玻璃酸二甲基硅烷醇复合物对鼻黏膜上皮细胞的作用研究

目的探讨玻璃酸二甲基硅烷醇复合物(DSHA)的细胞毒性,及其对苯并芘(BAP)引起的兔鼻黏膜上皮细胞损伤的修复作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的DSHA原料药及鼻喷剂对鼻黏膜上皮细胞的细胞毒性,评价其对鼻黏膜上皮细胞增殖的影响;采用BAP刺激离体培养的兔鼻黏膜上皮细胞模拟雾霾对鼻黏膜的损伤,用MTT法检测DSHA对BAP引起的鼻黏膜上皮细胞损伤的保护作用,采用ELISA法检测DSHA对炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)、IL-8表达水平的影响。结果 0.002%～0.05%的DSHA原料和0.001%～0.005%的鼻喷剂处理细胞24 h,细胞存活率均在99%以上,无细胞毒性;此外,DSHA可显著抑制BAP引起的鼻黏膜细胞存活力的下降,并能降低TNF-α、IL-1、IL-8的表达。结论 DSHA对鼻黏膜上皮细胞无细胞毒性且对大气污染物BAP引起的细胞损伤有修复作用。     

醋酸氯已定测定误差因素的分析

文章对醋酸氯已定在非水滴定中高氯酸标准滴定液(溶剂冰乙酸的水分、挥发性、滴定环境温度等因素)、试样醋酸氯己定中水分以及测定过程所使用的器具精度引起的误差进行分析,得出其相对误差。     

卷烟添加木犀草素与黄芩苷混合物对细胞损伤的减害作用研究

将木犀草素、黄芩苷混合物加入卷烟制成样品卷烟,研究其在卷烟烟气中对人肺泡上皮细胞损伤的影响。用不同浓度卷烟烟气提取物(cigarette smoke extract,CSE)刺激人肺泡上皮细胞A549,采用MTT实验检测细胞存活率,彗星实验观察DNA损伤,荧光法测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。结果表明,与对照卷烟比较,样品卷烟组细胞存活率升高,细胞内活性氧(ROS)彗星尾长、尾部DNA含量、尾距、Olive尾距均小于对照卷烟组。因此,添加木犀草素与黄芩苷混合物的特制卷烟烟气对细胞的损伤较少,产生较少ROS,减少一定的DNA损伤,对细胞毒性有一定的减害作用。     

HPLC测定醋酸氯己定碘醇溶液中醋酸氯己定的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定醋酸氯己定碘醇溶液中醋酸氯己定的含量测定方法。方法用C18柱为固定相,以甲醇-水-三乙胺(65:35:0.3,含0.01 mol/L庚烷磺酸钠,用磷酸调节pH 4.0)为流动相,检测波长259 nm。结果醋酸氯己定进样量在0.1035~0.3622μg范围内呈良好的线性关系,r为0.9999(n=6),平均回收率99.8%(n=9)。方法的检测限0.012 94μg,定量限0.025 87μg。结论此法可靠、准确、专属性强。     

没食子酸对酵母细胞氧化损伤保护作用研究

没食子酸（GA）是天然的多酚化合物,是大多数植物中存在的次级代谢产物,具有抗氧化、抗菌、抗炎和抗癌等作用。本文通过测定酵母细胞生长曲线,选取对数期酵母细胞进行毒性实验,采用平板菌落计数法,研究没食子酸对酵母细胞的毒性作用及其对紫外氧化损伤酵母细胞的保护作用。结果发现浓度为50μg·mL-1、100μg·mL-1的没食子酸对酵母细胞具有一定的保护作用。     

干酪乳杆菌SB27降低N-二甲基亚硝胺对大鼠肠黏膜细胞损伤作用研究

本研究选用分离自甘肃牦牛乳,且具有潜在益生功能的干酪乳杆菌SB27(Lactobacillus casei,SB27)进行研究,分析其降低N-二甲基亚硝胺(NDMA)对大鼠肠道黏膜细胞IEC-6毒性作用的能力。研究通过CCK-8实验、HE染色、TUNEL染色和透射电镜等进行全面分析。CCK-8实验结果显示,干酪乳杆菌SB27可改善NDMA致大鼠肠道黏膜细胞IEC-6毒性的影响,且该作用与干酪乳杆菌SB27的剂量有关。HE染色、TUNEL染色和透射电镜实验结果显示,NDMA(80 μg/mL)诱导了IEC-6细胞的损伤,在此过程中干酪乳杆菌SB27(10_⁵ CFU/mL、10_⁶ CFU/mL)可保护IEC-6细胞免受NDMA的毒性损伤。以上实验结果表明,干酪乳杆菌SB27降低NDMA对IEC-6细胞的毒性损伤,为该菌株降低NDMA毒性作用机理研究奠定了基础。     

低聚体葡萄籽原花青素对顺铂损伤HEK293细胞及抗癌活性的影响

目的：探讨低聚体葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidins extract,GSPE）及其结构单元儿茶素（catechin,C）对顺铂（cis-dichlorodiamineplatinum (II),DDP）损伤HEK293人胚肾细胞的保护作用以及对DDP抗A549人肺腺癌细胞活性的影响。方法：体外培养HEK293细胞和A549细胞,以DDP建立损伤模型,分别用不同质量浓度的低聚体GSPE和儿茶素对细胞进行预处理,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞抑制率和存活率。结果：当低聚体GSPE质量浓度为16 mg/L时,对DDP诱导的HEK293细胞损伤的保护作用最佳,与DDP损伤组相比有显著差异（P＜0.05）,并且在达到此质量浓度时可显著增强DDP对A549细胞的损伤效果（P＜0.05）。相同条件下儿茶素对DDP诱导的HEK293细胞损伤无显著影响（P＞0.05）。结论：体外培养条件下,一定质量浓度的低聚体GSPE对DDP诱导的HEK293细胞损伤具有一定的保护作用,同时能增强DDP对A549细胞的杀伤作用。儿茶素对DDP诱导HEK293细胞损伤的保护作用不明显。     

笃斯越橘花色苷提取物对光损伤人视网膜色素上皮细胞的保护作用

目的：通过建立人视网膜色素上皮细胞(hRPE)光损伤模型评价笃斯越橘花色苷对眼睛的保护作用及机理。方法：光损伤设置光强、光照时间、后续培养时间3 个影响因素,以细胞存活率和乳酸脱氢酶活性评价模型建立情况;根据越橘花色苷提取物的干预方式分为预防组、应激组和修复组,每组设高、中、低3 个浓度,检测细胞存活率和血管内皮生长因子(VEGF)水平评价保护效果。结果：选择光照度2500lx,光照24h 后培养24h 作为最佳造模条件,细胞损伤率达20%;预防组和应激组能有效保护细胞活力(P ＜ 0.01),修复组没有效果,各组都能抑制由光损伤诱导hRPE 细胞VEGF 的过表达,但是不同浓度之间抑制能力有差异。结论：hRPE 细胞光损伤程度呈光照强度和光照时间依赖性;越橘花色苷能通过保护hRPE 的细胞活力和VEGF 的过表达,实现保护眼科健康、预防眼科疾病的作用。     

鱼油对顺铂损伤HEK293细胞及A549细胞的影响

目的：探讨鱼油对顺铂（cis-dichlorodiamineplatinum (Ⅱ),CDDP）抗A549人肺腺癌细胞活性的影响及对CDDP损伤HEK293细胞的保护作用。方法：体外培养A549和HEK293细胞,将细胞分为对照组、CDDP组、鱼油组、鱼油+CDDP组;分别用不同浓度的鱼油对细胞进行预处理,同时建立CDDP组、鱼油+CDDP组CDDP损伤模型,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒测定HEK293细胞中丙二醛(MDA)含量,二还原型谷胱甘肽(GSH)含量,超氧化物歧化酶(SOD)的活力等指标。结果：4～16 mg/L浓度的鱼油能够显著抑制CDDP造成的人胚肾HEK293细胞毒性（P<0.05）,其中4 mg/L浓度的鱼油保护效果最佳,且此浓度的鱼油能够显著抑制CDDP(20 mg/L)引起的GSH含量降低以及MDA含量升高（P<0.05）。当鱼油浓度≥32 mg/L时显著增强了CDDP对A549细胞的抑制效果（P<0.05）。结论：一定浓度范围内,鱼油对CDDP致人胚肾细胞HEK293损伤具有一定的保护作用。低浓度鱼油对CDDP所致A549细胞的抑制作用没有...     

HPLC测定双唑泰凝胶中3种活性成分的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定双唑泰凝胶中3种活性成分含量的方法。方法采用辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水-三乙胺(70:30:0.3)(含庚烷磺酸钠10 mmol/L,用磷酸调pH 4.0)为流动相,检测波长260 nm,流速1.0 mL/min。结果甲硝唑、克霉唑与醋酸氯己定分别在101~303,80~240,4.05~12.15μg/mL浓度范围内线性关系良好;甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定平均回收率(n=5)分别为100.2%(RSD=0.69%),100.7%(RSD=0.55%),100.1%(RSD=0.55%)。结论该方法简便、准确、可靠,重复性好,可用于测定双唑泰凝胶中活性成分的含量。     

电子烟烟液体外毒理学评价用细胞筛选研究

  目的  目前, 国内外尚无电子烟制品体外毒理学评价的统一方法, 本研究旨在确定适合于电子烟制品体外毒理学评价用细胞。  方法  以人口腔角质细胞(HOK)、人鼻腔上皮细胞(RPMI 2650)、人支气管上皮细胞(Beas-2b)、人肺成纤维上皮细胞(HPF)、人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)为候选细胞, 采用细胞毒性法和Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试验作为评价方法, 综合细胞的耐受性、细胞增殖特性及试验操作性选取适合于电子烟体外毒理学评价用细胞。  结果  细胞毒性和细胞凋亡试验结果均显示, 不同的受试细胞对相同的样品测试结果定性结果一致, 样品间相对定量趋势一致。候选检测用细胞的细胞倍增时间显示, 在24 h的测试周期内, RPMI 2650细胞和HPF细胞的增殖较快。  结论  综合细胞的耐受性、细胞增殖特性及试验操作性, 建议选取上呼吸道细胞RPMI 2650和下呼吸道细胞HPF为电子烟体外毒理学测试用细胞。      

叶黄素对人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:外源性给予过氧化氢(H_2O_2)诱导构建人视网膜色素上皮细胞(Retinal pigment epithelial,RPE)细胞氧化损伤模型,探究H_2O_2的最佳建模浓度,并探讨叶黄素对H_2O_2诱导人RPE细胞氧化损伤的保护作用。方法:本研究以人RPE细胞为实验对象。不同浓度H_2O_2(0、50、100、200、400、600μmol/L)处理RPE细胞1 h后,观察细胞形态的改变,并测定细胞生存率和细胞内ROS浓度进而确定H_2O_2的最佳建模浓度。不同剂量叶黄素(1、2.5、5、7.5、10μg/m L)预处理RPE细胞24h,随后给予100μmol/L H_2O_2作用1h,测定各组细胞生存率和细胞内活性氧(ROS)浓度,从而评价叶黄素对RPE细胞氧化损伤的作用。结果:H_2O_2作用后,随H_2O_2浓度的增加,RPE细胞生存率逐步下降;细胞内ROS浓度随H_2O_2的浓度增加而显著升高。与损伤对照组相比,各叶黄素处理组RPE细胞生存率显著升高,同时细胞内ROS浓度显著下降。结论:H_2O_2可导致RPE细胞出现氧化应激损伤,细胞ROS含量显著增加。叶黄素干预后可显著减缓H_2O_2诱导的氧化应激反应,提示其可通过提高RPE细胞的生存率、抑制细胞内ROS浓度,保护RPE细胞免受氧化损伤,从而对年龄相关性黄斑变性等眼部退行性疾病起到预防和减缓作用。     

茶多酚二甲基亚砜合剂对卷烟烟气遗传毒性的防护作用

目的 研究卷烟烟气所致人支气管上皮细胞DNA损伤以及茶多酚二甲基亚砜合剂的保护作用, 为卷烟烟气对机体损伤的防护提供理论及实验依据。方法 将细胞分为5组: 空白组、卷烟烟气组、茶多酚保护组、二甲基亚砜保护组、茶多酚二甲基亚砜合剂保护组; 通过检测微核和多核细胞观察染色体损伤, 彗星实验及H2AX蛋白磷酸化检测DNA的损伤, 多核细胞法检测细胞HPRT突变。结果 BEAS-2B细胞经卷烟烟气染毒后, 细胞的微核率、多核率、拖尾率升高, H2AX蛋白磷酸化表达增高, HPRT突变率增高, 差异均有统计学意义(P<0.05), 茶多酚保护组、二甲基亚砜保护组能降低卷烟烟气诱发的DNA损伤, 合剂保护组的防护作用最好。结论 卷烟烟气对BEAS-2B细胞DNA具有损伤作用, 茶多酚二甲基亚砜合剂有较强防护作用。      

山药多糖对丙烯酰胺诱导的巨噬细胞氧化损伤的保护作用

该文研究山药多糖对丙烯酰胺(acrylamide, AM)诱导的巨噬细胞氧化损伤的保护作用。以AM诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7)损伤,山药多糖进行保护,检测山药多糖对细胞增殖、吞噬活力以及氧化应激的影响;并构建生物大分子(蛋白、脂类、DNA)氧化损伤模型,评价山药多糖对生物大分子的保护作用。结果表明,与正常对照组相比,不同质量浓度的山药多糖对细胞增殖影响无显著性差异。与诱导组(AM)相比,不同浓度的山药多糖能显著促进细胞生长和提高细胞吞噬活力。山药多糖预处理能有效抑制细胞活性氧产生,减少丙二醛累积,提高细胞超氧化物歧化酶活性。此外,山药多糖对生物大分子也具有良好的保护作用。山药多糖可以通过提高细胞抗氧化能力,抑制细胞的氧化应激,抑制生物大分子氧化损伤,从而有效保护丙烯酰胺诱导的巨噬细胞氧化损伤。该研究为控制丙烯酰胺毒性及山药多糖的开发利用提供理论依据。     

丝素蛋白β-折叠含量影响细胞生长的研究

分析在乙醇处理前后丝素蛋白(SF)与丝素肽(SFP)二级结构含量变化,及对细胞生长的影响。采用醇溶法提取制备SF,由中性蛋白酶酶解得SFP,40%乙醇分别处理SF与SFP,得ET-SF、ET-SFP。将SF、SFP、ET-SF、ET-SFP分别采用过滤除菌处理后再分别在1 mg/mL、0.5 mg/mL浓度条件下,检测其对人肝癌细胞(HepG2)、人宫颈癌上皮细胞(Caski)的生长影响,利用相对增值率评价其毒性,圆二色谱法检测二级结构含量。结果表明:乙醇处理前后SF为非浓度依赖型,对细胞生长均有促进作用且趋势相同;乙醇处理前后SFP为浓度依赖型,对细胞均有抑制作用,当β-折叠含量增加,SFP对细胞毒性作用增加。     

黑灵芝多糖对丙烯酰胺诱导小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究黑灵芝多糖对丙烯酰胺（acrylamide,AA）所致的小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：构建AA诱导小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）-6氧化损伤型,采用噻唑蓝比色法检测黑灵芝多糖对IEC-6氧化损伤的保护作用;同时测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量,以及测定细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平。结果：与正常对照组相比,不同质量浓度的黑灵芝多糖对细胞增殖影响无显著性差异。与模型（AA）组相比,不同质量浓度的黑灵芝多糖溶液能够明显减轻AA对细胞的毒害作用,提高细胞生存率,降低细胞培养液中LDH的释放;降低MDA含量,提高细胞SOD和GSH-Px活性。结论：黑灵芝多糖可以通过提高细胞内抗氧化酶系的活性和抗氧化物质GSH-Px活性从而有效地减弱AA诱导的小肠上皮细胞氧化损伤。     

谷糠多酚对酒精性胃黏膜损伤的保护作用

目的：初步阐明谷糠多酚对酒精性胃黏膜损伤的保护作用以及具体分子机制,为谷糠多酚在饮酒人群胃黏膜损伤营养干预方面的应用提供科学依据。方法：雄性Wistar大鼠连续3 周每天灌胃50 mg/kg mb谷糠多酚,干预结束后通过灌胃体积分数75%乙醇溶液建立急性酒精性胃黏膜损伤模型;利用不同剂量（1～15 μg/mL）谷糠多酚对人胃黏膜上皮细胞（GES-1）处理24 h,继而通过1 000 mmol/L酒精继续作用12 h建立酒精性GES-1细胞损伤及干预模型;通过解剖观察大鼠胃组织形态学及病理结构,评价谷糠多酚对大鼠胃黏膜组织的保护作用;结合细胞形态变化及存活情况评价谷糠多酚对GES-1细胞的保护作用;通过测定氧化应激和细胞凋亡相关指标,评价谷糠多酚对急性酒精性胃黏膜损伤大鼠及GES-1细胞的抗氧化和抑制凋亡能力的影响。结果：谷糠多酚可以有效预防酒精引起的大鼠胃黏膜及GES-1细胞损伤,极显著缓解酒精引起的GES-1细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平升高（P＜0.01）;同时极显著缓解大鼠胃黏膜组织和GES-1细胞中丙二醛（methane dicarboxylic aldehyde,MDA）水平升高（P＜0.01）,提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力,明显抑制酒精引起的细胞凋亡。结论：谷糠多酚能够通过缓解酒精引起的胃黏膜上皮细胞氧化损伤从而保护胃黏膜。     

自主研发复合低聚肽对乙醇损伤的GES-1细胞修复作用的研究

目的:探讨实验室自主研发复合低聚肽对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞(GES-1)的修复作用。用4%的乙醇诱导人胃黏膜上皮细胞(GES-1)3 h建立胃黏膜损伤模型。方法:将细胞分为空白组,模型组,阳性对照组(奥美拉唑),复合低聚肽的低、中、高剂量组,小麦低聚肽组,考察各组分对乙醇损伤的GES-1细胞的治疗作用。结果:复合低聚肽粉对损伤细胞的增殖、抗氧化、ADH酶活力均有增强效果,并呈现浓度依赖性,高剂量组的效果最好。其促进细胞增殖,降低细胞内氧化应激水平、增强ADH酶活力的能力强于小麦低聚肽的单独作用。因此,实验室自主研发复合低聚肽粉具有一定的治疗胃黏膜损伤的作用。     

茶多酚对染镍细胞脂质过氧化及DNA损伤的影响

采用体外细胞培养方法,观察茶多酚对染镍(Ni2O3,5mg/L)大鼠肺泡巨噬细胞膜脂质过氧化产物丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。并用单细胞凝胶电泳技术(Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE)检测三氧化二镍对人肺成纤维细胞(HLF)的DNA损伤作用以及茶多酚的保护作用。结果显示在体外染镍大鼠肺泡巨噬细胞培养过程中加入不同浓度茶多酚(125,250和500mg/L)可提高肺泡巨噬细胞内SOD活性,且能显著抑制MDA生成量。镍处理的HLF细胞DNA损伤程度高于正常对照组(p<0.01);而Ni2O3+ 茶多酚(TP,250mg/L)处理组DNA损伤程度低于Ni组(p<0.01)。镍可增加细胞脂质过氧化,茶多酚具有拮抗镍导致细胞毒性的作用,可能与其抗氧化功能有关。茶多酚还可以拮抗镍诱导的人肺成纤维细胞DNA的损伤。     

副干酪乳杆菌X12抑制N-二甲基亚硝胺诱导IEC-6细胞损伤作用研究

目的 探究副干酪乳杆菌X12(Lactobacillus.paracaseisubsp.paracaseiX12)抑制N-二甲基亚硝胺(N-nltrosodimethylamine,NDMA)诱导IEC-6细胞(大鼠肠道黏膜细胞)毒性损伤作用。方法 通过胃液、肠液耐受性实验、扫描电镜法分析副干酪乳杆菌X12益生功能和菌株的形态;通过CCK-8实验对副干酪乳杆菌X12抑制NDMA诱导IEC-6细胞毒性作用进行分析。结果 胃肠道耐受性实验显示,副干酪乳杆菌X12可耐受胃肠液的消化,但对胆盐的耐受性略差;扫描电镜下副干酪乳杆菌X12菌体呈短而圆的杆状结构,无鞭毛;CCK-8实验结果显示,在MRS培养基中NDMA (0～80μg/mL)对副干酪乳杆菌X12的生长无显著影响(P>0.05);副干酪乳杆菌X12可抑制NDMA致大鼠肠道黏膜细胞IEC-6毒性的作用,且该作用与副干酪乳杆菌X12的剂量有关。结论 副干酪乳杆菌X12可抑制NDMA诱发的IEC-6细胞毒性损伤。