃采后防腐、保鲜与贮藏研究进展

水蜜桃鲜果味美色佳,营养丰富,受到市场与消费者广泛认可,由于本身为跃变呼吸型核果且生产存在较强季节性,容易在采后迅速腐烂变质,造成巨大经济损失。随着农业产业及社会经济不断发展,在逐步深入了解果蔬腐烂机理后,国内外通过检测相关重要生理指标(失重率、硬度、可溶性固形物含量、相对电导率、呼吸强度、丙二醛含量、多酚氧化酶含量及腐烂指数等),对水蜜桃保鲜技术进行了多方位探索,形成部分可初步应用于实际生产的保鲜方法,依据技术原理主要分为3类,即物理保鲜方法(温控、气调、吸附材料、紫外辐照与超声波等)、化学保鲜方法(钙调剂、杀菌剂、涂膜技术与生长调节剂等)与生物保鲜方法(植物源中草药保鲜剂、微生物拮抗菌及生物酶制剂等),在有效性、安全性和经济性上各具特点。在此基础上整合优化形成了少量复合保鲜方法,具有明显优势,成为水蜜桃未来防腐保鲜重要研究趋势。本文主要对目前国内水蜜桃防腐保鲜的研究现状、分析方法、实用技术和效果评估进行了概述,为不断提升果品采后储运品质与效益,提供科学依据。     

鲜切胡萝卜保鲜技术研究进展

胡萝卜(Daucus carota L.var.sativa Hoffm)富含糖类、胡萝卜素、维生素A、维生素B₁、维生素B₂、花青素等营养成分。鲜切胡萝卜因其具有天然、方便和安全等特性,而受到消费者的青睐,但是鲜切胡萝卜易发生脱水和木质化而造成白化现象,同时汁液外流,易受微生物的侵染等危害,进而加速变质衰老进程,进而对品质造成不可逆转的影响。因此,本文就近几年有关鲜切胡萝卜保鲜研究的现状进行了综述,主要评价了包括温度、热处理、辐照(紫外线、电子束)、超高压、高压二氧化碳等处理的物理保鲜技术和杀菌剂、1-MCP和涂膜处理的化学保鲜技术,并对未来鲜切胡萝卜保鲜技术的发展方向进行展望,以期为鲜切胡萝卜科学食用和保鲜提供理论参考。     

不同保鲜方式对松茸保鲜效果影响研究

目的探究不同保鲜方式对松茸保鲜效果的影响。方法以常规电商处理(泡沫箱加冰、衬吸水纸)为对照,通过研究贮藏中色差值、含水量、质量损失率、相对电导率值及相关酶活变化,分析了添加微孔膜保鲜袋处理、冰箱处理对松茸保鲜效果的影响。结果贮藏到第8 d时,对照组的L*值为48.79,相对含水量为88.17%,质量损失率为29.22%,相对电导率值为11.80%,超氧化物歧化酶活性为609.22 U·mg~(-1)prot,氧化氢酶活性为1868.44 U·mg~(-1)prot,说明传统松茸包装能在8 d内保持较好品质。与对照相比,套袋有利于L*、b*值和含水量的维持,可以有效地减少贮藏中的质量损失率。其中复命保鲜袋的使用使松茸贮藏中保持较低的相对电导率值和较高的氧化氢酶活性,延缓了松茸的衰老。结论保鲜袋结合泡沫箱加冰贮藏能够较好地保持松茸采后品质,是松茸运输(配送)的有效方式。     

冷却肉保鲜技术及其研究进展

冷却肉的货架期是限制我国冷却肉发展的瓶颈所在.为了提高冷却肉品质,延长冷却猪肉货架期,本文阐述了冷却肉保鲜技术、各种保鲜方法原理和特点,同时对保鲜冷却肉存在的问题和研究方向也进行了探讨.     

现代生皮保藏技术文献综述

讨论了有利于环境保护的各种少盐或无盐生皮保藏技术     

预制菜肴中芥菜护色及保脆工艺优化

为改善以芥菜为原料的预制菜肴在加工贮藏过程中易发生褐变和组织软化等问题,该研究以多酚氧化酶（Polyphenol Oxidase,PPO）活性、过氧化物酶（Peroxldase,POD）活性、叶绿素含量、剪切力、色差、维生素C为指标,通过单因素及正交试验设计分析不同漂烫条件以及不同种类和添加量的护色剂、保脆剂对芥菜品质的影响。结果表明,最佳工艺条件为：90 ℃漂烫2 min,抗坏血酸添加量0.06%（m/m）,柠檬酸添加量0.12%（m/m）,植酸添加量0.012%（m/m）,护色40 min,氯化钙添加量0.24%（m/m）,保脆30 min。在此工艺条件下,PPO和POD失活率分别达到了90.40%和66.03%,叶绿素含量最高为93.60 mg/100 g;在18 d贮藏期后,经此工艺处理后的芥菜与空白组相比,Vc含量,叶绿素含量,a*值绝对值和剪切力分别提升了333.65%,783.69%,158.23%和318.84%,得到的芥菜色泽自然、口感脆嫩,感官评分最高。此工艺能有效维持芥菜绿色色泽和脆嫩口感,为预制菜肴中其他绿叶蔬菜提供工艺参考。     

壳聚糖保鲜食品的机理及其应用的研究

从壳聚糖的特征基团的作用、膜的作用、酶的变化三个方面着重讨论了壳聚糖保鲜食品的机理，并对壳聚糖膜保鲜食品的应用进行了分类介绍。     

秀珍菇保鲜技术研究

比较了秀珍菇低温保鲜、自发气调保鲜、低温真空保鲜效果。结果表明，低温真空保鲜效果最佳，能有效地延缓秀珍菇变色、变味，抑制菌柄气生菌丝发生，减少水分损失，可以使秀珍菇保鲜期限超过9d。