三七茎叶皂苷对大鼠离体心肌凋亡的保护作用

为了研究三七茎叶皂苷(Pn GL)对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型心肌细胞凋亡的保护作用机制,采用TUNEL和免疫印迹(Western blot)蛋白方法检测细胞凋亡及凋亡基因蛋白Bcl-2、Bax、ERK1/2等相关凋亡通路,观察Pn GL对心脏缺血/再灌注损伤后心肌细胞凋亡的保护作用机制。TUNEL结果显示,正常细胞核形态大小较为一致、荧光较弱,而凋亡细胞核呈高亮;空白对照组可见少量TUNEL阳性细胞;模型组阳性细胞显著增加;给予PnGL后凋亡细胞所占比例随着药物浓度的增加而明显下降。Western blot实验结果显示,与空白对照组比较,缺血/再灌注组中心肌细胞Bcl-2表达明显降低,Bax表达明显增加,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显降低;给予PnGL后,Bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显升高。因此,Pn GL对缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其保护作用可能与激活ERK1/2细胞凋亡保护通路、从而调节Bcl-2和Bax的表达有关。     

BI-1通过抑制内质网应激诱导的细胞凋亡减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤

探讨慢病毒介导BI-1过表达对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)过程中细胞凋亡的影响.BI-1过表达慢病毒溶液侧脑注射后,采用血管内穿刺法建立SAH后EBI大鼠模型.于造模后不同时间点对大鼠进行神经行为学评估.于造模后24h,检测大鼠脑含水量,HE染色观察海马神经元组织形态学变化,TUNEL染色观察海马组织神经元细胞凋亡情况,Western blot检测BI-1蛋白以及内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78和Caspase-12的表达情况.实验结果表明,BI-1过表达可减轻SAH后大鼠神经功能障碍、脑水肿程度和神经元细胞的损伤;TUNEL染色结果显示,BI-1过表达可抑制SAH后大鼠神经元细胞的凋亡;Western blot结果表明,SAH可激活内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78和Caspase-12的表达,而BI-1过表达却又抑制了SAH后内质网应激相关蛋白的激活.因此,BI-1过表达可通过抑制内质网应激诱导的神经元细胞凋亡,从而减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的机制

研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制.实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western 印迹分别检测MG132 对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果表明,MG132能够选择性抑制肝癌细胞生长,对正常肝细胞没有明显影响.此外,MG132可以通过内质网应激途径诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,呈现剂量和时间的双重依赖性.提示通过抑制蛋白酶体来达到诱导肿瘤细胞凋亡的方法是可行的,MG132此类药物的研究与应用将为肿瘤治疗提供新的选择.     

打印室PM2.5导致的体内外损伤与机制探究

为研究打印室PM2.5造成的体内外损伤及其机制,建立了细胞和小鼠模型来评估打印室PM2.5对细胞和肺损伤的影响及其可能的机制。结果表明:打印室PM2.5明显上调了细胞和小鼠体内磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)蛋白表达量,而磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的激活,促进基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达量上调,MMP-2表达量上调加剧了细胞以及小鼠肺部纤维化的形成,同时,血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达量被下调,导致了血管生成的抑制作用(P<0.05)。打印室PM2.5还下调了小鼠体内B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量,同时,上调了Bcl-2同源水溶性蛋白(BAX)的表达量。当这2个蛋白表达比例变化时,可以激活凋亡启动子Caspase-8和执行子Caspase-3,所以Caspase-8和Caspase-3蛋白的表达量在打印室PM2.5处理组中上调(P<0.05),预示了凋亡的开始。综上所述,打印室PM2.5的暴露明显加剧了细胞和小鼠体内纤维化、小鼠体内凋亡的发生,对长时间待在打印室的人员构成潜在威胁。     

戊型肝炎病毒感染调控TLR3信号通路的研究

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是导致急性戊肝的主要原因.通过建立基因IV型HEV感染A549细胞模型,研究病毒感染后TLR3信号通路相关因子表达的变化.病毒感染A549细胞后通过实时荧光定量PCR检测IFN-β的mRNA表达量,Western blot分析磷酸化IRF3(pIRF3)和IKKε蛋白表达水平的变化.结果表明:HEV感染A549细胞后细胞内IFN-β的相对表达水平显著下降,TLR3信号通路介导的pIRF3及IKKε蛋白在病毒感染后表达量显著下降.基因Ⅳ型HEV能够抑制TLR3信号通路介导的IRF3的磷酸化及IKKε蛋白的表达,从而抑制了IFN-β的表达,为进一步研究HEV复制机制和致病机理奠定基础.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导KG-1细胞凋亡的机制研究

研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-kB与凋亡蛋白PARP表达的影响.采用（CK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;Western blot检测NF-kB活性及与凋亡相关的蛋白变化情况.CCK-8法检测结果表明,MG132能明显抑制KG-1细胞生长,并呈现时间依赖性和浓度依赖性;Hoechst染色和Western blot检测实验证明,MG132诱导KG-1细胞发生凋亡的同时,NF-kB活性明显降低,细胞凋亡蛋白PARP降解为P89蛋白.以上结果显示,MG132能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制NF-kB信号转导通路,下调NF-kB表达继而增加凋亡蛋白PARP剪切有关.     

肾下腹主动脉移植骨髓间充质干细胞治疗脊髓缺血再灌注损伤大鼠模型的建立

干细胞移植是治疗脊髓损伤的研究热点和重要方向,目前移植途径多为局部注射和静脉注射.本研究在建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)改良模型基础上,经肾下腹主动脉向缺血节段脊髓分别输注不同数量Hochest 33342标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)悬液.采用BBB评分观察大鼠后肢功能变化,镜下观察BMSCs体内分布情况.结果显示,移植100万和200万细胞数组L2脊髓内荧光细胞分布率和术后6d、12d BBB评分显著高于50万细胞数组和培养基输注组.以上结果说明经肾下腹主动脉输注的BMSCs能够在缺血再灌注损伤脊髓内存活并促进脊髓功能恢复,最佳移植细胞数为每只大鼠推注100万细胞.     

BAPTA-AM脂质体抗大鼠急性肾损伤作用

为了观察BAPTA-AM脂质体(BAPTA-AM liposome,BA-L)抗大鼠缺血再灌注引起的急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)作用,采取夹闭双侧肾动脉45min后再灌注一定时间致大鼠AKI模型,BA-L治疗组于再灌注开始时立即尾静脉注射BA-L.再灌注24h,检测各组大鼠血清Cr,BUN,Cys C,LDH水平与肾组织匀浆MDA含量和SOD活性,HE染色观察肾组织病理学变化.给予BA-L治疗后AKI大鼠血清Cr,BUN,Cys C,LDH及肾组织匀浆MDA含量显著降低,SOD活性增强,肾功能明显改善,HE染色显示BA-L明显减轻肾小管损伤.结果表明BA-L能显著减轻缺血再灌注引起的大鼠急性肾损伤.     

β-磷酸三钙与透明质酸钠复合交联支架材料的生物相容性研究

制备了透明质酸钠与β-磷酸三钙复合材料,对复合材料进行化学交联改性,将交联与未交联的HA/β-TCP复合支架与骨髓间充质干细胞共培养,研究支架材料调控BMSCs增殖或凋亡的过程,评价线粒体应激信号通路在调控过程中的作用。通过对样品细胞毒性的CCK-8试剂盒测试、细胞黏附实验、细胞Hoechst/PI染色实验、细胞凋亡率的流式细胞仪检测、以及线粒体机制Bax与Bcl-2相关蛋白表达的Western Blot检测,发现交联HA/β-TCP复合支架材料与未交联材料相比,生物相容性更好,能从线粒体机制更有效地抑制细胞凋亡。HA/β-TCP支架材料有望在软骨组织工程中得到广泛应用。     

糖尿病引发相关组织细胞异常凋亡病变之综述

糖尿病是一种代谢失调性内分泌疾病,会引发视网膜细胞、胚胎细胞、血管内皮细胞、肾细胞、神经细胞等组织细胞的异常凋亡和病变,其引发凋亡的机制主要与三条通路密切相关:线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路.这三条通路间相互联系,并且与Pax-3蛋白分子、含半胱氨酸的天冬氨酸特异性蛋白酶家族分子及一些胞内信号转导分子构成一个复杂网络对组织细胞的凋亡进行调控.     

tDCS对中风大鼠功能恢复和Notch信号通路的影响

临床研究表明,在大鼠双眼眶上孔、眶下缘和鼻交点处采用经颅直流电刺激(transcranial direct current stimulation,t DCS)有助于中风后的康复.然而,tDCS的潜在神经生物学机制仍然知之甚少.本研究主要关注卒中后tDCS疗法对功能恢复和Notch信号通路的影响.采用大鼠中脑动脉闭塞(middle cerebral arterial occlusion,MCAO)再灌注模型,将实验动物随机分为缺血组(MCAO)和缺血后治疗组(MCAO+t DCS),采用神经系统严重程度评分(modified neurological severity score,m NSS)结合动物的行为学表现对神经功能的恢复进行评估.通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazole chloride,TTC)染色从组织学上比较治疗前后大鼠脑缺血组织损伤的恢复情况.应用实时定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)测定缺血性脑中Notch信号通路中受体蛋白、配体蛋白及下游因子的基因表达变化.结果表明,大鼠脑缺血可以激活Notch信号通路,采用多导联脑反射仪的t DCS疗法可以提高Notch信号通路中Notch1、NICD、RBP-JK和Hes-1的mRNA水平,促进神经功能的恢复,并显著减少脑梗死的体积.多导联脑反射仪的t DCS疗法有望发展为一种可靠的临床治疗方式.     

基于精细解剖结构的左心室心肌缺血仿真

为解释心肌缺血诱发心律失常的机理,基于精细的人体心脏解剖数据,构建了一个整合的人体心室组织模型,并模拟了心肌缺血对折返波的影响.在处理无通量边界问题上,采用相场法来自动处理复杂的边界条件.通过增加缺血区域内细胞外钾离子浓度值,模拟了心肌缺血环境下折返波的传播过程.实验结果表明,折返波会随着缺血程度的改变而变化.随着缺血...     

ATP对大鼠成肌细胞抗H_2O_2凋亡模型分析

为了探讨解决L6大鼠成肌细胞被H2O2损伤的问题,分别用1.210 48、2.420 96、4.841 92 g/L ATP溶液对成肌细胞处理后,利用MTT法、流式细胞仪和荧光凋亡抗体检测了细胞损伤程度.结果表明,经H2O2损伤后L6成肌细胞存活率明显降低,凋亡率增加.各种剂量ATP溶液均能提高L6成肌细胞的存活率,促使抗凋亡因子bcl-2表达增加,促凋亡因子bax表达降低,减少凋亡的发生.其保护程度随ATP溶液剂量的减少而增强,在1.210 48 g/L剂量时效果最为显著.ATP溶液对H2O2诱导损伤的L6大鼠成肌细胞具有明显保护作用,其机制是通过mTOR/STAT3信号通路增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,从而与抑制细胞凋亡有关.     

栝楼籽蛋白酶解物对氧化损伤HepG2细胞的保护作用

为研究栝楼籽蛋白酶解物(Protease hydrolysates of trichosanthes seed, PHTS)对氧化损伤的人肝癌细胞株HepG2的抗氧化保护作用,构建H₂O₂诱导的HepG2氧化损伤细胞模型,检测细胞存活率、细胞总谷胱甘肽(Glutathione, GSH)及细胞分泌NO情况;并分析过氧化氢酶(Catalase, CAT)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)的表达情况。分别设置空白对照组、H₂O₂损伤组、PHTS实验组和GSH阳性对照组。结果显示：与空白对照组相比,H₂O₂损伤组的细胞存活率、细胞总GSH水平、NO分泌量、抗氧化酶CAT和SOD基因表达与蛋白表达水平均显著降低;在PHTS实验组,细胞存活率、总GSH水平、NO分泌量、CAT和SOD的基因表达与蛋白表达水平均明显增加(p<0.05),表明栝蒌籽蛋白酶解物可有效增强HepG2细胞的抗氧化保护作用。因此,栝楼籽蛋白酶解物具有细胞...     

石榴酸诱导子宫内膜样腺癌细胞凋亡的作用机理

研究了石榴酸诱导子宫内膜样腺癌RL-952细胞凋亡的作用机理.以α-亚麻酸和α-桐酸为对照,通过MTT法检测石榴酸对细胞相对活力的影响,并通过荧光显微镜观察细胞核的形态学变化,应用流式细胞术分析细胞的凋亡率.应用蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白的表达,分析石榴酸对PPARγ和p53蛋白表达的影响.应用荧光染料DCFH-DA...     

地西泮保护黑色素细胞氧化损伤的作用及机制

构建了小鼠黑色素细胞B16F10的氧化应激模型,研究了地西泮对B16F10细胞氧化损伤的保护作用及相关机制。选取生长状态良好的B16F10细胞,采用细胞活力实验(MTT)确定氧化应激造模的双氧水浓度和地西泮的合适剂量范围,通过荧光检测验证地西泮对B16F10细胞氧化损伤的保护作用,采用免疫蛋白印迹方法(Western blot, WB)进一步探究地西泮产生保护作用的上游通路机制。实验结果发现,地西泮能够显著逆转细胞的氧化损伤,恢复细胞活力,升高应激状态下抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)的表达,降低促凋亡蛋白Bax(Bcl2-Associated X)的水平,最终保护氧化应激状态下的B16F10细胞。     

Bax蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达

以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,在其石蜡组织切片上采用免疫组化技术探讨Bax蛋白在小鼠睾丸生后发育全过程中的表达规律.结果发现：Bax蛋白在生后1d直至57d的小鼠睾丸组织中均有广泛性的表达,其表达涉及睾丸曲细精管中各类型生精细胞.上述结果表明：小鼠睾丸生后发育过程中各级生精细胞内均有Bax蛋白的存在,但生精细胞中Bax蛋白的表达可能并不意味着这些细胞最终走向凋亡.     

BAPTA-AM对OGD-再灌致HepG-2细胞损伤的保护作用研究

观察BAPTA-AM抗OGD-再灌对HepG-2细胞的损伤作用及其机制.在氧/糖剥夺环境中培养细胞12h后复糖复氧,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)的活性,MTT法检测细胞活力,Annexin V-EGFP/PI荧光染色检测细胞死亡率,A23187拮抗实验及Fura-2/AM测定细胞内游离钙浓度等方法,评价BAPTA-AM抗氧/糖剥夺-再灌注致HepG-2细胞损伤的作用.BAPTA-AM能明显抑制OGD-再灌引起的HepG-2细胞培养液中的LDH、ALT、AST水平的升高,抑制HepG-2细胞的坏死和细胞内游离钙浓度的升高,明显提高HepG-2细胞活力,A23187减弱BAPTA-AM保肝作用.BAPTA-AM通过降低细胞内游离钙浓度,明显减轻OGD-再灌对HepG-2细胞的损伤.     

前列腺癌中miR-612调节能量代谢、细胞增殖和凋亡的研究

探讨miR-612在前列腺癌中调节能量代谢、细胞增殖和凋亡中的作用.通过用miR-612转染LNCaP细胞,测量葡萄糖消耗、乳酸产生、细胞增殖、细胞凋亡和糖酵解相关蛋白.采用定量PCR方法,通过测定葡萄糖摄取率,乳酸产生水平;通过MTT、Western blot和FACS方法,验证miR-612对前列腺癌细胞能量代谢、增殖和凋亡的影响.转染miR-612后,LNCaP细胞的葡萄糖消耗、乳酸产生和细胞增殖减少,LNCaP细胞可观察到更显著的早期凋亡.用miR-612转染后,糖酵解相关蛋白HK2和PKM2的表达降低.研究结果显示,miR-612在前列腺癌细胞系中的过表达抑制了糖酵解和增殖,并增加了细胞凋亡.miR-612参与前列腺癌的糖酵解并发挥抑癌基因作用,并与前列腺癌的增殖和凋亡有关.     

金刚纂二萜成分抗炎活性研究

研究药用植物金刚纂中二萜化合物的抗炎活性.运用脂多糖(LPS)体外诱导的巨噬细胞炎症模型,干燥茎的75%丙酮水提取物显示对NO产生具有明显抑制作用,对活性部位分离纯化得到的19个二萜类化合物进行抗炎活性研究.结果显示:该19个化合物对RAW264. 7细胞活力没有影响,化合物1,4,18明显抑制LPS激活的巨噬细胞中NO的产生,并且呈量-效依赖关系(P 0. 05),其IC50值分别为:22.7、37.1和19.0μmol/L;此外,这三个化合物能够抑制炎症因子IL-6和TNF-α的分泌以及iNOS和COX-2蛋白的表达,表现出明显的抗炎活性.进一步研究发现,这三个化合物不同程度抑制p38MAPK的磷酸化,其抗炎活性可能是通过抑制MAPKs信号通路发挥作用.