假单胞菌H3壳聚糖酶的固定化研究

分别采用纳米CaCO3吸附法、聚丙烯酰胺(PAG)包埋交联法和DEAE-22纤维素交联法固定化假单胞菌H3壳聚糖酶,结果表明:以DEAE-22纤维素为载体、戊二醛为交联剂的固定化方法较优,酶活保留率达91.4%;此外,还确定了DEAE-22纤维素交联法的固定化条件为:DEAE-22纤维素载体0.5 g,3.5%戊二醛交联剂20 mL,给酶量为15 mg,固定化温度为4℃,固定化时间为12h;壳聚糖酶在经固定化后,最适温度为50℃,最适pH为4.5,并表现出比游离酶更高的热稳定性,固定化酶的米氏常数Km值为14.29 g/L;将该固定化酶重复使用12次,固定化酶的活力降低到75%,具有较好的操作稳定性.     

海藻酸钠、卡拉胶联合固定化α-淀粉酶特性研究

以海藻酸钠、卡拉胶共混包埋制备固定化α-淀粉酶,并对α-淀粉酶固定化条件和固定化酶性能进行了探讨。研究表明:在海藻酸钠浓度3.0%、卡拉胶浓度1.0%、酶浓度18g/L、氯化钙浓度0.8%条件下,可以获得最佳的固定化效果,固定化酶活力为139.66U/g.min,活力回收率为55.70%;与游离酶相比,制备固定化酶的最适酶促反应pH值由7.0降至6.0,最适酶促反应温度由60℃升至70℃,其作用温度范围、pH值范围均比游离酶范围宽;固定化酶在连续操作5次后仍显示出良好的活性,固定化酶的耐热性也显著提高。     

糖化酶As3.4309的固定化方法研究

用蟹壳、明胶和卡拉胶做载体,采用交联法和包埋法对糖化酶As3.4309进行固定化。以淀粉溶液做底物,在相同条件下,对各种固定化糖化酶进行活力测定。实验结果表明:用卡拉胶包埋的固定化糖化酶保留了最高、的酶活力;而酶活力半衰期最长的是用蟹壳与戌二醛交联的方法制得的固定化糖化酶,对所获得的结果进行了分析,从而为固定化酶的进一步研究提供了方法上的依据。     

腈水合酶耐底物突变株的筛选及产酶条件优化

采用紫外诱变和梯度平板法筛选出耐底物的突变株,通过单因素实验考察发酵液起始pH值、装液量、发酵周期、接种量对产酶的影响,确定最佳的发酵条件;采用均匀设计实验优化发酵培养基。筛选出．株能耐受4％丙烯腈的腈水合酶产生菌,在最佳产酶条件下,耐底物突变株的腈水合酶酶活达到11．5MU／mL,与优化前相比,酶活提高了49．35％。腈水合酶耐底物突变株的最佳发酵条件为：初始pH7．0、装液量16％、发酵周期58h、接种量10％。最佳发酵培养基配方为：ρ（葡萄糖）=26g／L,ρ（酵母膏）=2g／L,ρ（尿素）=4g／L,ρ（谷氨酸钠）=0．5g／L,ρ（K2HP04）=0．2g／L,ρ（KH2P04）=0．2g,／L,ρ（MgS04）=0．05g／L,φ（DXL）=0．5mL／L。     

固定化胰蛋白酶及其用于制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)的实验研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂进行胰蛋白酶的固定化实验。实验条件：壳聚糖0．2g，交联剂浓度9％，交联温度30℃，交联时间2h，加酶量0．8mg，pH值8．0，固定化时间1h，固定化温度4℃。实验结果表明：固定化胰蛋白酶的最适温度为55℃，比溶液酶提高了15℃，活力回收率为50．8％。此外进行了利用固定化胰蛋白酶制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)的实验，测定了其持钙能力，发现CPPs浓度为0．5g／L和0．2g／L时能完全阻止磷酸钙沉淀生成，浓度为0．1g／L时能使磷酸钙沉淀生成推迟20min，浓度为0．06g／L和0．04g／L时能使磷酸钙沉淀生成推迟10min。     

活性炭粒度与吸附条件对脂肪酶固定化的影响

以活性炭为载体固定化脂肪酶,研究了活性炭粒度和吸附条件对脂肪酶固定化的影响。结果表明,随着活性炭粒度减小,其吸附酶量和固定化酶活力增大,但吸附酶量过大会导致酶分子相互凝结,降低固定化酶的催化活性。当酶液质量浓度在0.01~0.05 mg/mL时,提高酶液质量浓度可以提高载体吸附酶量和固定化酶活力。酶液pH和温度仅对固定化酶活力有影响,而对载体吸附酶量无影响。在pH 7.0、30℃和150 r/min振荡条件下,采用40目活性炭吸附0.05 mg/mL酶液1 h,制得的固定化脂肪酶活力达65 U/g。     

活性炭粒度与吸附条件对脂肪酶固定化的影响

以活性炭为载体固定化脂肪酶,研究了活性炭粒度和吸附条件对脂肪酶固定化的影响。结果表明,随着活性炭粒度减小,其吸附酶量和固定化酶活力增大,但吸附酶量过大会导致酶分子相互凝结,降低固定化酶的催化活性。当酶液质量浓度在0.01~0.05 mg/mL时,提高酶液质量浓度可以提高载体吸附酶量和固定化酶活力。酶液pH和温度仅对固定化酶活力有影响,而对载体吸附酶量无影响。在pH 7.0、30℃和150 r/min振荡条件下,采用40目活性炭吸附0.05 mg/mL酶液1 h,制得的固定化脂肪酶活力达65 U/g。     

胆固醇酯酶的固定化及其性能的研究

1 ABSE—交联琼脂经重氮化后,在冰浴中偶联胆固醇酯酶的条件确定为:最适PH取8.0,加酶量取170酶单位/克湿载体、偶联时间取3小时,刚制备的固定化酶必须用(?)-萘酚封闭以增加稳定性,固定化酶活力为84酶单位/克湿固定化酶,活力回收为49％。 2 固定化酶性能为:最佳催化反应温度为35     

胆固醇酯酶的固定化及其性能的研究

1 ABSE-交联琼脂经重氮化后，在冰浴中偶联胆固醇酯酶的条件确定为：最适PH取8.0，加酶量取170酶单位/克湿载体、偶联时间取3小时，刚制备的固定化酶必须用∝-萘酚封闭以增加稳定性，固定化酶活力为84酶单位/克湿固定化酶，活力回收为49%。2 固定化酶性能为：最佳催化反应温度为35℃，最佳PH为7.8；具有良好的热稳定性和PH稳定性；在4℃保存期可达6个月以上，重复使用4个月仍可保留90%以上活性。3 用固定化酶检测胆固醇酯，当酯的浓度在7.2-300mg/dl范围内，500nm处的吸光度变化值与酯浓度呈线性关系。     

离子交换纤维纯化银杏叶黄酮影响因素的正交法研究

采用正交法考察了各因素对浸取纯化黄酮工艺的影响,确立了离子交换纤维纯化黄酮的最佳工艺．获得浸取银杏叶黄酮的最佳条件：以pH值为8的70％的乙醇溶液,在75℃浸提3．5h;强碱阴离子交换纤维吸附黄酮的最佳条件：上柱药液的pH=4,药液流速0．38mL／min,药液质量浓度0．5289mg／mL,固液比1：200;吸附在强碱阴离子交换纤维上的黄酮动态解吸的最佳条件：HCL浓度2mol／L,流速0．5mL／min,解吸剂是体积分数为60％的乙醇,体积60mL．实验结果表明用强碱性阴离子交换纤维提纯黄酮方法可行．     

仿生合成SiO2载体及其固定脂肪酶的条件研究

采用L-脯氨酸为模板,仿生制备用于固定脂肪酶的二氧化硅载体．SEM、IR表征得知,制备的仿生载体为粒径约3um的SiO2微球,氮气吸附表征得知,SiO2微球内部孔径大小约16．8nm．载体固定脂肪酶的实验结果表明,固定化脂肪酶的相对最佳条件：酶液质量浓度5mg／mL,反应温度40℃,反应时间7h,pH=8,最高固载率可达82．3％,酶活1067U／g载体．     

响应面分析法优化肠杆菌的发酵条件生产壳聚糖酶

利用筛选的肠杆菌发酵生产壳聚糖酶,对培养温度、pH和接种量进行优化,确立中心位点后进行响应面设计分析,确定最优发酵培养条件。结果表明：最佳培养工艺条件为培养温度31．74℃、pH6．5和接种量为7．26％（V/V）,培养36h时壳聚糖酶活性达到13．59U／mL,实际值与预测值之间的误差约为0．43％。壳聚糖酶的生产方式为延续合成型,具有深入优化并规模生产的潜力。     

海藻酸钠固定化胰蛋白酶的研究

研究了以海藻酸钠为载体固定化胰蛋白酶的条件,并考察了固定化酶的最适pH、最适温度、储存时间及反复利用稳定性。结果表明:最适固定化条件为CaC12质量分数为3.0%,海藻酸钠质量分数为3.0%,酶液量与海藻酸钠体积比为1∶2,固定化时间为3.0 h;固定化胰蛋白酶最适pH为9.0,最适温度为60℃,较游离酶分别提高1.0和10℃;4℃下保存30 d,活性保留96%以上;连续反应6次,活性保留52%。     

壳聚糖酶的分离纯化及其特性研究

通过硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25凝胶过滤层析、DEAE Cellulose 52离子交换层析,将曲霉TCCC45017产的壳聚糖酶进行纯化,纯化倍数为57.21,回收率为26.55%,比活力提高至587.55 U/mg.经过SDS-PAGE电泳测得其分子质量为3.75×104 u.该酶作用的最适温度为55℃,最适pH为5.5,50℃以下保温1 h内酶的热稳定性较好,pH稳定范围为5.5～7.0,添加金属离子Mg2＋、Ca2＋、Ba2＋、Mn2＋对该酶有激活作用,Cu2＋、Fe2＋、Zn2＋、Al3＋则对酶有抑制作用.     

茯苓菌核多糖分离技术研究

采用单因素试验、正交试验对热水浸提法、微波法、酶法分离茯苓菌核多糖的工艺进行探讨.结果表明：热水浸提法的最佳工艺条件为：料水比1：30（g/mL）,浸提温度70℃,浸提时间2 h,浸提2次;微波法最佳提取工艺条件为：料水比1：30（g/mL）,功率296 W,时间4 min;酶法最佳提取工艺条件为：木瓜蛋白酶0.5%,初始pH 6,温度60℃,时间2 h.酶法的多糖提取率最高.采用集成提取工艺的茯苓多糖提取率大幅度提高,酶法与微波组合法的多糖提取率最高.考虑到多糖得率、提取时间、提取成本等因素的影响,最优的集成提取方式为酶法与微波组合法.     

固定化Gordonia sp.WQ-01A菌株的制备及其脱硫性能

对能够专一脱除二苯并噻吩(DBT)中硫元素的Gordonia sp. WQ-01A菌株进行固定化,研究其脱硫性能,考察了最佳固定化条件,对比了水相中固定化细胞和静息细胞的脱硫性能。结果表明,最佳固定条件组合为海藻酸钠质量分数4%,菌体湿重与载体溶液体积比1∶20,氯化钙质量分数3%,4℃充分交联。固定化细胞脱硫率可达97.6%,比静息细胞的脱硫率提高44个百分点,且重复使用性能和使用寿命大大高于静息细胞。此外,在发酵罐中,固定化细胞在模拟油水两相中具有良好的脱硫效果。     

产低温碱性脂肪酶菌株Acinetobacter johnsonii LP28的鉴定及发酵条件优化

从实验室保藏的49株碱性脂肪酶产生菌中筛选出产低温碱性脂肪酶菌株LP28,初步酶学性质研究表明,该脂肪酶的最适作用温度为30℃,最适作用pH为9．0,粗酶液在室温条件下处理48h仍具有93．78％的残余酶活．该菌经16SrDNA鉴定为约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）,同源性为99％．摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为（g/L）：淀粉10,牛肉膏20,K2HPO41,PvA-大豆油20．最高酶活为3．06U／mL．     

不同载体固定化产脂肪酶发酵性丝孢酵母的比较

选择活性炭、硅胶G、大孔树脂DM-130为载体,采用吸附培养的方法将发酵性丝孢酵母细胞固定化,确定了固定化的适宜条件。通过比较适宜条件下固定化细胞的脂肪酶活力,筛选出固定化效果较好的吸附载体为活性炭。结果表明,在培养基中添加10g/L 40目活性炭,接入体积分数为10%的液体种子,于30℃、160r/min吸附培养48h的固定化效果较好,获得的固定化酶活力可达110.32U/g。     

Alcalase水解泥鳅蛋白制备降压肽工艺研究

以泥鳅肉水解产物对血管紧张素转化酶（ACE）的抑制率、水解度（DH）以及水解产物的肽含量为指标,从碱性蛋白酶、碱性内切酶（Alcalase）、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶5种酶中筛选出碱性内切酶作为酶解泥鳅蛋白制备降血压肽的最适水解酶。在单因素试验基础上,采用响应面实验对该酶的酶解条件进行优化,得出最佳水解条件为：时间60min,pH 8.1,温度45℃,酶底物比（E/S）1 900U/g,固液比1∶15。在该条件下水解,得到酶解物的ACE半抑制质量浓度IC50值为0.22mg/mL。 更多还原