黑曲霉Ⅲ与绿色木霉Ⅰ混合发酵产纤维素酶的分离纯化及酶学性质研究

对黑曲霉Ⅲ与绿色木霉Ⅰ混合发酵所产纤维素酶进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析,得到5个洗脱峰,其中峰2含内切葡聚糖苷酶和外切葡聚糖苷酶,且内切葡聚糖苷酶活最高;峰3含内切酶、外切酶及β-葡萄糖苷酶,酶系较全面;峰5含内切酶和外切酶;峰1和峰4没有纤维素酶活性。采用DEAF FF弱阴离子交换柱层析对峰2进行分离纯化,从中分离纯化得到1种内切葡聚糖苷酶组分,经SDS-PAGE电泳分析,其分子量为61.5 KD。酶学性质研究结果表明,CMC酶活在pH4.0～6.0的条件下,可保持初始酶活的70%～80%,最适酶反应pH值为5.0;温度在30～50℃范围内,酶活较高,最适酶反应温度为50℃,若超过60℃,酶活迅速下降。     

绿色木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的研究

为提高绿色木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的能力,进行了黑曲霉接种时间和混合发酵时间的优化。研究了绿色木霉与黑曲霉4株菌单独发酵及混合发酵产纤维素酶酶活的特点,调整黑曲霉NH11-1的接种时间与绿色木霉NM01进行混合发酵来寻找产酶能力最高的时间点。结果表明,黑曲霉NH11-1推迟48 h接种的混合发酵组产酶效果最佳。最佳混合发酵条件为30 ℃、200 r/min恒温振荡培养5 d,滤纸酶活力（FPA）达到242.80 U/mL,是出发菌黑曲霉NH11-1的2.66倍;β-葡萄糖苷酶活力（β-GA）达到297.35 U/mL,是出发菌绿色木霉NM01的1.94倍;β-GA与FPA的比值为1.22,符合纤维素酶水解天然纤维素的最佳比值范围（0.12～1.50）。     

里氏木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的条件优化

为提高纤维素酶酶解秸秆产糖效果,以碱性双氧水处理过的玉米秸秆为发酵基质,进行里氏木霉与黑曲霉混合发酵的研究。通过单因素试验确定黑曲霉延迟接种时间、里氏木霉与黑曲霉接种比例 、发酵时间和固液比4个因素的最优水平。在此基础上,采用Box-Behnken响应面设计对混合发酵产酶条件进行优化,获得最佳产酶条件：黑曲霉延迟接种时间 36h,里氏木霉与黑曲霉接种比例 5:1、发酵时间7d、固液比2:50(m/V)、吐温-80体积分数0.4%、pH 5.0和装液量50mL/250mL。此时,滤纸酶力(FPA)可达1.224 IU/mL,β-葡萄糖苷酶活力(β-GA)可达0.315 IU/mL。采用高效液相色谱法,对最佳条件下的纤维素酶酶解秸秆的水解液进行检测。结果表明,两菌株混合发酵较单菌株发酵的纤维素酶系更加完整,且降解木质纤维素类原料产可发酵性糖的能力增强。     

绿色木霉HY-07液体发酵产纤维素酶的研究

以玉米芯为主要原料,通过单因素和正交试验对绿色木霉HY-7液体发酵产纤维素酶的最佳工艺条件进行优化.结果表明,最佳产酶条件为:250mL三角瓶添加Mandels无机营养液75mL,添加玉米芯2.0%,蛋白胨0.05%,吐温80 0.1%,调整pH值为5.0;茵龄78h.接种量4.0%,转速150 r/min,28℃恒温振荡培养102h,该条件下,其酶活为401.7u/mL,比优化前提高了44.6%.     

混合菌固态发酵产纤维素酶条件的研究

以稻草秸秆粉为碳源,利用绿色木霉和黑曲霉进行固体发酵产纤雏素酶的研究。以混合菌接种比例、麦麸与稻草粉质量比、发酵时间和三角瓶装量4因素为考察对象,通过单因素实验和正交实验优化混合菌固体发酵条件。确定该混合菌株的最优产酶条件,结果表明,混合菌最佳固体发酵条件为：绿色木霉和黑曲霉接种比例为1：1、麦麸与稻草粉质量比为1：3．0、发酵时间为4d、装量为50mL／1000mL三角瓶。在此最佳发酵条件下,FPA酶活、CMC酶活、β-G酶活分别为5．291U／mL、9．33IU／mL和49．91IU／mL,分别是单菌发酵的2．28～2．47倍、2．39～2．45倍、1．38～2．09倍。混合菌发酵产生的各酶活性均高于各种菌单独发酵产生的各酶活性。     

一株绿色木霉液体深层发酵产纤维素酶工艺研究

研究了pH值、温度和溶解氧对一株绿色木霉进行液体深层发酵产纤维素酶的影响及其控制 :在 10L的通气机械搅拌发酵罐中 ,接种量为 10 % ,发酵过程采取分段控制pH值、温度和溶解氧的工艺 ,发酵 72h左右酶活力最高 ,FPA和CMC酶活力分别达到 6 7U/ml和 375U/ml。     

绿色木霉RW-2纤维素酶的酶学性质研究

对由绿色木霉RW-2固态发酵产生的纤维素酶的主要酶学性质进行了研究.结果表明:纤维素酶在40℃和50℃时稳定性较好,当温度高于50℃后,酶的热稳定性显著降低:表面活性剂吐温-80在一定的范围内对纤维素酶有激活作用,最佳作用浓度为0.05%;金属离子K+、Ca2+纤维素酶呈现抑制作用:Cu2+、Zn2+对纤维素酶有激活作用;阴离子I-、CH3COO-对纤维素酶有明显的抑制作用.     

一株绿色木霉产纤维素酶的性质研究

摇瓶培养绿色木霉得到纤维素酶粗酶液,分别测定C1酶、Cx酶、β-葡萄糖苷酶的活力并测定温度、pH、底物浓度、金属离子对不同酶组分活力的影响。结果表明不同反应条件对不同酶组分的活力影响各异。     

绿色木霉液体发酵产纤维素酶的培养基优化

研究液体摇瓶发酵产纤维素酶的最佳培养基组成。通过单因素实验确定了培养基中氮源、碳源和诱导碳源的种类,采用正交试验确定了培养基中4种主要营养成分的组成。结果表明,摇瓶液体发酵产纤维素酶的最佳产酶培养基的种类和组成为：有机氮源蛋白胨和无机氮源硫酸铵的含量分别为11g／L和13g／L,葡萄糖6g/L,磷酸二氢钾10．5g/L,爆破的稻草为13．4g/L;纤维素酶的滤纸酶活为19．22U／mL。     

绿色木霉HY-07产纤维素酶发酵工艺的优化

以玉米芯、麸皮为主要原料,通过单因子及正交试验对绿色木霉HY-07固态发酵生产纤维素酶的产酶条件进行优化。结果表明,最佳产酶条件为:250 mL三角瓶装料量6 g,玉米芯∶麸皮111∶4,固液比10∶.8,吐温80添加量0.2%,K2HPO4含量0.05%,MgSO4.7H2O含量0.025%,(NH4)2SO4含量1%,pH自然,30℃恒温培养7 d,酶活力可达674.44 u/g,比对照增加了50.8%。     

绿色木霉内切葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

采用DEAE-650C弱阴离子交换层析、CM-650M弱阳离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶层析和Octyl Sepharose CL-4B疏水层析等分离纯化技术,从绿色木霉M1发酵液中分离纯化得到4个电泳纯的内切葡聚糖酶组分(EG1、EG2、EG3和EG4),比活力分别为41.83,139.96,117.72,126.50 U/mg,分子质量分别为25.4,28.8,56.3,60.5 ku,最适反应温度分别为50,45,55,60℃,最适反应p H分别为6.0,5.0,4.0,5.0,米氏常数Km值分别为9.51,5.06,4.16,4.86 mg/m L。组分EG1、EG3和EG4在30~50℃范围较稳定,组分EG1、EG2和EG4在p H4.0~6.0范围稳定性较好,而组分EG3只在p H5.0的条件下较稳定。Zn2+、Mg2+和K+对组分EG4有激活作用,对组分EG1、EG2和EG3有抑制作用,Ca2+对组分EG1、EG2和EG3有激活作用。     

绿色木霉Sn-9106固态发酵中药残渣产纤维素酶研究

对绿色木霉Sn-9106固态发酵中药残渣产纤维素酶的可行性进行了研究.以滤纸酶为纤维素酶活性指标,麸皮、蛋白胨、KH2PO4添加量为影响因子,先采取单因素实验确定3种影响因子的最佳浓度,然后通过相应面法(RSM)优化产酶最佳条件.结果表明,当最大酶活力为12.3 IU/g时所需固体发酵基质中麸皮、蛋白胨及KH2PO4的浓度分别为19.80g/L、2.06g/L、2.90g/L,与优化前培养基相比,纤维素酶产量提高了近3倍.     

绿色木霉产纤维素酶条件优化研究

以绿色木霉菌株No.33为实验材料，采用液体发酵方法，对其产纤维素酶进行了研究，结果表明液体发酵最佳培养条件为：在初始pH5．0的条件下，4环接种量，四层纱布封口，32℃培养120h。     

绿色木霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

针对绿色木霉AS3.3711产生的β-葡萄糖苷酶组分,先后运用包括乙酸铵沉淀、透析、Sephadex G-150葡聚糖凝胶柱层析在内的一系列分离纯化技术对该纤维素酶进行纯化,得到β-葡萄糖苷酶纯化组分,并对该酶的酶学性质进行研究。纯化后酶液的蛋白质量浓度为8.12 mg/mL、酶活力为4.08 U/mL,纯化倍数达到18.48,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定分子质量为66.0 kD。绿色木霉β-葡萄糖苷酶在酸性条件下稳定性良好,最适pH值为5.0;在温度60～70 ℃能长时间保持较高酶活力,最适反应温度为60 ℃。金属离子中,Ca2+、Mg2+、K+对绿色木霉AS3.3711 β-葡萄糖苷酶活力起到促进作用,Ca2+促进作用最强;而Zn2+、Fe3+对该酶有抑制作用,Ag+、Cu2+、Hg2+重金属离子使β-葡萄糖苷酶几乎丧失了全部活性。     

康氏木霉诱变菌株纤维素酶系的分离纯化与酶学特性研究

探讨来源于康氏木霉诱变菌株SG0026 10L发酵罐发酵液中纤维素酶系的分离纯化过程及其酶学性质。采用硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析柱和CM-Sepharose FF阳离子交换层析等分离纯化技术,从康氏木霉诱变菌株发酵液中分离纯化得到3个电泳纯的纤维素酶系组分(内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶)。对纯化的电泳纯内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的酶活进行测定,发现3种酶的比活力分别为4.67±0.06 IU/mg、5.16±0.08 IU/mg和12.52±0.12 IU/mg。采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定其分子量,发现其分子量分别为78.1、91.2和83.1k Da。利用Linewaeaver-Burk法对3种酶的动力学参数进行测定,发现3种酶的Km值分别为3.84、6.62和6.21 mg/m L,Vmax值分别为2.29、1.74和2.19 mg/(min·m L)。在此基础上,对3种酶的反应温度和pH进行了研究,发现3种酶的最适反应温度分别为50、50和55℃,最适反应pH均为5.0。     

绿色木霉WL 0422高产纤维素酶的研究

250 mL三角瓶装8.0 g基料(麸皮稻草粉=4.0 g4.0g),(NH4)3PO42.0%,KH2PO4 0.3%,CaCl2 0.1%,MgSO4·7H2O 0.1%,CMC-Na 3.0%(均相对于基料),料水比11.3～1.4,自然pH;于32℃培养108h,期间翻曲2次,CMC酶活力2 488 IU/g干曲.曲盘发酵的料水比改为11.6,其余组分同锥形瓶优化发酵培养基;于32℃培养96 h,期间翻曲2次,CMC酶活力可达2 215 IU/g干曲.     

绿色木霉JD-1固态发酵玉米芯产纤维素酶条件优化

以玉米芯与麸皮为主要原料,对影响绿色木霉（Trichoderma viride）JD-1固态发酵的因素如玉米芯与麸皮的比例、氮源浓度、发酵温度、时间、料水比等进行研究。在单因素试验的基础上,采取正交试验设计进行优化。结果表明,最佳固体发酵条件为即玉米芯与麸皮质量比为7∶3,培养温度30 ℃,料液比1∶2.0（g∶mL）,培养时间96 h,接种量为10%。在此优化条件下,羧甲基纤维素酶活力达8.95 IU/g,滤纸酶酶活力达2.00 IU/g。     

里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及酶学性质

采用冻干浓缩,硫酸铵盐析,Sephacryl S-200 High Resolution凝胶柱层析,HiTrap Desalting凝胶柱脱盐,HiTrapTMSP(HP)离子柱层析对里氏木霉EIM-30的发酵液进行分离纯化,获得两个纯化的木聚糖酶组分,分别命名为Xylanase A和Xylanase B。纯化倍数分别为3.58和3.29,回收率分别为7.02%和28.29%。SDS-PAGE结果均为单一条带,分子质量分别为29.6 ku和20.9 ku。酶学性质研究结果表明:Xylanase A和Xylanase B的最适反应温度分别为55℃和60℃;温度低于50℃,两种酶的稳定性都很好;最适pH一样,都为5.0;pH稳定范围也一样,都为3.5⁷.0;Mn2+、Tris对Xylanase A有激活作用,Fe2+、Cu2+、SDS则对该酶有抑制作用;Mn2+对Xylanase B有激活作用,Zn2+、Ca2+、Fe2+、Cu2+、Ba2+、Mg2+及SDS则对该酶有抑制作用。     

绿色木霉95106固态发酵生产纤维素酶条件优化研究

以稻草粉与麦麸为主料,对影响绿色木霉固态发酵生产纤维素酶的因素,如秸秆粉和麦麸的用量比、固液比、初始pH值、氮源及其浓度、发酵温度和时间等进行了研究.结果显示,稻草粉:友麸比为15∶5、料水比为1∶5、初始pH值为6.0、以0.25％尿素液为氮源、28℃培养72h的产酶活力最高,滤纸酶活和内切酶活分别比基础发酵条件下增加了1.21倍和0.726倍.该研究结果为高效率、低成本、工业化生产纤维素酶提供科学依据.