榆干离褶伞溶栓酶的纯化及酶学性质研究

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从榆干离褶伞菌丝体中纯化一种溶栓酶,并探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性。实验结果表明,其分子质量约为50 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 6.0,35℃,并对tPA底物S-2288最敏感。Mn~(2+)和Mg~(2+)激活酶活性,而Cu~(2+),EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。榆干离褶伞很有潜力成为治疗血栓的新的药物来源。     

榆干离褶伞发酵液对急性肝损伤的保护作用

目的:研究榆干离褶伞发酵液对四氯化碳(CCl4)诱发的急性肝损伤的保护作用。方法:用CCl4建立小鼠急性化学性肝损伤模型,检测榆干离褶伞发酵液对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及肝组织白蛋白(Alb)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和丙二醛(MDA)的含量。结果:榆干离褶伞发酵液明显降低急性肝损伤小鼠血清ALT活性,提高SOD、GSH-Px活力及Alb含量并显著降低MDA含量。结论:研究榆干离褶伞发酵液具有一定的肝保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

榆干离褶伞发酵液体外抗氧化性能研究

目的:研究榆干离褶伞发酵液的体外抗氧化作用。方法:利用比色法测定榆干离褶伞发酵液对羟基自由基.OH、H2O2、二苯基苦味酰基苯肼(DPPH)的清除能力和红细胞自氧化溶血的影响以及H2O2诱导的肝损伤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量。结果:榆干离褶伞发酵液具有清除.OH、H2O2和DPPH自由基能力,降低红细胞溶血率,提高肝组织SOD、GSH-Px、CAT活性并抑制肝组织MDA的生成。结论:榆干离褶伞发酵液具有体外抗氧化作用。     

揄干离褶伞菌丝体溶栓酶特性研究

探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性.实验结果表明,该酶的最适pH为6,最适温度为35℃,并对tPA底物S-2288最敏感.Mn2 和Mg2 激活酶活性,而Cu2 、EDTA对酶活有抑制作用.该酶不仅直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原.因此,榆干离褶伞溶栓酶很有可能成为治疗和预防血栓栓塞性疾病的新来源.     

硒化荷叶离褶伞菌丝体的鉴定及生物活性

对荷叶离褶伞菌丝体硒化后的产物进行研究分析及抗氧化活性测定,旨在寻找新型富硒抗氧化新材料,并为其工业化生产提供参考资料。研究结果表明,硒化荷叶离褶伞菌丝体是一种平均分子量为9.43 kDa的高分子多糖,是一种活性物质,其中组成物质主要有蔗糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖和木糖,摩尔比为5.30︰1.55︰2.14︰0.29︰0.63,硒含量为3.21 pg/g。硒化荷叶离褶伞菌丝体具有明显的抗氧化活性,对癌细胞有很强的抑制作用。研究显示,双氧水阴离子自由基、羟自由基、ABTS和DPPH自由基随浓度的增加而增加,当浓度达到6 mg/mL时,硒化荷叶离褶伞菌丝体的清除活性接近VC。凋亡减少较少的亚G1峰含量表明硒化荷叶离褶伞菌丝体具有减轻双氧水对PC-12细胞氧化损伤的作用。这些结果表明硒化荷叶离褶伞菌丝体具有很强的抗氧化能力。硒化荷叶离褶伞菌丝体可以预防氧化损伤,可作为有机硒膳食补充功能食品。     

榆干离褶伞溶栓酶对内皮细胞损伤大鼠模型的保护作用

目的探讨榆干离褶伞溶栓酶对肾上腺素致血管内皮细胞损伤的保护作用。方法采用注射肾上腺素结合冰浴的方法制备大鼠血管内皮细胞损伤模型,检测血液循环内皮细胞数(CEC)和血浆血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素E_(1α)(6-keto-PGE_(1α))、组织纤溶酶原激活物(t-PA)以及抗凝酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的含量。结果模型组的CEC和TXB_2水平较正常组明显增高,且t-PA和AT-Ⅲ含量下降。用药组可减少CEC和TXB_2水平,提高6-keto-PGE_(1α)、t-PA和AT-Ⅲ含量。结论榆干离褶伞溶栓酶对血管内皮细胞起保护作用。     

荷叶离褶伞多糖提取工艺优化及抗氧化活性研究

本研究以荷叶离褶伞多糖为对象,采用单因素与响应面法对多糖提取温度、提取时间、液料比、次数进行优化,进一步研究了荷叶离褶伞多糖的抗氧化活性。结果表明:在提取温度为89 ℃,时间为3 h,液料比为30:1 (mL/g),提取2次时,荷叶离褶伞多糖得率为5.35%±0.12%,与预测值相近。荷叶离褶伞多糖的抗氧化活性与多糖浓度在0~1.0 mg/mL范围内呈现剂量依赖关系,多糖浓度在1.0 mg/mL时,DPPH和ABTS自由基清除率分别达到45.87%±2.12%和76.49%±1.56%。荷叶离褶伞多糖对DPPH和ABTS自由基半抑制浓度IC₅₀分别为1.40、0.44 mg/mL,说明荷叶离褶伞多糖具有较好的抗氧化能力。     

榆干离褶伞溶栓酶对大鼠动脉血栓的抑制作用

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对大鼠动脉血栓形成的抑制作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和LUFE低、高剂量组,除假手术组以外,其余4组均以三氯化铁建立颈动脉血栓模型.造模前阳性对照组和LUFE低、高...     

荷叶离褶伞多糖的提取工艺及其抑菌作用的研究

在单因素试验的基础上,通过3因素3水平正交试验优化了荷叶离褶伞菌丝体和发酵液中多糖的提取工艺。利用圆纸片法对荷叶离褶伞多糖进行了抑菌性实验,结果表明荷叶离褶伞多糖提取物对细菌和真菌都有抑制作用,其中对四叠球菌和黑曲霉的抑制作用最强,最小抑菌浓度均为1.094ug/ml。该研究以期为荷叶离褶伞在更多领域的合理开发和利用提供参考。     

荷叶离褶伞菌丝体富硒条件的研究

为获得荷叶离褶伞富硒菌丝体,以菌丝体干重和富硒率为评价指标,研究灭菌条件、培养时间、硒添加量和硒添加时间对荷叶离褶伞菌丝体生长及其富硒效果的影响.采用L9(34)正交实验优化荷叶离褶伞菌丝体富硒条件,结果表明当灭菌条件为115℃、20min,于发酵至第5d在发酵液中加入4.μg/mL Na2Se03,待发酵至13d时,菌丝体干重量和富硒量分别为0.8232g/100mL和0.7040mg/g,由此确定上述条件为荷叶离褶伞菌丝体的最优富硒发酵条件.     

榆干离褶伞溶栓酶对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的：探讨榆干离褶伞（Lyophyllum ulmarium,L.u）溶栓酶对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（humanumbilical vein endothelial cell,HUVEC）损伤的保护作用。方法：用H2O2诱导HUVEC氧化损伤,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法观察细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞线粒体跨膜电位（ΔΨm）和总活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;Western blotting法检测Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3等蛋白的表达水平。结果：L.u溶栓酶可显著提高HUVEC的存活率,明显抑制H2O2诱导的细胞内ROS生成和线粒体跨膜电位的下降,并能降低Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的表达水平。结论：L.u溶栓酶对氧化应激损伤的HUVEC有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

榆干离褶伞发酵液对血管内皮细胞的保护作用

为了探讨榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,简写为LU)发酵液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,分别用20、40、80 mg/L LU干预HUVEC后用过氧化氢诱导凋亡,采用MTT法观察LU发酵液对细胞存活率的影响;通过比色法测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测bcl-2、bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白质的表达。结果显示:LU发酵液显著提高内皮细胞的存活率,降低细胞上清液LDH活性,抑制H2O2诱导的细胞凋亡,降低bax、Caspase-3、Caspase-9的表达,提高bcl-2的表达。这说明LU发酵液对血管内皮细胞有保护作用,其机制可能与抑制凋亡有关。     

白黄侧耳溶栓酶的分离纯化及特性分析

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从白黄侧耳菌丝体中纯化一种溶栓酶,并进行酶学性质研究。实验结果表明,其分子质量约为18 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 7.0,40℃,并对糜蛋白酶底物S-2586最敏感。Co2+和Mg2+激活该酶活性,而Cu2+、EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅可直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。     

Stimulation of saccharifying enzyme production by immobilized fungal mycelia using liquefied rice treated with protease

The effects of protease-treated liquefied rice on the production of saccharifying enzyme by immobilized fungal mycelia were investigated. The production of saccharifying enzyme by immobilized fungal mycelia was stimulated by the protease-treated liquefied rice. The origin of the effector was identified as a hydrolyzate of glutelin, a major rice protein. Moreover, the effector was purified by gel permeation chromatography and reversed-phase HPLC. The molecular weight of the purified effector was around 400-500 Da and it was composed of a few amino acids. These results indicate that the oligopeptide derived from the glutelin hydrolyzate regulates the production of saccharifying enzyme by immobilized fungal mycelia. Furthermore, this oligopeptide stimulated the production of raw starch-digesting glucoamylase by immobilized fungal mycelia but did not stimulate the production of other proteins.     

PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF ENDOPROTEASES FROM FRUIT BODY OF 'SHIMEJI'MUSHROOM, Lyophyllum aggregatum

Two proteolytic enzymes, L.a. protease I and II, were purified from the fruit body of 'shimeji'mushroom, Lyophyllum aggregatum, by ammonium sulfate precipitation, gel filtration, hydrophobic chromatography and ion-exchange chromatography. The enzymes were assayed using t-butyloxycarbonyl-Ala-Ala-Pro-Phe p-nitroanilide as a substrate. Each of the final enzyme preparations was homogeneous on polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weights of the enzymes were estimated as 44,000 and 46,000 by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. The enzymes had the same optimal pH range of 7–8. Protease I preferentially hydrolyzed peptide bonds of the carboxyl-terminal sides of phenylalanine and leucine, and slowly hydrolyzed the peptide bonds of alanine, threonine and asparagine. On the other hand, protease II showed broader substrate specificity. Both enzymes were almost completely inactivated by diisopropyl phosphofluoridate, and partially inhibited by chymostatin. Protease I was also inhibited weakly by o-phenanthroline. These unusual proteases may have potential for specific food treatment applications.     

荷叶离褶伞子实体、菌丝体和发酵液营养成分比较分析

检验荷叶离褶伞子实体、菌丝体及菌丝体发酵液中的营养成分。粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗多糖、维生素、氨基酸、矿物质的种类与含量分别按食品营养成分测定的国家标准方法进行;粗多糖含量按《保健食品检验与评价技术规范》(2003 版)检验。结果表明：该菌子实体、菌丝体和菌丝体发酵液中分别含有粗蛋白21.4%、28.3%、0.084%;粗脂肪1.44%、2.78%、0.11%;粗纤维9.52%、5.32%(菌丝体发酵液未测);碳水化合物53.04%、54.7%、2.82%;粗多糖3.55%、1.77%、0.12%;氨基酸总和分别为16.82、19.8、0.088g/100g,氨基酸种类分别为17、18、6 种;其中含赖氨酸1.13、1.18、0g/ 100g;维生素种类分别为5 、5 、4 种,其中含烟酸21.2、25、0.084mg/100g;矿物质分别含有7、5、1 种,其中含硒0.013、0.080、0mg/kg。该菌子实体、菌丝体及菌丝体发酵液营养丰富,开发利用价值大。     

榆干离褶伞发酵液的溶栓与降血脂作用

研究了榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,L.u)发酵液的体外溶栓作用和降血脂作用。将血凝块与L.u发酵液37℃恒温孵育,测定血凝块溶解时间;观察给予L.u发酵液后对小鼠体内出、凝血时间的影响;采用高脂血症动物模型,观察L.u发酵液对血脂水平的影响。结果显示,L.u发酵液明显延长凝血时间及出血时间,明显降低高脂血症小鼠总甘油三酯和总胆固醇含量。可以证明,L.u发酵液具有溶栓作用,其机制可能与其抗凝作用和降血脂作用有关。