榆干离褶伞溶栓酶的纯化及酶学性质研究

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从榆干离褶伞菌丝体中纯化一种溶栓酶,并探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性。实验结果表明,其分子质量约为50 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 6.0,35℃,并对tPA底物S-2288最敏感。Mn~(2+)和Mg~(2+)激活酶活性,而Cu~(2+),EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。榆干离褶伞很有潜力成为治疗血栓的新的药物来源。     

榆干离褶伞溶栓酶对内皮细胞损伤大鼠模型的保护作用

目的探讨榆干离褶伞溶栓酶对肾上腺素致血管内皮细胞损伤的保护作用。方法采用注射肾上腺素结合冰浴的方法制备大鼠血管内皮细胞损伤模型,检测血液循环内皮细胞数(CEC)和血浆血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素E_(1α)(6-keto-PGE_(1α))、组织纤溶酶原激活物(t-PA)以及抗凝酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的含量。结果模型组的CEC和TXB_2水平较正常组明显增高,且t-PA和AT-Ⅲ含量下降。用药组可减少CEC和TXB_2水平,提高6-keto-PGE_(1α)、t-PA和AT-Ⅲ含量。结论榆干离褶伞溶栓酶对血管内皮细胞起保护作用。     

榆干离褶伞溶栓酶对酒精诱导大鼠肝损伤的保护作用

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对酒精诱导大鼠肝损伤的保护作用.方法:将大鼠随机分为4组,即正常对照组,模型组,LUFE低、高剂量组.除正常对照组以外,其余各组每日按10 mL/kg mb灌胃体积分数40％的酒精诱导肝损伤.LUFE低...     

榆干离褶伞溶栓酶对血栓模型大鼠血小板活性的影响

目的:研究榆干离褶伞（Lyophyllum ulmarium,L.u）溶栓酶的抗血栓作用及对血小板活性的影响。方法:三氯化铁诱导大鼠颈动脉血栓模型,检测血栓重量,用流式细胞仪检测CD62P的表达,酶联免疫吸附法测定p-选择素、血管性血友病因子（v WF）、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素E1α（6-keto-PGE1α）的水平。结果:与模型组相比,L.u溶栓酶处理以后大鼠血栓重量明显减轻,CD62P阳性率、p-选择素、v WF、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa以及TXB2的含量不同程度地下降,对6-keto-PGE1α的影响不显著。结论:L.u溶栓酶具有抗血栓作用,其机制可能与抑制血小板的活化作用有关。      

榆干离褶伞溶栓酶对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用

目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶(LUFE)对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法:以高脂饮食建立高脂血症模型,用不同剂量的LUFE灌胃模型大鼠。HE染色观察肝脏病理形态学变化;比色法检测大鼠血浆生化指标;蛋白免疫印迹法观察炎症相关蛋白的表达水平。结果:LUFE可以缓解高脂血症大鼠的肝组织损伤,降低血浆血脂水平、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,下调TLR4、MyD88和磷酸化的PI3K、Akt、NF-кB水平。结论:LUFE通过调控PI3K/Akt/NF-кB和TLR4/MyD88/NF-кB信号通路,可以保护高脂血症所致的大鼠肝损伤。     

榆干离褶伞溶栓酶对大鼠动脉血栓的抑制作用

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对大鼠动脉血栓形成的抑制作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和LUFE低、高剂量组,除假手术组以外,其余4组均以三氯化铁建立颈动脉血栓模型.造模前阳性对照组和LUFE低、高...     

榆干离褶伞发酵液的溶栓与降血脂作用

研究了榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,L.u)发酵液的体外溶栓作用和降血脂作用。将血凝块与L.u发酵液37℃恒温孵育,测定血凝块溶解时间;观察给予L.u发酵液后对小鼠体内出、凝血时间的影响;采用高脂血症动物模型,观察L.u发酵液对血脂水平的影响。结果显示,L.u发酵液明显延长凝血时间及出血时间,明显降低高脂血症小鼠总甘油三酯和总胆固醇含量。可以证明,L.u发酵液具有溶栓作用,其机制可能与其抗凝作用和降血脂作用有关。     

榆干离褶伞溶栓酶对高脂血症大鼠血管内皮的保护作用

研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对高脂血症大鼠血管内皮损伤的保护作用。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组、LUFE组,正常对照组喂养普通饲料,其余组给予高脂饲料,其中LUFE组同时灌胃LUFE (400mg·kg-1·d-1),阳性对照组于饮食诱导第5周开始灌胃阿托伐他汀钙片(5mg·kg-1·d-1),分别于诱导4、8周后进行指标检测。采用苏木精-伊红染色观察主动脉组织病理学形态变化,油红O染色观察主动脉内膜脂质斑块的分布情况。检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、内皮素-1(ET-1)、6-酮前列腺素F1α(6-keta-PGF1α)水平,并计算动脉粥样硬化指数。采用Western blot法检测主动脉核因子E2相关因子2(Nrf2)、沉默信息调节因子3(Sirt3)、乙酰化超氧化物歧化酶2(Ac-SOD2)、血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平。结果表明:LUFE可减轻高脂血症大鼠主动脉病理性损伤,减少主动脉内膜脂质斑块分布的相对面积,降低血浆TC、TG、LDL-C、ET-1、MDA水平,增加6-keta-PGF1α、CAT和SOD2的水平,上调主动脉组织Nrf2、HO-1、Sirt3蛋白表达,降低主动脉组织Ac-SOD2的相对蛋白表达。研究结果证实,LUFE可减轻高脂血症所致的大鼠血管内皮损伤,其机制可能与降低血脂、减轻氧化应激损伤有关。     

榆干离褶伞溶栓酶对动脉血栓大鼠血管内膜的保护作用

目的：探讨榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)在大鼠动脉血栓形成过程中对血管内膜损伤的保护作用。方法：将50 只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阿司匹林组和LUFE低、高剂量组。建立血栓模型前,阿司匹林组和LUFE低、高剂量组分别以10 mg/kg m_b阿司匹林和100、400 mg/kg m_b LUFE灌胃7 d。次日,除假手术组以外其余4 组以三氯化铁诱导建立大鼠颈动脉血栓模型。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察颈动脉血管形态学变化;酶联免疫吸附法测定血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血小板-内皮细胞黏附分子-1(platelet ...     

榆干离褶伞溶栓酶对脂多糖诱导的大鼠炎性肝损伤的保护作用

本实验研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肝损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。将大鼠随机分为五组,分别为对照组、模型组、阳性对照组、LUFE低剂量组、LUFE高剂量组。LUFE分别以200、400 mg/kg体质量灌胃2周。除对照组以外其余四组均以腹腔注射LPS诱导大鼠肝脏炎性损伤模型。阳性对照组在造模前腹腔注射地塞米松(5 mg/kg)。苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变;检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;Western bolt方法观察肝组织Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、p-TAK1和p-NF-κB p65蛋白水平。实验结果表明,LUFE可缓解LPS诱导的肝组织的炎性损伤,降低血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量和AST、ALT活性,提高ALB水平。Western bolt结果显示,LUFE下调TLR4、p-TAK1、p-NF-κBp65蛋白水平。以上结果表明LUFE抑制肝脏炎性损伤,其机制可能与其下调TLR4-NF-κB通路相关蛋白的表达有关。     

豆豉溶栓酶提取纯化研究

对豆豉溶栓酶发酵液进行提取、脱色,盐析,超滤脱盐,冷冻干燥等纯化研究,制得的豆豉溶栓酶干品,其比活力为530.6U/mg,纯化倍数为11.0,活性回收率为65.7%。溶栓酶干品经Sephadex G-100柱层析,SDS-PAGE法测定分子量为31.0ku。     

酱油曲中产纤溶酶微生物的分离筛选和初步鉴定

从生产酱油的曲中分离到产纤溶酶的米曲霉18株和枯草芽孢杆菌8株.枯草芽孢杆菌和米曲霉所产纤溶酶都含有纤溶酶原激活剂,而且对BAEE都有一定的分解作用。     

榆干离褶伞溶栓酶对脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞炎性损伤的保护作用.方法:以LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)炎性损伤.将HUVEC分为空白对照组、模型组和榆干离褶伞溶栓酶(Lyoph...