3种方法检测食品中致泻大肠埃希氏菌检测能力验证结果分析

目的提高食品中致泻大肠埃希氏菌的检测能力,促进实验室检测能力的提高。方法参照GB4789.6-2016《食品微生物学致泻大肠埃希氏菌检验》方法进行检测,采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统进行生化鉴定、血清学鉴定,对可疑菌落进行普通PCR确证试验。同时使用多重实时荧光PCR法以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionizationtime-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析鉴定可疑菌落。结果国标法和多重实时荧光PCR法能准确鉴定出目标菌,MALDI-TOF-MS可以检测大肠埃希氏菌,但无法区分致泻大肠埃希氏菌和肠出血性大肠埃希氏菌。结论 3种方法各有优劣,同时使用,综合判断,能确保试验结果准确快速。     

食品中一株凝固酶异常的金黄色葡萄球菌的分离鉴定

目的 对餐饮环节采集的一份鸡排进行金黄色葡萄球菌检验时,发现一株血浆凝固酶试验异常的金黄色葡萄球菌,并对其分离、鉴定、分析和总结,避免因不典型菌株的漏检而带来的食品安全风险。方法 采用国标法检测金黄色葡萄球菌,血浆凝固酶试验时间延长至24h,同时用生化鉴定法和BAX System Q7快速检测法进行互相验证。结果 国标法凝固酶试验6h不凝固,12h出现部分凝固,24h完全凝固,生化鉴定法和BAX System Q7快速检测法结果都是检出金黄色葡萄球菌。结论 在食品中金黄色葡萄球菌检验过程中,选择性平板上菌落典型,而凝固酶试验异常的情况,应延长试验时间并用其他方法加以验证。     

预包装食品中金黄色葡萄球菌3种鉴定方法的比较

目的 比较国家标准方法(GB 4789.10-2016)、VITEK2 Compact全自动微生物鉴定系统、基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对预包装食品中金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法 使用金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)人工污染12种不同种类的预包装食品,按照GB4789.10-2016进行样品前处理和增菌,通过上述三种方法对上述样品中分离的疑似金黄色葡萄球菌进行鉴定,并对鉴定结果进行比较。结果 三种方法均能够对12种不同种类的人工污染预包装食品中分离的金黄色葡萄球菌进行准确有效的鉴定。相对于国标法,两种仪器鉴定方法无需进行后续溶血分析和血浆凝固酶试验,对操作人员技术要求更低,能够在更短的时间内获得鉴定结果。结论 两种仪器鉴定方法快速、可靠且操作简单,可以作为国标法的有效补充。     

基于16S rDNA序列、MALDI-TOF-MS和VITEK的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的鉴定

沙门氏菌和金黄色葡萄球菌广泛存在于食品及环境中,对食品安全造成一定的威胁。在食源性致病菌检测过程中,选择合适的方法不仅可以缩短时间,节省人力物力,还能更好地溯源。选取210株沙门氏菌和18株金黄色葡萄球菌,使用16S rDNA序列测定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和VITEK全自动细菌鉴定系统对其鉴定,使用R软件包(v3.6.1)对鉴定结果进行统计和相关性分析,比较3种方法的鉴定水平和效率。结果表明:3种方法均可将210株沙门氏菌(100.0%)鉴定到属水平;16S rDNA序列测定方法可将18株(100.0%)金黄色葡萄球菌鉴定到属水平,可将其中15株(83.3%)菌鉴定到种水平;MALDI-TOF-MS和VITEK可将18株金黄色葡萄球菌(100.0%)鉴定到种水平。除16S rDNA序列测定方法外,其余2种方法对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的鉴定水平相同,而MALDI-TOF-MS鉴定所需时间最短、效率最高。     

唐菖蒲伯克霍尔德氏菌三种鉴定方法的比较

以食品及环境样品中初步分离的13株疑似唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）为研究对象,通过比较生理生化检 测法、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）法和recA序列分析法,得到快速准确鉴定唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的方 法。 结果表明,13株疑似菌株经MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌,而VITEK 2 COMPACT生理生 化法鉴定8株（62%）为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌,其他5株为栖稻假单胞菌（Pseudomonas oryzihabitans）。 在唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的鉴 定方法中,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鉴定结果一致且准确,而VITEK 2 COMPACT生化检测法存在缺陷。 相比传统生理 生化鉴定方法,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法在唐菖蒲伯克霍尔德氏菌鉴定中更为快速、准确。     

1株与大肠埃希菌O157生化结果相似的 志贺氏菌的鉴定

目的对一菌株sznjO23进行分析鉴定。方法从猪肝中分离到菌株sznjO23,并对该菌株的菌落形态、生化特征及分子生物学特性进行分析。结果该菌株在CT-SMAC平板上呈圆形、光滑、较小的无色菌落,在改良CHROMagarO157显色平板上为紫色圆形的菌落。经全自动微生物鉴定分析系统VITEK 2 Compact鉴定,其生化结果96%可能性为大肠埃希菌O157,但血清学试验结果反应完全混浊,未出现任何凝集。16SrDNA序列分析发现,该菌株与志贺氏菌(ATCC29903)的进化距离较近、同源性高,相似度为99.26%。结论菌株sznjO23为志贺氏菌。当生化试验、血清学试验结果不一致时可选择16SrDNA序列分析的方法进行鉴定,以保证结果的准确性。     

能力验证巧克力样品中肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种的分离鉴定

目的验证国标法和实时荧光定量PCR法2种方法对能力验证中的沙门氏菌双相亚利桑那亚种分离与鉴定的效果。方法按照作业指导书要求及GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法分离菌株,以实时荧光定量PCR仪对分离菌株进行快速筛查,再将生化鉴定结果符合沙门氏菌特征的菌株进行血清学鉴定。结果样品CODE 0575在沙门氏菌显色平板上分离得到蓝绿色圆形菌落,在BS平板上分离得到灰绿色圆形菌落,经实时荧光定量PCR仪快速筛查,结果为阳性;再通过VITEK 2 compact鉴定为肠道沙门菌双相亚利桑那亚种;该菌不产硫化氢,ONPG为阳性,确定血清型为60:r:e,n,x,z15。结论以国标法为基准,借助实时荧光定量PCR仪和VITEK 2全自动鉴定系统进行检测,可确保沙门氏菌双相亚利桑那亚种不被漏检;应特别注意沙门氏菌双相亚利桑那亚种在显色培养基上与常见沙门菌表型不一致;建议扩大对沙门氏菌双相亚利桑那亚种的监测范围。     

100份食品样品中金黄色葡萄球菌的检测情况

通过检测2016年玉溪市100份食品样品的金黄色葡萄球菌,了解易被金黄色葡萄球菌污染的食品类别,总结样品中分离出的典型菌和疑似菌的鉴定经验,分析几种方法用于鉴定过程中的优点和缺点。参考国家标准GB 4789.10-2010检测金黄色葡萄球菌,分离和鉴定疑似菌落,并与PCR方法比对。结果表明,肉类食品更易检出金黄色葡萄球菌,PCR方法可用于快速初筛,但仍需进行生化鉴定和血浆凝固酶试验确证。     

应用多重PCR快速鉴定自然发酵肉制品中6 种葡萄球菌

肉葡萄球菌（Staphylococcus carnosus）、木糖葡萄球菌（S. xylosus）、腐生葡萄球菌（S. saprophyticus）、表皮葡萄球菌（S. epidermidis）、马胃葡萄球菌（S. equorum）和松鼠葡萄球菌（S. sciuri）是发酵肉制品中常见的葡萄球菌,为准确、快速地检测和鉴定这些菌种,建立6?种葡萄球菌的多重聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法并进行验证。以上述菌种的gap、rpoB、SodA和SNc为靶基因,设计和筛选菌种特异性引物6?对,优化PCR体系,建立6?种葡萄球菌的多重PCR鉴定方法。实验结果显示多重PCR的基因组DNA检测灵敏度可达到4?pg,活菌检测灵敏度可达到2×102?CFU;采用建立的多重PCR方法对传统肉制品中分离的8?株葡萄球菌进行鉴定,结果与16S rDNA序列分析、生理生化鉴定结果一致。建立的多重PCR方法具有较高的种间特异性,可快速、准确地用于发酵肉制品中肉葡萄球菌、木糖葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、松鼠葡萄球菌和腐生葡萄球菌的检测和鉴定,具有较好的应用前景。     

食品中李斯特氏菌的分离鉴定

英诺克李斯特氏菌与有毒性单核细胞增生李斯特氏菌的菌落特征和生化特征相似,仅溶血试验结果不同。本文通过对河南省濮阳市市售凉皮进行检验,分离纯化出一株李斯特氏菌,利用单增李斯特氏菌生化鉴定条进行检验,结果显示木糖和甘露醇两项生化试验结果为阴性,且溶血试验结果为阴性,符合英诺克李斯特氏菌的判定标准。同时,VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统也准确鉴定出该菌为英诺克李斯特氏菌(概率为99%)。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与VITEK和rpoB基因测序三种方法对食品中葡萄球菌鉴定效果的比较

目的 比较基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flightmass spectrometry,MALDI-TOF MS)、rpoB基因测序和VITEK 2 Compact三种方法对葡萄球菌的鉴定效果.方法 同时采用三种...     

冰鲜金鲳鱼样品中一株副溶血性弧菌的分离与鉴定

目的对一株分离于冰鲜金鲳鱼样品中的菌株进行分析鉴定。方法利用TCBS培养基和弧菌选择性培养基从冰鲜金鲳鱼样品中分离到1株菌株sznj V083,并对该菌株的菌落形态、生理生化特征及其分子生物学特性进行分析。同时进行副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)标准菌株ATCC33847,创伤弧菌(Vibrio vulnificus)标准菌株ATCC27562的质控检验。结果该菌株在TCBS平板上呈现蓝绿色菌落,而在弧菌显色平板上呈现深蓝色菌落,其全自动生化鉴定结果显示其为创伤弧菌。PCR试验和16S rDNA序列分析表明,该菌株为副溶血性弧菌并与参考菌株Vibrio parahaemolyticus BB22OP(登陆号CP003973.1)的同源性最高。且该菌株的毒力基因tdh、trh检测为阴性。结论分离于冰鲜金鲳鱼样品中的菌株sznj V083为副溶血性弧菌。在副溶血性弧菌的检测中,除了常规的生理生化等方法外,还应该结合16S rDNA基因序列分析或PCR方法提高检测结果的特异性和灵敏度,以保证检测结果的真实性和准确性。     

3种快速检测沙门氏菌方法的比较分析

目的 比较PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法检测沙门氏菌的检测效果。方法 使用PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法和国标法分别对待测样品进行检测, 并将3种快速检测方法的检测结果与国标法检测结果进行对比分析。结果 3种快速检测法的检测结果和国标法检测结果符合率分别为100%、92.9%和100%, PCR法和VITEK-2 Compact法符合率略高于胶体金法, 但3种快速检测方法总检出率与国标法比较差异均无统计学意义(P>0.05), PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法对35个沙门氏菌阳性样本的检出率分别为100%、85.7%和100%。针对阳性样品, PCR法和VITEK-2 Compact法高于胶体金法, 且差异有统计学意义(P<0.05)。PCR法和VITEK-2 Compact法对沙门氏菌的最低检出限为1×101 CFU/mL, 而胶体金法为1×102 CFU/mL。结论 3种快速检测方法均可作为沙门氏菌国标检测方法的有效补充。     

对虾肠道中产毒镰孢菌抑制菌的筛选与鉴定

为了获得对产毒镰孢菌具有抑制效应的海洋细菌,从对虾肠道中分离细菌,并将分离得到的优势细菌与产T-2毒素的禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)(FG1207)进行固体对峙培养,具有抑菌圈的细菌菌落即为产毒镰孢菌的抑制菌。然后选取对FG1207具有抑制作用的细菌与FG1207进行液体共同培养,用LC-MS/MS技术检测菌悬液中T-2毒素含量,最后对具有抑制FG1207的生长和降解T-2毒素效果的细菌进行16s r RNA序列鉴定和VITEK2细菌生化鉴定。实验结果分离得到8株优势细菌,其中一株对FG1207的生长具有明显的抑制作用;LC-MS/MS检测发现该细菌与FG1207共同培养菌悬液中未检测到T-2毒素,说明该细菌不仅能够抑制产毒镰孢菌的生长,还能降解T-2毒素。经16s r RNA鉴定该细菌为海洋尼泊尔葡萄球菌(Nepal Staphylococcus Aureus),相似度为99.93%,VITEK2细菌生化鉴定的相似度为96.86%。     

16S rRNA基因序列、生化鉴定、质谱3类方法鉴定常见微生物的结果分析

目的比较16SrRNA基因序列、生化鉴定、质谱鉴定3类实验方法分析沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌的鉴定结果的异同。方法挑选沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌各50株,分别进行16S rRNA基因序列测定、VITEK COMPACT 2生化鉴定、质谱鉴定3类实验,并比较3类实验的鉴定结果。结果 3类实验方法对大部分沙门氏菌鉴定在属水平,生化鉴定方法对少数血清型鉴定到种水平;对金黄色葡萄球菌均鉴定到种水平; 16SrRNA基因序列、生化方法对蜡样芽孢杆菌鉴定到属水平,质谱鉴定到种水平。结论 3类实验方法对大部分沙门氏菌、所有金黄色葡萄球菌鉴定水平相同,质谱鉴定蜡样芽孢杆菌的结果更准确,且质谱鉴定时效性更高。     

食品中沙门氏菌快速检测技术方法对比结果分析

目的比较VITEK2COMPACT、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrixassistedlaser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)、实时荧光PCR法(real-time PCR)、环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)4类方法,分析其对沙门氏菌的快速检测效果。方法挑取12株阳性野生菌株复苏,配以1株标准菌株作为对照,分别用VIKEK2COMPACT、MALDI-TOF-MS、Real-timePCR、LAMP四类方法对其进行检测,并比较4类方法的结果差异。结果 Real-time PCR与LAMP单对通用引物能鉴定到属水平,此外, LAMP测定沙门氏菌时会有假阴性的情况出现;VITEK2生化鉴定能将少数沙门菌株鉴定到种的水平;质谱方法能鉴定到亚种水平,同时会出现鉴定不准确的情况。结论基于沙门氏菌属水平上, 4类方法都能快速准确鉴定沙门氏菌,但在使用快速检测技术时均应考量该方法的优点对实际工作的帮助以及缺点对检验结果的影响,才能提高检测效率。     

克罗诺杆菌属食品分离株种水平鉴定方法比较研究

目的研究食品中分离克罗诺杆菌属种的鉴定方法,旨在建立稳定、可靠的种的鉴定方法。方法本研究选择三种鉴定方法,包括生化鉴定(VITEK 2 Compact)法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、全基因组测序,通过比较分析三种方法对19株克罗诺杆菌属的鉴定结果,阐述三种鉴定方法的优缺点及其适用性。结果本研究中19株克罗诺杆菌属的鉴定结果显示,VITEK 2 Compact对阪崎克罗诺杆菌和丙二酸盐克罗诺杆菌的鉴定准确率只有67%和66%,而MALDI-TOF MS和全基因组测序的鉴定结果一致,因此可以判定MALDI-TOF MS能够快速、准确、高通量对克罗诺杆菌属进行种的鉴定。但是MALDI-TOF MS受限于数据库,不能鉴定到亚种的水平。结论本研究结果提示VITEK 2 Compact法不适用于克罗诺杆菌属种的鉴定;全基因组测序鉴定结果准确可靠;MALDI-TOF MS可以实现快速、高通量、准确的鉴定,仍需要进一步研究克罗诺杆菌属3个亚种的蛋白指纹图谱特点,丰富蛋白指纹图谱数据库,使其能够准确鉴定克罗诺杆菌属的7个种和3个亚种。