蛋白酶法提取乌骨鸡黑色素的研究

选用江西泰和乌骨鸡为研究对象，采用酶法水解蛋白质分离乌鸡黑色素。结果表明：酸性蛋白酶为最优水解酶，加酶量3．8％、肉水比1：2，其最佳酶解条件pH2．8、酶解温度34．8℃、酶解时间20h。与盐酸法相比，酶法黑色素的得率高于盐酸法。     

乌骨鸡黑色素的酶法提取及其抗氧化作用的初步研究

以江西泰和乌骨鸡为研究对象,研究酶法水解乌鸡蛋白质分离黑色素的最佳工艺条件,并对黑色素清除DPPH自由基,以及黑色素延缓油脂酸败的能力进行了研究。结果表明:(1)酸性蛋白酶为最优水解酶,其加酶量3.8%、固液比1∶2;其最佳酶解条件pH2.8、酶解温度34.8℃、酶解时间20 h。(2)乌鸡黑色素能抑制DPPH.自由基,抑制率随黑色素浓度增加而提高。(3)黑色素能延缓油脂酸败,在70℃时添加浓度为0.1 mg/mL的黑色素于油脂中,60 h时酸价为0.3028 mg KOH/g,而对照(不加黑色素)的酸价在第32 h即升到0.3130 mg KOH/g。     

乌骨鸡黑色素及其降解产物的红外光谱结构解析

采用氨水-过氧化氢法和碳酸钾-过氧化氢法对乌骨鸡黑色素进行降解,并通过傅里叶红外光谱法对乌骨鸡黑色素及其降解产物可溶性部位的红外光谱学性质进行研究。结果显示：乌骨鸡黑色素降解产物可溶性部位与乌骨鸡黑色素在红外图谱上有较多相似之处,在3600～3100cm-1、2950～2850cm-1、1680～1630cm-1、1570～1515cm-1、1240～1200cm-1均有不同强度的吸收峰,特别是在1650cm-1附近均出现乌骨鸡黑色素的特征强吸收峰,推测经过氧化氢降解反应获得的乌骨鸡黑色素降解产物可溶性部位中含有乌骨鸡黑色素骨架结构片段,酰胺基团和环状烯烃可能是构成乌骨鸡黑色素骨架结构的主要基团。     

乌骨鸡黑色素的提取分离及抗氧化活性研究

采用双酶水解法提取乌骨鸡黑色素,研究碱液脱除蛋白,分离乌骨鸡黑色素的工艺条件。以腹腔注射D-半乳糖法建立小鼠氧化损伤模型,灌胃给予不同剂量乌骨鸡黑色素(500、250、100mg/kg bw),观察其抗氧化活性。结果表明：碱液脱除蛋白分离乌骨鸡黑色素的最佳工艺条件为NaOH 溶液(pH10),温度60℃,时间1.5h,料液比1:10,提取4 次。与模型组比较,乌骨鸡黑色素组小鼠血和肝脏中GSH-Px 活力显著升高,MDA 水平显著降低。乌骨鸡黑色素具有较强的体内抗氧化作用。     

乌骨鸡黑色素氧化降解产物成分初探

采用蛋白酶/盐酸法分离获得乌骨鸡黑色素,并对其进行透射电镜观察,以NaOH-H2O2氧化法对其进行降解,用乙醚萃取降解产物,对萃取物进行傅里叶红外光谱、GC/MS分析。结果显示,蛋白酶/盐酸法提取的乌骨鸡黑色素呈游离的椭球形、无明显附着物;傅里叶红外光谱在2960～2850cm-1、1470～1370cm-1范围内有强吸收峰,提示降解产物中可能存有烷基基团;通过GC/MS分析发现,乌骨鸡黑色素乙醚萃取物中不含烷烃,乌骨鸡黑色素降解产物中存在C16～C32一系列不同碳链长度烷烃,且烷烃含量随着降解时间的延长而增加,这表明烷烃是在降解过程中逐渐产生的,推测乌骨鸡黑色素结构中可能存有不同链长的脂肪族结构。      

黑羽乌骨鸡毛中黑色素提取工艺

以黑羽乌骨鸡毛为原料,采用盐酸水解法从乌骨鸡毛中提取黑色素并对黑色素的含量进行测定。通过单因素实验考察了提取时间、盐酸浓度、料液比对乌骨鸡毛中黑色素得率的影响,在单因素实验基础上通过响应面实验分析法得到二次多项式回归方程的预测模型。结果表明:乌骨鸡毛中黑色素提取的最佳工艺条件为,HCl浓度27%,提取时间6h,料液比(g∶mL)1∶2,在此条件下黑色素得率达4.72%。黑色素样品经过氧化氢法氧化处理,采用高效液相色谱法测出黑色素含量为76.20%。     

乌骨鸡黑色素三步法提取及结构性状研究

采用"脱脂-酶解-酸解"三步法提取乌骨鸡黑色素,研究酸液脱除蛋白,分离乌骨鸡黑色素的工艺条件,通过透射电镜对乌骨鸡黑色素纯化效果进行观察,并用元素分析仪对其结构进行分析。结果表明:最佳脱脂工艺为乙醇回流脱脂4次,每次1h,料液比1∶2,此工艺条件下乌骨鸡油脂得率7.5%。脱脂后用蛋白酶C进行酶解,酸化的最优工艺盐酸浓度为2mol/L,回流时间为3h,固液比为1∶10,回流次数为4次,此条件下杂质脱除率最高,且条件温和,通过透射电镜可见三步法纯化的黑色素颗粒形态完整,边缘清晰平滑,无破坏痕迹,可用于降解和结构研究。根据元素分析仪推测乌骨鸡黑色素是一类有别于真黑色素及脱黑色素的特殊黑色素。     

乌骨鸡黑色素三步法提取及结构性状研究

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泰和乌骨鸡黑色素的体外抗氧化作用

采用分光光度法测定磷钼酸配合物、自由基和丙二醛(MDA)的含量,用于研究酶法提取的泰和乌骨鸡黑色素的总抗氧化能力及其清除自由基和抗脂质过氧化的作用,研究过程中用合成黑色素与之进行比较.结果表明:泰和乌骨鸡黑色素清除羟基自由基的能力虽然低于合成黑色素,但其总抗氧化能力与合成黑色素相当,而清除DPPH自由基和超氧阴离子自由基的能力以及抗脂质过氧化作用都优于合成黑色素,说明泰和乌骨鸡黑色素具有明显的体外抗氧化功能.     

H2O2氧化-荧光分析法测定乌骨鸡中黑色素含量的研究

本研究首次建立了简单、快速地测定乌骨鸡黑色素含量的荧光分析方法。乌骨鸡黑色素在碱性条件下经过氧化氢氧化后产生强烈的荧光。本研究优化了样品前处理条件以及氧化反应条件,对线性范围、检测限以及加标回收率进行了评价。结果表明,最佳氧化条件:氧化温度为55℃,过氧化氢溶液工作浓度范围为20%～25%,氧化反应时间为2 h;最佳样品前处理的条件:Na OH浓度为0.1～0.2 M,超声时间为40 min,超声温度为70℃。黑色素浓度在50～600μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数r=0.9986。与传统检测方法相比,荧光分析法无需从样品中提取黑色素,极大地加快了分析速度,简化了分析操作,并且该方法相对于紫外分光光度法的检测限降低了至少10倍。样品添加不同浓度的黑色素工作标准品的平均回收率为102.87%,RSD值为4.51%。采用该方法测定了乌骨鸡鸡皮、腿肌、胸肌中的黑色素含量,结果显示乌骨鸡肉中的黑色素含量:鸡皮腿肌胸肌,分别占鲜重的1.08%、0.44%、0.34%。以上结果表明该方法较快速、准确、检测限低,适用于乌骨鸡中黑色素含量的测定。     

乌骨鸡活性肽组成成分及体外抗氧化活性研究

本实验对乌骨鸡活性肽的蛋白质含量、多肽含量、游离氨基酸含量和多肽的分子量分布进行了研究,并通过测定乌骨鸡活性肽对Fenton反应产生的羟自由基、邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子的清除率,考察乌骨鸡活性肽的体外抗氧化能力。乌骨鸡活性肽组成分析表明:活性肽中蛋白质含量为90.53%,其中主要成分为小分子多肽(51.46%)和氨基酸(36.17%)。乌骨鸡活性肽分子量分布的凝胶色谱法测定结果显示其分子量集中在1900Da以下,其中小肽所占相对比例较大。体外抗氧化实验结果表明:乌骨鸡活性肽具有较强的清除羟自由基的能力,其清除率与浓度呈剂量关系;并能明显降低邻苯三酚自氧化速率,抑制率与浓度呈正相关,但与肌肽比较,乌骨鸡活性肽的体外抗氧化能力相对要弱。     

乌鸡肽的营养成分及其功能特性研究

探讨乌鸡肽的营养成分及功能,为其深度开发打下基础。利用木瓜蛋白酶和风味蛋白酶水解乌骨鸡肌肉、活性炭脱色法制备乌鸡肽,高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法检测乌鸡肽的总氨基酸及游离氨基酸含量及相对分子质量分布区间、纳升级液相色谱串联质谱(Nano liquid chromatography tandem mass spectrometry,Nano LC-MS/MS)技术鉴定其组成成分。结果表明,游离氨基酸占总氨基酸的比例为1.74%,总氨基酸含量较高者为Leu、Ala、His、Pro、Met和Phe,游离氨基酸含量较高者为Glu、Pro、Asp、Arg、Gly和Ala;相对分子质量分布范围为0至6 918 Da,其中1 084 Da以下的比例达到88.91%;Nano LC-MS/MS鉴定出源于107种蛋白质的2 287种肽段序列,其中种类最为丰富的蛋白为参与骨骼肌修复的蛋白及酶类。该研究较为全面的分析乌鸡肽的营养成分,并表征了其功能,为乌鸡肽的潜在应用价值研究打下基础。     

乌鸡黑色素抗紫外线功能的应用研究

探讨了乌鸡黑色素的抗紫外线功能。结果表明:当乌鸡黑色素水悬液浓度高于0.009mg/mL时,对紫外线照射的唾液链球菌嗜热亚种和德氏乳杆菌保加利亚亚种,以及食品中的Vc有明显的保护作用,浓度越高保护作用越强;黑色素的保护作用随着照射时间的延长而减弱,但与对照相比差异仍极显著(P<0.01);黑色素经光照、室温或低温处理后,其抗紫外线性质几乎未受影响,高温处理则影响较大,温度越高影响越严重,但与对照相比仍具有较强的抗紫外线功能。     

泰和乌骨鸡活性肽补血作用研究

目的：探讨泰和乌骨鸡活性肽体内补血作用。方法：利用失血法和骨髓抑制药物氟尿嘧啶注射法联合建立小鼠血虚模型,并测定红细胞(RBC)和血红蛋白(HGB)水平,观察乌骨鸡活性肽及其一种分离活性肽(简称组分A)对血虚小鼠的补血作用。结果：活性肽组RBC 水平在第12 天时与血虚组相比差异显著(P ＜ 0.05);活性肽组在第6 至12 天期间升高RBC 和HGB 作用水平与阿胶组相比明显加快,具有显著性差异(P ＜ 0.05)。第18 天时活性肽组HGB 水平已超过各组水平,且与正常组相比具有显著性差异(P ＜ 0.05)。活性肽组分A 组的RBC 水平在各个时间点均高于血虚组,但均无显著性差异(P ＞ 0.05),活性肽组分A 组在第20 天时HGB 水平已与正常组无显著性差异(P ＞ 0.05),而血虚组和阿胶组仍与正常组有极显著差异(P ＜ 0.01)。结论：泰和乌骨鸡活性肽及活性肽组分A 能够在一定程度上提高氟尿嘧啶血虚模型小鼠的红细胞和血红蛋白水平,具有一定的补血作用。     

乌鸡低聚肽亚铁螯合物的分离纯化与结构鉴定

从乌鸡中酶解得到乌鸡低聚肽,然后与亚铁螯合制备乌鸡低聚肽亚铁螯合物,螯合率为84.76±0.12%。乌鸡低聚肽亚铁螯合物具有较高的蛋白质含量,高达54.64±1.03%。并且分子量较低,其中分子量小于1000 u的占85.50%。通过扫描电镜、红外光谱对乌鸡低聚肽亚铁螯合物的结构进行分析,结果表明乌鸡低聚肽亚铁螯合物是一种新型的铁螯合物。体外稳定性研究表明乌鸡低聚肽亚铁螯合物具有一定的热稳定性、酸碱稳定性和体外消化稳定性。通过反相高效液相色谱对乌鸡低聚肽亚铁螯合物进行分离纯化,选择一个主要的组分进行收集,然后利用质谱仪进行质谱分析。从乌鸡低聚肽亚铁螯合物的主要组分中鉴定出一个五肽,氨基酸序列为Thr-Ser-Gly-Met-Pro。乌鸡低聚肽亚铁螯合物可作为一种铁补充剂用于食品添加剂、营养物及医药制品中。     

泰和乌骨鸡鸡肉总磷脂含量及其侧链脂肪酸组成的特性

本文比较了相同条件养殖的泰和乌骨鸡和两种非药用鸡鸡肉的总磷脂含量,并以GC-MS联用技术对三种鸡肉中磷脂的疏水侧链脂肪酸组成进行了鉴定和分析,用面积归一法,计算各脂肪酸的相对百分含量。结果表明,泰和乌骨鸡鸡肉中总磷脂含量显著高于非药用鸡,而两种非药用鸡间无显著差异;泰和乌骨鸡鸡肉磷脂侧链脂肪酸中多不饱和脂肪酸和花生四烯酸含量显著高于非药用鸡。     

泰和乌骨鸡活性肽的分离及其体外抗氧化作用

利用制备型HPLC 对泰和乌骨鸡活性肽进行分离,流动相为0.01mol/L 的磷酸盐溶液,采用强酸型离子交换树脂和强碱型离子交换树脂两步脱盐法对泰和乌骨鸡活性肽各分离组分进行脱盐处理。以肌肽和抗坏血酸为对照,通过清除羟自由基作用、抑制脂质过氧化作用以及对Fe2+ 和Cu2+ 螯合能力4 个体系测定泰和乌骨鸡活性肽及其分离组分的体外抗氧化能力。结果表明：泰和乌骨鸡活性肽分离所得13 个组分均具有一定的抗氧化能力,且与质量浓度呈量效关系,绝大部分分离活性肽组分比活性总肽有更强的羟自由基清除能力、脂质过氧化抑制能力以及Fe2+ 螯合能力。