米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

对米曲霉 HDF-7 所产蛋白酶进行分离纯化,经硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析得到电泳纯的蛋白酶,经SDS-PAGE 电泳测定其相对分子质量约为30 KDa.该酶的最适反应温度为50℃,最适作用pH值为7.0,该酶在20℃时具有良好的热稳定性,在pH6.0～8.0的条件下酶是相对稳定的,Mn2+对该蛋白酶有明显的激活作用,Cu2+对该蛋白酶有强烈的抑制作用,Km值为78μg/mL,最大反应速度V max为6.29μg/min.     

海参肠中溶菌酶的分离纯化及其酶学性质

从海参肠中分离纯化溶菌酶,并测定其酶学性质及抑菌作用。在4℃下将海参肠打浆,用Tris-HCl缓冲液抽提。上清液经浊点萃取法（CPE）浓缩、阳离子交换柱（CM52纤维素）层析和SephadexG-75凝胶过滤层析分步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。该酶的比活力达到3026．1U／mg,纯化倍数为18．7,活力回收为46．0％。对纯化的溶菌酶性质研究表明,该酶相对分子质量约为16000,对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃,最适作用pH6．5,在45℃以下和pH4．O～8．0都有较好的稳定性,并与常见金属离子和化学试剂有良好的配伍性。与通常从蛋清中提取的溶菌酶相比较,从海参中分离纯化的溶菌酶具有广谱杀菌功能,即对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌细胞壁均有溶解作用。     

海参体壁酶促溶性胶原的提取工艺

以海参体壁为原料,采用胃蛋白酶水解法提取酶促溶性胶原。以酶促溶性胶原得率为指标,通过正交试验确定了胃蛋白酶水解法获取酶促溶性胶原的最佳条件:温度为4℃,酶加量为14%,料液比为1∶500,提取时间为72 h;在此条件下酶促溶性胶原的得率可达到胶原纤维原料的73.44%。实验还确定盐浓度为0.8 mol/L时酶促溶性胶原的盐析效果最好。     

海参肠中溶菌酶的分离纯化及其酶学性质

从海参肠中分离纯化溶菌酶,并测定其酶学性质及抑菌作用。在4℃下将海参肠打浆,用Tris-HCl缓冲液抽提。上清液经浊点萃取法(CPE)浓缩、阳离子交换柱(CM52纤维素)层析和SephadexG-75凝胶过滤层析分步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。该酶的比活力达到3 026.1 U/mg,纯化倍数为18.7,活力回收为46.0%。对纯化的溶菌酶性质研究表明,该酶相对分子质量约为16 000,对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃,最适作用pH 6.5,在45℃以下和pH 4.0~8.0都有较好的稳定性,并与常见金属离子和化学试剂有良好的配伍性。与通常从蛋清中提取的溶菌酶相比较,从海参中分离纯化的溶菌酶具有广谱杀菌功能,即对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌细胞壁均有溶解作用。     

牡蛎糖原的提取、纯化及补体活性研究

采用酶解结合醇沉法从新鲜牡蛎中提取制备牡蛎糖原(oyster glycogen,OG),经阴离子交换柱DEAE-52、葡聚糖凝胶柱Sephadex G-100分离纯化,得到纯度较高的牡蛎糖原组分OG11。其蛋白质量分数为0.33%,糖质量分数为97.77%。用气相色谱法对OG11进行单糖组成鉴定,结果表明其中只含有葡萄糖。补体实验表明,OG11对补体具有较强的抑制活性,在5.0mg/mL时补体抑制率可达到77.38%。     

不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较

采用辛酸-硫酸铵法和亲和层析法两种方法纯化兔抗苏丹红I IgG。纯化产物通过BCA法、琼脂双向扩散、SDS-PAGE凝胶电泳试验进行蛋白浓度、效价及纯度的验证。实验结果表明,利用辛酸硫酸铵纯化的产物蛋白质浓度高于亲和层析法,但经亲和层析纯化的产物纯度和效价均优于饱和硫酸铵。因此亲和层析法是一种快速高效的纯化方法,纯化产物可适用于免疫学检测方法的研究,为今后食品中苏丹红添加剂的快速检测奠定了良好的基础。     

牡蛎糖原的提取、纯化及补体活性研究

采用酶解结合醇沉法从新鲜牡蛎中提取制备牡蛎糖原(oyster glycogen,OG),经阴离子交换柱DEAE-52、葡聚糖凝胶柱SephadexG-100分离纯化,得到纯度较高的牡蛎糖原组分OG11.其蛋白质量分数为0.33％,糖质量分数为97.77％.用气相色谱法对OG11进行单糖组成鉴定,结果表明其中只含有葡萄糖...     

梅花鹿茸多糖提纯

以梅花鹿鹿茸为原料,经提取、分离、纯化得到鹿茸多糖(PAPS)粗样品,将粗品在DEAE-Cellulose 32和Sephadex G-75柱上进一步纯化,得到PAPS样品.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,PAPS的相对分子量为70 kDa-80 kDa,采用苯酚-硫酸法测得总糖含量为825.51μg/mg,Folin-酚法测得蛋白质含量为20.27μg/mg,硫酸钡比浊法测得硫酸基含量为58μg/mg.红外光谱分析表明:PAPS具有明显的多糖特征吸收峰.     

壳聚糖酶的分离纯化及其特性研究

通过硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25凝胶过滤层析、DEAE Cellulose 52离子交换层析,将曲霉TCCC45017产的壳聚糖酶进行纯化,纯化倍数为57.21,回收率为26.55%,比活力提高至587.55 U/mg.经过SDS-PAGE电泳测得其分子质量为3.75×104 u.该酶作用的最适温度为55℃,最适pH为5.5,50℃以下保温1 h内酶的热稳定性较好,pH稳定范围为5.5～7.0,添加金属离子Mg2＋、Ca2＋、Ba2＋、Mn2＋对该酶有激活作用,Cu2＋、Fe2＋、Zn2＋、Al3＋则对酶有抑制作用.     

枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的纯化和性质

本文以魔芋粉为碳源培养枯草芽孢杆菌S-88获得一种β-甘露聚糖酶粗酶液,粗酶液通过硫酸铵梯度盐析、超滤、HiprepTM 26/10脱盐柱脱盐、HiprepTM 16/10 DEAE FF阴离子树脂和G-75凝胶柱的纯化,该枯草芽孢杆菌S-88产的甘露聚糖酶的酶活力达到61697.52 IU/mL。用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纯化后酶的分子量为30 kda,比其它细菌产的β-甘露聚糖酶分子量(50 kda)小。β-甘露聚糖酶在pH 6.0和50℃的酶活性最大。它在pH 4.4~6.8之间有很好的稳定性,37℃水浴2 h酶活保持在80%以上。55℃以下水浴2 h,酶活力保持在90%以上,该酶有较好的耐热性,煮沸80 min该酶活力才能基本上消失。     

尿激酶精制新工艺

报道了一种尿激酶精制新工艺。尿激酶粗品经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０凝胶过滤、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０离子交换层析柱精制,再用硫酸铵沉淀,沉淀物溶解后经 Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－３０凝胶柱分离出高分子尿激酶和低分子尿激酶。酶活力总收率为６０％,纯化倍数为５０倍以上。     

CTB-InsB融合基因在大肠杆菌中的表达研究

构建了一种霍乱毒素B亚基（CTB）与人胰岛素B链（InsB）的融合基因，并克隆入表达载体pGEX-4T-1中，命名为pGEX—CTB-InsB。该融合蛋白在大肠杆菌中的表达产物以包涵体形式存在，分子量约为43kDa。包涵体经溶解和复性后，使用GSTrapFF亲和层析柱纯化得到融合蛋白。经SDS-PAGE和Western免疫印迹分析证实纯化蛋白为重组目的蛋白。     

海带浓缩调味汁生产工艺条件的优化

以干海带为原料,采用水提法作为海带浓缩调味汁的生产工艺,以料液比、提取温度、提取时间为考察因素,以海带提取物得率和呈味氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸)总量为检测指标,采用单因素试验优化了海带浓缩调味汁的生产工艺条件。游离呈味氨基酸采用高效液相色谱法检测。结果表明,料液比为7/125(g/mL)、提取温度为60℃、时间为60min时,海带提取物得率较高[(32.4±0.57)%],海带提取物中呈味游离氨基酸总量较大[(14 526.77±324.80)μg/g]。在此工艺条件下生产的海带浓缩调味汁产品,呈味游离氨基酸含量较高,游离氨基酸组成比较合理,具有鲜甜的海带风味,较适合工厂产业化的生产。     

不同栽培模式杜仲体绿原酸含量积累动态的研究

研究杜仲绿原酸积累的动态规律,为确定杜仲合理栽培模式和最佳采收期提供依据.定期定点采集乔林栽培和叶林栽培的每年4～10月杜仲叶、皮样品,采用高效液相色谱（HPLC）法,分析杜仲体中绿原酸的含量.结果表明杜仲体中绿原酸动态积累有一定规律,叶林模式栽培的杜仲叶中绿原酸含量最高,且在6月达到全年最大值.实验结论：根据杜仲体中的绿原酸积累动态规律,杜仲的最佳栽培模式为叶林栽培,最佳采收期为6月.     

黑曲霉糖化酶基因在酿酒酵母中的表达

从黑曲霉eDNA文库中筛选出糖化酶基因,并在酿酒酵母中进行表达．阳性克隆在发酵培养基中培养60h后,产生的糖化酶酶活力达到峰值为4．3U／mL．测定结果显示其糖化酶大小为1908bp,编码636个氨基酸残基组成的蛋白质．酶学性质分析显示该酶的最适反应温度为50℃,pH为5．0．经柱分离纯化其发酵上清液后,SDS-PAGE电泳方法,测得它的分子量大约为70kD,且条带清晰．     

Production and characterization of alkaline extracellular lipase from newly isolated strain Aspergillus awamori HB-03

A strain HB-03 to produce alkaline extracellular lipase was isolated from oil-rich soil samples and identified as Aspergillus awamori.The growth conditions and nutritional factors for lipase production by strain HB-03 were optimized,and the maximum lipase production of (45.9±2.3) U/mL was obtained at 30 °C and pH 7.0 after 36 h using olive oil (1%) and sucrose (0.5%) as carbon sources and combination of peptone (2%),yeast extract (0.5%) and ammonium sulfate (0.1%) as nitrogen sources.The lipase was purified...     

红曲霉抑菌成分糖肽类物质的分离纯化及稳定性

红曲霉菌丝体经高压均质机破碎后用75％乙醇溶液提取胞内物质,提取液经脱色、浓缩、透析后冷冻干燥得粗品,再经硅胶柱层析和HPLC分析捡验得到较纯的红曲霉抑菌成分糖肽类物质．以金黄色葡萄球菌为指示菌,对抑菌成分的稳定性作了初步研究,结果表明：糖肽类物质在100℃处理12h其抑菌活性没有明显变化;抑菌成分在pH2～11时稳定,在pH12时抑菌活性下降;胃蛋白酶和木瓜蛋白酶能完全酶解糖肽类物质;Cu^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋对糖肽类物质的抑菌活性有促进作用,而Mg^2＋对糖肽类物质的抑菌活性有抑制作用。     

产黄青霉苯乙酰CoA连接酶基因phl的克隆表达及其纯化酶的性质分析

苯乙酸与CoA反应,生成苯乙酰CoA,利用RT-PCR方法成功地从产黄青霉中扩增得到1737 bp不含内含子的phl基因,并将其克隆到pET30a原核表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）中低温诱导表达。经SDS-PAGE检测分析,获得与预期大小（62.1 kDa）一致的蛋白表达特异条带。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化了重组酶,经检测苯乙酸的吸收,表明纯化酶对苯乙酸和CoA有明显的催化活性,酶活为1 680 U/mL。研究表明,纯化酶PCL最适宜温度为30℃,有一定的热稳定性,最适宜pH值为8.0,pH值为7.0~8.5时酶比较稳定。     

大豆球蛋白兔源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定

为建立大豆球蛋白致敏原检测方法和蛋白致敏性亚基的表位定位,从脱脂豆粉中分离纯化大豆球蛋白,制备多克隆抗血清,并进行免疫学特性分析。大豆球蛋白等电点pH值为6.4,采用碱溶酸沉法对大豆球蛋白进行粗提,用Sepharose CL-6B层析纯化大豆球蛋白粗提物,用SDS-PAGE检测蛋白纯度,免疫新西兰兔制备多抗血清,并对血清进行免疫学特性鉴定。结果表明:1号兔效价达到1∶6×10^4,由间接竞争ELISA抑制曲线可知,半数抑制率IC50为527 ng/mL,1号兔的多抗血清敏感性最高。特异性测定结果表明,该多抗血清除了与β-伴大豆球蛋白和花生蛋白的交叉反应率为8.6%和4.6%,与其他蛋白交叉反应率均小于0.2%。制备的兔源多抗血清效价高、敏感性强、特异性好,为大豆球蛋白单克隆抗体的制备及大豆蛋白致敏性亚分子结构的定位奠定了基础。     

凝血酶的亲和层析纯化技术

以新鲜猪血为原料 ,采用离心、激活、沉淀等技术提取出粗凝血酶 ,利用化学方法将分子量范围在 6KD左右的肝素连接到经溴化氰活化的 Sepharose CL- 6B树脂上 ,制成亲和树脂 ;采用亲和方法 ,从粗酶中纯化得到猪凝血酶。活性测定表明 ,在保持酶的底物专一性的同时 ,凝血酶的比活上升了 32 .5倍左右。计算总活力回收率约 5 0 .6%。同时对肝素亲和层析柱的制备以及洗脱方法进行了探讨。