牛乳酪蛋白双联胶体金免疫层析试纸条的研制

原料羊乳中掺入牛乳会对其制品的食品安全造成损害.本研究的目的是建立一种免疫层析试纸条的检测方法检测羊乳原料乳的掺假.以牛乳αs1-CN及牛乳β-LG为检测对象,制备两者的特异性抗体,建立双联胶体金免疫层析试纸条.该实验制备的多克隆抗体α-CN IgG和β-LG IgG蛋白质浓度分别为4.86和5.99 mg/mL,两种抗体的效价为1∶25 600和1∶204 800,制备的胶体金溶液最适pH值为8.0,最佳蛋白标记量为10μL,且β-LG IgG中α-CN IgG的最适掺入量为20%.试纸条以玻璃纤维素膜VL68作为金标垫、硝酸纤维素膜SarteriesCN 95作为NC膜,分别用6μL,1 mg/mL的α-CN IgG,6μL,1 mg/mL的β-LG IgG包被NC膜T线、用6μL,1mg/mL二抗包被C线.该试纸条可特异性的检测出α-CN和β-LG,无明显的交叉反应,且可检出的牛乳最低掺入量为5%.     

以DNA为靶标的植物油检测技术研究进展

为系统梳理以DNA为靶标的植物油检测技术,为其有效地应用及相关研究的开展提供思路,综述了植物油中DNA提取方法、以DNA为靶标的掺假植物油、转基因植物油的检测技术以及植物油油料品种溯源技术.分析结果表明,掺假植物油和转基因植物油的检测主要是以油料作物种属特异性基因或转入的外源基因为靶标进行PCR检测;植物油的油料品种溯源技术主要是利用具有品种特异性的油料作物分子标记技术.目前,植物油脂中的DNA提取方法日渐成熟,以DNA为靶标的植物油检测技术已具有很好的应用前景.     

绿色木霉DNA提取方法研究

利用CTAB法、简化CTAB法、氯化苄法和快速提取法等4种方法提取了绿色木霉DNA,并采用琼脂糖凝胶电泳和PCR对DNA进行了评价.凝胶电泳检测结果表明4种方法均可提取到绿色木霉DNA,但PCR检测结果表明只有CTAB法和简化CTAB法提取的DNA可用作CBHII基因的PCR模板.     

变性与非变性电泳对牛羊乳蛋白质差异比较研究

主要采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS—PAGE）和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Native—PAGE）对新鲜牛羊乳及其酪蛋白清蛋白的区别进行分析检测,对比研究两种电泳方法测定结果的差异,并用两种方法分别检测了掺入不同浓度牛乳的羊乳样品．结果显示SDS—PAGE法对牛羊乳酪白质的分离效果好,该条件下牛羊乳的区别主要是酪蛋白aS2-CN和aS1-CN,而native—PAGE法则是对清蛋白分离效果较好,该条件下的主要区别是牛乳较羊乳多两条伊乳球蛋白．两种电泳方法对掺入不同浓度的羊乳样品的检测阈值均为5％,但native—PAGE效果更明显．     

一种微波快速提取可用于qPCR的酵母基因组DNA的方法

研究微波快速提取可用于qPCR分析的酵母基因组DNA的方法.在微波作用下分别采取干法和湿法制备酵母基因组DNA样品提取物与试剂盒法制备的提取物进行比较,通过紫外分光法、琼脂糖凝胶电泳、常规PCR及qPCR等方法检测提取物浓度与纯度.结果表明微波法提取物可用于常规PCR分析,其中微波干法提取物用于qPCR分析可获得准确的检测结果.     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良 CTAB 法提取玉米产品的基因组 DNA,应用 PCR 检测方法,并以玉米特异性内源基因 IVR 为内参,花椰菜花叶病毒 35S 启动子(CaMV35S 启动子)、农杆茵胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分.实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品.     

花生制品中金黄色葡萄球菌SYBR Green qPCR快检方法的评价研究

金黄色葡萄球菌是花生及其制品中常见的一种食源性致病菌,针对金黄色葡萄球菌的快速检测方法对实现花生及其制品中的食品安全防控有重要意义.根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)设计了3对特异性引物,同时优化了退火温度,成功建立了一种特异性引物的SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测方法,进一步对该方法的特异性、重现性及灵敏度进行了验证.以8种模拟污染花生加工产品为实验对象,对该方法与荧光定量PCR试剂盒-探针法及商品化Baird-Parker干粉培养基法进行了评价研究.结果表明,建立的SYBR Green qPCR快速检测方法特异性和重现性良好,最低检测限为8.99 copies/μL,其灵敏度比荧光定量PCR试剂盒-探针法高2个数量级. SYBR Green qPCR快速检测方法具有成本低、检测快速、特异性好、灵敏度高的优点,可用于花生及其制品中金黄色葡萄球菌的快速检测,也可为防控其他食品中的金黄色葡萄球菌污染提供参考.     

玉米须总DNA提取方法的建立

确定一种玉米须总DNA的提取方法.[方法]分别利用CTAB法和SDS法提取干燥和新鲜玉米须的总DNA,经过琼脂糖凝胶电泳进行定性检测,通过紫外分光光度法进行含量和纯度测定,确定适合玉米须DNA提取的方法.[结果]利用CTAB法和SDS法提取干燥玉米须的总DNA,产物呈淡黄色,经过琼脂糖凝胶电泳,几乎看不到明显的条带;利用上述两种方法提取新鲜玉米须的总DNA,电泳条带明显,CTAB法提取DNA浓度为11.5μg/m L,A_(260)/A_(280)为2.2,而SDS法提取DNA浓度为15.8μg/m L,A_(260)/A_(280)为1.9.[结论]新鲜玉米须中总DNA更容易提取;SDS法提取出的DNA浓度与纯度均优于CTAB法,更适宜用于新鲜玉米须DNA的提取.     

芦丁鼠李糖苷酶基因多位点突变的修复

任何与原模板不匹配的碱基都可掺入到PCR产物中,形成“不配或错误”.该现象为创造定点突变,基因修复提供了简便易行的方法.利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶对芦丁鼠李糖苷酶基因的多个突变位点进行修复,获得100%的修复成功率.     

奶粉基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合奶粉材料进行分子标记检测的DNA提取方法,以市售奶粉为材料,采用6种不同的方法提取基因组DNA,并比较这6种方法的提取效果．结果表明,除异丙醇沉淀法和十二烷基硫酸钠法(SDS法)外,其他4种方法提取的基因组DNA均适用于聚合酶链式反应(PCR)检测．同时,结合基因组DNA的纯度和质量浓度,明确奶粉基因组DNA提取方法的优劣依次为:热解法、异硫氰酸胍法、高盐低pH法和十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)．     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良CTAB法提取玉米产品的基因组DNA,应用PCR检测方法,并以玉米特异性内源基因IVR为内参,花椰菜花叶病毒35S启动子（CaMV35S启动子）、农杆菌胭脂碱合成酶终止子（NOS终止子）为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分。实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品。     

人溶菌酶/乳铁蛋白双基因重组质粒在牛乳腺细胞中的表达

研究检测人溶菌酶/乳铁蛋白双基因重组质粒pEBH-IL在牛乳腺上皮细胞中的表达。采用脂质体转染技术,将pEBH-IL质粒DNA导入体外培养的牛乳腺上皮细胞中。加入G418对转染的细胞加压筛选,获得稳定转染的细胞。采用绿色荧光蛋白(EGFP)和PCR方法检测牛乳腺细胞基因组中的目的基因,并采用Westhorn Blot对重组质粒在牛乳腺细胞表达产物进行检测。试验表明:G418筛选获得稳定转染的细胞,对照组加压后第7 d细胞全部死亡,转染组第12~15 d汇片达80%左右;在荧光显微镜下观察到EGFP表达;PCR检测到目的基因;阳性细胞培养液中检测到目的蛋白的表达。结果表明:以人溶菌酶/乳铁蛋白为目的基因构建的重组质粒pEBH-IL在牛乳腺细胞中具有表达功能。     

肉类掺假检测技术研究进展

肉类掺假行为不仅侵害了消费者的利益,甚至危害到消费者的身体健康.因此,对肉类制品成分的检测及其质量的控制监管十分必要.针对这种现象,主要综述以ELISA、PCR、电子鼻技术为主的快速检测方法,并表述了这些技术在近几年的发展进程和存在的一些不足.     

酸面团中微生物基因组DNA提取方法的优化

为有效提高酸面团中微生物基因组DNA的提取纯度与浓度,采用改良的CTAB法、STES法以及两种不同的基因组DNA提取试剂盒对酸面团中微生物基因组DNA进行了提取,并且重点优化了酸面团样品的前处理方法,经分光光度法和电泳法检测,确定了采用不同方法所获得DNA产物的浓度与纯度.结果表明:离心沉淀法、洗去面筋法和烘干法3种前...     

以DNA为靶标的芝麻油定量PCR检测技术

根据GenBank中芝麻种属特异性基因序列,利用分子生物学软件oligo7.60在其保守区设计并合成相应的特异性引物,提取芝麻DNA作为标准品模板,采用荧光定量PCR建立了芝麻油的定量检测技术。结果表明:芝麻特异性引物S199对芝麻DNA的定量检测效果最好。在芝麻油中以不同比例掺入其他食用油(大豆油),利用qPCR进行定量分析,最低检出限为1%。     

一种植物基因组DNA快速提取方法的建立与评估

植物基因组脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)的提取是植物分子实验的基础,但随着样本数量的增加,基因组DNA的提取成为植株基因型鉴定以及单核苷酸多态性检测等分子实验的限速环节.为解决现有技术中提取植物基因组DNA过程繁琐、耗时耗力的问题,从提取液配方和提取条件等方面改良常规快速植物基因组DNA提取法,缩短了样本制备时间并简化了提取步骤,改良后每个样本DNA制备需时不到90 s,同时采用96孔板和配套设施显著提高了实验通量.该方法对植物样本的状态要求低、扩增效率高、成本低,适用于拟南芥、水稻和玉米等多种植物基因组DNA的提取与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增实验,尤其适用于大样本量的规模化基因型鉴定.     

芦丁鼠李糖苷酶基因多位点突变的修复

任何与原模板不匹配的碱基都可掺入到PCR产物中,形成“不配或错误”。该现象为创造定点突变,基因修复提供了简便易行的方法。利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶对芦丁鼠李糖苷酶基因的多个突变位点进行修复,获得100%的修复成功率。     

超声波破碎法提取活性污泥DNA及其DGGE分析

为快速提取活性污泥中的微生物DNA,进一步应用于变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分析其群落结构,采用细胞超声波破碎法直接提取反应器活性污泥DNA,以16S rRNA V3区域通用引物进行PCR扩增,随后利用DGGE技术对扩增产物的多样性进行评估.结果表明,超声波破碎法可以快速地提取活性污泥DNA,用超声波破碎法提取到的活性污泥克服了PCR扩增困难的问题.在一定的超声波功率下,超声时间对DNA产率、PCR扩增效率和DGGE分析均有很大影响,实验的最佳超声时间为27 s.DGGE分析表明,用该法提取到的DNA种类较为丰富,多样性较好,种群强度最高能达到0.7 OD,能够进一步应用于群落结构分析.     

DNA条形码技术在动物角制品鉴别中的应用

利用动物线粒体12 S rRNA和16 S rRNA基因序列片段对动物角制品进行种属鉴别,为DNA条形码技术在角制品分子鉴定提供有效方法.收集犀牛角、水牛角、黄牛角和山羊角作为研究材料,采用优化提取步骤的商业化提取试剂盒进行基因组DNA的提取,以提高基因组DNA的浓度及质量.采用PCR扩增及测序技术获得所有样本12 S...     

花生PCR模板提取方法的研究

用改良的CTAB法和煮沸法两种方法提取花生基因组DNA.紫外分光光度法和0.8%水平琼脂糖凝胶电泳检测结果表明:改良的CTAB法虽然步骤多,但所提DNA的质量和纯度比煮沸法高,且都符合一般分子生物学反应DNA的最佳质量要求.