超高压结合酶法消减南美白对虾蛋白过敏原研究

以南美白对虾为研究对象,提取水溶性虾蛋白,采用超高压法、超高压处理后再用木瓜蛋白酶水解、超高压下直接酶解等方法消减其过敏原蛋白,用间接酶联免疫吸附法检测过敏原消减效果,确定消减过敏原的条件。结果表明：采用超高压法处理,其最佳条件为压力150MPa、温度45℃、保压时间35min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.1997;高压结合木瓜蛋白酶水解法最佳条件为：350MPa、温度45℃、保压时间20min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.0492;超高压下直接用木瓜蛋白酶处理,其最佳条件为：压力300MPa、温度45℃、保压时间35min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.05。由此可见,高压对过敏原蛋白有消减作用,先高压再水解和超高压下直接酶处理对过敏原的消减效果更好。     

凡纳滨对虾过敏原酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶对凡纳滨对虾虾肉水解,消减其过敏原。通过间接酶联免疫吸附实验对过敏原消减情况进行检测,以492nm 波长处的OD 值为指标确定最佳水解条件。结果表明：胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0、酶与底物质量比1:100、水解温度45℃、底物质量浓度5g/100mL、水解时间3h,水解物OD 值为0.085;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物质量比1:100、水解温度为60℃、底物质量浓度5g/100mL、水解时间3h,水解物OD 值为0.049。     

超高压结合酶法消减南美白对虾虾仁的致敏性

以南美白对虾虾仁为原料,研究超高压结合酶法对虾仁致敏性的消减效果。将南美白对虾去头、尾、壳、肠线后,采用超高压法和超高压结合酶法消减其致敏性,用间接酶联免疫吸附法检测致敏性消减效果,确定消减条件。结果表明：采用超高压法处理最佳条件为压力600 MPa、温度40 ℃、保压时间30 min,此条件下消减率为45.66%;超高压结合胰蛋白酶法最佳条件为压力200 MPa、温度40 ℃、保压时间30 min、胰蛋白酶加酶量3 000 U/mg,此条件下消减率为95.27%。由此可见,超高压法对虾仁致敏性有消减作用,超高压结合酶法对虾仁致敏性消减的效果更好。     

高压结合酶法消减南美白对虾虾仁致敏性

以南美白对虾虾仁为原料,研究高压结合酶法对虾仁过敏原致敏性的消减作用。将南美白对虾去头去尾去壳去肠线后,采用超高压法和高压结合酶法消减其致敏性,用间接酶联免疫吸附法检测致敏性消减效果,确定消减条件。结果表明：采用超高压法处理,在压力100 MPa、温度25 ℃、保压时间15 min的条件下,虾仁过敏原的致敏性降低了67.09%,且与处理过程中蛋白溶出量有关;采用高压结合酶法处理,在盐水质量浓度1 g/100 mL、酶与虾仁质量比1∶130、压力450 MPa、温度40 ℃、保压时间55 min的条件下,虾仁过敏原的致敏性降低了86.58%。由此可见,高压处理对虾仁过敏原的致敏性有消减作用,高压结合酶法的消减效果更好。     

凡纳滨对虾酶解产物过敏原消减效果的评价

采用木瓜蛋白酶分解凡纳滨对虾的蛋白质,以消减其中的蛋白质过敏原;应用豚鼠全身过敏反应和离体回肠平滑肌过敏性收缩实验模型,对该蛋白酶酶解产物的致敏性进行评价。结果显示,虾蛋白和虾肉经木瓜蛋白酶水解后,其酶解产物所致的全身过敏反应明显减轻(与虾蛋白组和虾肉组比较,0.01相似文献   

利用牛奶过敏者血清检验牛奶中过敏原酶解程度的研究

利用对牛奶过敏者和对牛奶不过敏者的血清作为“一抗”,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,检测牛奶水解后对牛奶过敏者血清的结合能力,从而确定牛奶中过敏原蛋白的最佳水解消除条件,降低牛奶及奶制品对牛奶过敏者的致敏性,达到牛奶过敏人群可以饮用的标准。结果表明:胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶共同水解牛奶的最佳条件是酶与底物质量比W(E/S)=4%,pH1.5(胃蛋白酶)和pH8.0(胰蛋白酶和木瓜蛋白酶),温度40℃(胃蛋白酶和胰蛋白酶)和45℃(木瓜蛋白酶),水解时间3h,用酶标仪在492nm测得其水解后奶样与过敏者血清结合的OD值已降到了牛奶不过敏者血清与未水解牛奶结合的OD值水平,达到了消除过敏原的效果。     

南美虾蛋白酶解产物过敏原消减效果研究

采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶分解南美白对虾的蛋白质,以消减其中的蛋白质过敏原;应用全身过敏反应和离体回肠平滑肌过敏性收缩实验模型,对该工艺蛋白酶酶解产物的致敏性进行评价。结果显示,3种蛋白酶的虾蛋白酶解产物所致的全身过敏反应均明显减轻(与虾蛋白组比较,0.01 ＜ P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01);同时,3种酶解产物致敏的离体回肠平滑肌对虾蛋白和酶解产物过敏原攻击的反应也明显减弱(与虾蛋白致敏组比较,0.01＜P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01)。综合评价3 种酶解产物的致敏性,认为木瓜蛋白酶的酶解工艺较好,过敏原消减比较理想,食用更安全。     

凡纳滨对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用免疫印迹法检测其主要过敏原蛋白组分;用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对凡纳滨对虾水溶性蛋白水解,消减过敏原。并且通过间接酶联免疫吸附实验和致敏豚鼠全身免疫实验对过敏原消减情况进行检测,确定酶法消减过敏原条件。结果表明,凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19kD 以及14kD 的蛋白质组分。胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0,酶与底物比1:100(m/m,下同),45℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物比1:100,60℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;菠萝蛋白酶最佳水解条件：pH7.5,酶与底物比1:100,55℃,底物质量浓度5g/100mL,水解时间3h。并且胰蛋白酶水解产物和木瓜蛋白酶水解产物对致敏豚鼠的全身免疫实验安全性很好。     

超高压结合胰蛋白酶消减虾原肌球蛋白致敏性及其抗原线性表位残留

比较常压下酶水解与超高压下酶水解虾原肌球蛋白（tropomyosin,TM）的致敏性差异及线性表位的残留,探讨超高压下酶水解TM增强致敏性消减效果的原因。采用间接酶联免疫吸附测定法检测TM致敏性,傅里叶变换红外光谱和荧光光谱法检测TM二级和三级结构;以致敏性（OD492 nm）为指标,确定常压和超高压下酶水解TM的条件;采用质谱法检测水解片段的氨基酸序列。结果表明,在40 ℃、200 MPa下,保压时间30 min有利于胰蛋白酶活力的提高;压力在100～600 MPa内,TM致敏性随压力升高而降低,其致敏性与二级结构中β-转角的相对含量及三级结构的变化有关;在常压下（40 ℃、酶添加量3 000 U/g、水解30 min）,TM水解产物的致敏性消减率为89%,水解产物中含8～16 个氨基酸残基的片段数量占76.8%,且线性表位的消减率为60.0%～66.7%;在超高压下（40 ℃、酶添加量3 000 U/g、200 MPa下水解30 min）,TM水解产物的致敏性消减率为98%,水解产物中含8～16 个氨基酸残基的片段数量占93.3%,且线性表位的消减率为88.9%～90.0%。因此,超高压可以促进酶水解TM,有利于线性表位的消除,从而降低水解产物的致敏性。     

超高压引发虾仁致敏性及感官品质的变化

以南美白对虾为原料,研究超高压处理引发虾仁致敏性及感官品质的变化。将南美白对虾虾仁采用不同压力(0.1~800 MPa)处理,用间接酶联免疫吸附法检测致敏性消减效果,确定消减条件,并分别用电子眼、电子鼻和电子舌检测其颜色、气味和滋味的变化。结果表明:在压力600 MPa、温度40℃的条件下处理30 min,能够较好地消减虾仁致敏性(消减率为45.66%)。另外,高压处理也引发虾仁感官品质的变化,与未处理虾仁相比,随着压力的升高,超高压处理的虾仁的主色色号及占比逐渐增大;主要气味成分乙酰吡嗪的含量逐渐降低,且二甲基三硫类化合物消失;咸味和酸味逐渐增加,而鲜味增加了32~34倍,并且出现了甜味和苦味;在相同压力下,甜味和苦味的强度值相近。因此,超高压处理对虾仁致敏性有消减作用,同时,会引起虾仁色、香、味等感官品质的变化。     

高压处理诱发虾原肌球蛋白结构变化与致敏性的关系

以凡纳滨对虾原肌球蛋白为原料,研究不同高压条件下引发构象的变化与致敏性的关系。采用不同高压条件(压力0.1~800.0 MPa,处理时间10~40 min,温度10~37℃)处理原肌球蛋白(tropomyosin,TM),用圆二色谱法检测二级结构变化,荧光光度法检测三级结构变化,间接酶联免疫吸附法检测致敏性。结果显示,超高压处理能够引发TM的致敏性和三级结构变化,而对二级结构无显著影响;高压条件下TM致敏性的变化与其三级结构的改变有显著相关性。在实验压力范围内,20℃、300 MPa处理40 min TM疏水性氨基酸暴露程度最小,且致敏性最低(OD_(492 nm)为0.210±0.005);700 MPa条件下暴露程度最高,且致敏性最高(OD_(492 nm)为0.328±0.004)。因此,TM致敏性与其三级结构有关,与二级结构无关。     

超高压及酶解对虹鳟鱼I型胶原蛋白抗原性的影响

采用超高压及酶解两种方法处理虹鳟鱼过敏原I型胶原蛋白,并研究对其抗原性的影响。结果表明：经超 高压处理后,I型胶原蛋白抗原性随着压力的升高呈现先降低后上升的趋势,200 MPa、25 ℃超高压处理10 min时, I型胶原蛋白抗原性最高降低42.66%。比较木瓜蛋白酶、α-糜蛋白酶以及胰蛋白酶酶解对I型胶原蛋白抗原性的影 响,得到最佳酶解条件为胰蛋白酶在45 ℃、pH 8.0,酶与底物质量比为1∶10时,I型胶原蛋白抗原性消减97.69%。 上述结果表明超高压及酶解均能有效降低虹鳟鱼I型胶原蛋白抗原性,且酶解更为有效。本研究结果为消减过敏原 提供借鉴。     

超高压处理对凡纳滨对虾原肌球蛋白构象的影响

以凡纳滨对虾的原肌球蛋白（tropomyosin,TM）为原料,研究不同超高压条件下引发的TM构象变化。采用压力0.1～800 MPa,处理时间10～40 min,温度10～37 ℃处理TM,圆二色光谱法检测其二级结构变化,荧光光度法检测其荧光强度变化,DNA Star Protean软件预测可塑性。结果显示,超高压处理对TM的二级结构无显著影响,不同超高压条件下TM三级结构有显著变化。在实验压力范围内,300 MPa处理的TM疏水性氨基酸暴露程度最小;700 MPa处理后暴露程度最高。经预测,TM的可塑性区域占总氨基酸序列的72.9%。因此,超高压条件下TM的二级结构稳定,三级结构变化较大,三级结构的变化可能与其可塑性区域的比例较高有关。     

超高压技术对南美白对虾脱壳及加工性能的影响

研究超高压技术对南美白对虾脱壳条件及对脱壳后所得虾仁加工性能的影响。以压强、保压时间、施压温度为影响因素,以得肉率、脱壳时间和持水性为指标,确定最佳超高压处理脱壳条件,并评价不同脱壳条件所得虾仁的加工性能（汁液流失率、质构和色泽变化）。结果显示：超高压处理较传统手工脱壳能显著（P＜0.05）缩短对虾脱壳时间、提高虾仁得肉率,而且还可提高虾仁的持水性、降低其汁液流失率,从而提高虾仁的加工性能;经优化验证确定最优脱壳条件为压强200 MPa、保压时间3 min、施压温度20 ℃。该条件下处理南美白对虾,脱壳时间缩短60.43%、得肉率提高6.21%、虾仁持水性增至15.20%、汁液流失率降低至0.88%、整体色泽变化值2.45、硬度677.154 g、弹性0.721。