GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究.结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉 5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28 ℃;酶反应的最适条件为25 ℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL.     

不同温度下GS0202菌产酶差异的研究

利用电泳法及DEAE-Cellulose DE-52离子交换柱层析法对Arthrobacter chloropHenolicusGS0202菌分别在20和60℃下培养时产两种不同的酶进行研究。结果表明,20℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷F2,60℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3;找到了4条差异蛋白带,它们的分子质量分别约为66、47、35、22 ku;将60℃下培养得到的酶分离提纯,其纯酶的分子质量经电泳鉴定约为66 ku,与1号差异带的分子质量吻合。     

不同温度下GS0202菌产酶差异的研究

利用电泳法及DEAE-Cellulose DE-52离子交换柱层析法对Arthrobacter chloropHenolicusGS0202菌分别在20和60℃下培养时产两种不同的酶进行研究。结果表明,20℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷F2,60℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3;找到了4条差异蛋白带,它们的分子质量分别约为66、47、35、22 ku;将60℃下培养得到的酶分离提纯,其纯酶的分子质量经电泳鉴定约为66 ku,与1号差异带的分子质量吻合。     

从一种新筛选的菌中找出人参皂苷酶

从新筛选的AbsidaspF7菌中找出了人参皂苷酶。该皂苷酶能水解人参皂苷Rb1C 20位末端的一个β 葡萄糖基生成人参皂苷Rd的β 葡萄糖苷酶。酶的最佳反应条件:时间,4h;底物浓度,5mg/mL;温度,40℃;pH,5.0。     

微生物转化人参皂苷Rb1为Rg3的研究

利用18种菌株对人参皂苷Rb1进行生物转化研究,发现一种绿毛状GY-06菌使人参皂苷Rb1有效地转化为Rg3．经形态学和内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）基因序列分析,确定其为一种扩展青霉（Penicillium expansum）．     

从一种新筛选的菌中找出人参皂苷酶

从新筛选的Absida sp F7菌中找出了人参皂苷酶。该皂苷酶能水解人参皂苷Rb1 C-20位末端的一个β-葡萄糖基生成人参皂苷Rd的β-葡萄糖苷酶。酶的最佳反应条件：时间，4h；底物浓度，5mg/mL；温度，40℃；pH，5．0。     

人参皂苷葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及包涵体的变复性

将人参皂苷葡萄糖苷酶的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。对该基因进行诱导表达,并对包涵体进行变性和复性。结果显示,经终浓度为0.5mmol/L IPTG在30℃下诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析,目的蛋白主要以包涵体形式存在并确定其分子质量约为75ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。包涵体经过变性和稀释复性后,经TLC活性检测,能够水解底物Rb1,表明具有人参皂苷葡萄糖苷酶的活性。     

G8r菌产人参皂苷糖苷酶的酶性质及酶水解作用

对由Absidia sp.G8r菌产的人参皂苷糖苷酶(Glc8)进行了分离纯化,并对其酶性质和酶水解作用进行了研究.结果表明,该酶的分子质量约为72 ku,酶反应的最适温度和pH分别为30 ℃和5.0,在20～60 ℃、pH 3.0～7.0条件下稳定性较好.该酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷C-K,水解过程是分步进行的...     

从三七茎叶皂苷中分离纯化人参皂苷C-Mx1和Rb3

利用两步硅胶柱层析法,从三七茎叶皂苷中分离纯化人参皂苷Rb3和C-Mx1单体。30g三七茎叶皂苷,经分离得到纯度为50%~60%的粗品C-Mx1 4.66g和Rb3 8.58g;将C-Mx1和Rb3粗品皂苷进行二次硅胶柱分离,得到纯度为95%的C-Mx1单体0.92g和Rb3单体3.1g。以核磁共振法证明了分离产物为C-Mx1和Rb3皂苷。     

真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取

根据已知的人参皂苷糖苷酶(GluGF)的N端氨基酸序列设计简并引物,从Absidia Sp.R84g菌株的总RNA出发,应用RACE技术,快速扩增测序得到cDNA3′末端与cDNA5′末端的未知序列,利用扩增测序所得到的cDNA5′末端和cDNA3′末端的序列设计引物,进行二次RT-PCR扩增并测序得到GluGF基因的...     

高产人参皂甙β—葡萄糖苷酶菌种的筛选

选取８种菌,筛选了能水解人参皂甙β－葡萄糖苷键的β－葡萄糖苷酶的高产菌株,研究了酶法改变人参皂甙糖基、以去掉人参皂甙Ｒｇ３上的一个葡萄糖基变成高抗癌Ｒｈ２皂甙的可能性,结果,８种菌所产的酶,均有纤维素外切酶的对硝基七酚基－β－葡萄糖苷（ｐＮＰＧ）酶活力,但其中２种菌所产的酶不具有水解人参皂甙－β－葡萄糖键的酶活,只有３种菌所产的酶水解人参皂甙－β－葡萄糖键的酶活高,证明了纤维素外切酶和人参皂甙－β     

真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取

根据已知的人参皂苷糖苷酶(GluGF)的N端氨基酸序列设计简并引物,从Absidia Sp.R84g菌株的总RNA出发,应用RACE技术,快速扩增测序得到cDNA3′末端与cDNA5′末端的未知序列,利用扩增测序所得到的cDNA5′末端和cDNA3′末端的序列设计引物,进行二次RT-PCR扩增并测序得到GluGF基因的全序列。回收PCR产物测序,得到GluGF基因的序列全长为2149 bp,其中5′UTR长度为82 bp,3′UTR长度为114 bp,GluGF的CDS区序列全长为1 923 bp,所编码的氨基酸序列的长度为640个氨基酸。     

高温厌氧菌产纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的活性

高温厌氧菌Clostridiumthermocopriaesp.nov.JT3 3具有较高的纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶活性。实验研究表明,纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶均为胞外酶,相对分子质量分别为52000和48000。纤维素内切酶的最适反应温度是80℃,β葡萄糖苷酶的最适反应温度是40℃,两者的最适pH为6.5。低浓度的Ca2+和Mg2+对纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶的酶活力没有影响,高浓度的Ca2+和Mg2+对纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶的酶活力有较弱的抑制作用,Hg2+对纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶的酶活力都有很强的抑制作用。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆

利用依据黑曲霉β葡萄糖苷酶(bgl1)基因序列设计合成的一对特异性引物,以黑曲霉As3.350总DNA为模板,PCR扩增得到了预期大小的目的DNA片段,将该目的DNA片段转入大肠杆菌中并进行了序列测定。测序结果表明该DNA片段大小为2 948 bp,其核苷酸与β葡萄糖苷酶基因序列同源性达91%,该基因由7个外显子和6个内含子组成.     

人参总皂苷的发酵及其产物的抗癌活性研究

从土壤中分离得到14种β-葡萄糖苷酶高产菌株,其中菌株YS2能够有效地将人参茎叶总皂苷和人参提取物中的人参皂苷转化为稀有人参皂苷Rg3;菌株YS2和YS7的人参发酵物对结肠癌colon26-M3.1细胞具有较强的抑制作用,其IC50值分别为180μg/mL和170μg/mL.根据ITS序列构建的系统发育树,确定菌株YS2为链格孢属(Alternaria).     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

黑曲霉As．n.XEC-1液体发酵产β-葡萄糖苷酶条件及酶学性质研究

实验分离得到一株具有较高胞外分泌β-葡萄糖苷酶能力的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株As．n．XEC-1,并对其液体发酵产伊葡萄糖苷酶的条件及酶学性质进行了研究．结果表明,发酵温度32℃,发酵周期7d,摇床震荡频率200r／min,装液量500mL的三角瓶中装量为60mL,接种量8％,伊葡萄糖苷酶的活性最高．经过发酵条件优化后酶活由原来的130u／mL提高到192u／mL．β-葡萄糖苷酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH值为4．6,在45℃以下时酶稳定性较好,在pH3．0～6．0之间较稳定．     

β—葡萄糖苷酶产生菌的选育

对β－葡萄糖苷活力为０．４９７μｍｏｌ／（ｓ．ｇ）的无花果曲霉１０１菌株进行Ｃｏ＾６０及ＵＶ和ＮＴＧ诱变，得到一株产酶提高１．７２倍的Ｌ２菌株；     

海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究.结果表明,最佳提取条件为:pH6.0的磷酸盐浸提液0.05 mol/L,NaCl浓度为0.05 mol/L,缓冲液体积与海参肠质量之比为4∶1,硫酸铵饱和度为80%;该酶最适反应条件为:温度40℃,pH6.0;该酶在10~40℃,pH5.0~6.5酶活力稳定.Mn2+对酶具有一定的激活作用,Cu2+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+、Ba2+、K+、Ag+对酶存在不同程度的抑制,其中Cu2+对酶的抑制作用最强.