产聚半乳糖醛酸酶菌株Asperaillus niger M-8的筛选及产酶条件研究

从腐烂的葡萄干中定向分离筛选出适合液态发酵法生产聚半乳糖醛酸酶的菌株M-8,鉴定为黑曲霉(Asperaillus niger)。经摇瓶产酶实验可知,此菌株的产酶培养基组成及发酵条件为:果胶0.7%,NaNO30.1%,MgSO40.02%,FeSO40.001%,KH2PO40.03%,豆粉1.0%,马铃薯20.0%;培养温度28℃,初始pH7.0,装液量50mL/250mL,接种量7%(v/v),培养时间48h。在此优化发酵条件下,酶活力达964U/mL。该菌株生长周期短,产酶性状稳定,在食品领域有良好的应用前景。     

柑橘果渣固态发酵产聚半乳糖醛酸酶

通过固态发酵,实现黑曲霉（Aspergillus niger）发酵生产聚半乳糖醛酸酶（PG）。以葡萄渣、苹果渣和柑橘渣为底物,利用黑曲霉18-23发酵生产聚半乳糖醛酸酶,考察不同果渣底物、可溶性碳源对胞外聚半乳糖醛酸酶合成的影响,并对该酶酶学性质进行研究。结果表明,柑橘渣最适合聚半乳糖醛酸酶的生产,苹果渣次之,二者的PG酶活力分别为56.9 U/g和42.1 U/g。乳糖对聚半乳糖醛酸酶的合成有诱导作用,可促进酶活力的增加,而槐糖无诱导作用,葡萄糖会抑制聚半乳糖醛酸酶的合成。聚半乳糖醛酸酶最适温度为50 ℃,最适pH值为5.5,且在温度40～50 ℃、pH 4.0～5.5稳定性良好,表明该酶在食品工业中具有潜在的应用价值。     

产聚半乳糖醛酸酶的黑曲霉诱变育种

利用透明圈法对黑曲霉SH312菌株进行初筛,得到黑曲霉SH312-26菌株。对其进行紫外线诱变,筛选出SH312-26-19菌株,该菌株聚半乳糖醛酸酶酶活力为113.68kU/mL,较出发菌株SH-312-26提高了1.44倍;果胶酯酶酶活力为14.34kU/mL,较出发菌株提高了0.14倍,其幅度远小于聚半乳糖醛酸酶酶活的提高幅度。突变株SH312-26-19经斜面传代培养了5代,产酶遗传特性稳定。     

嗜热侧孢霉液体发酵产聚半乳糖醛酸酶条件优化

对嗜热侧孢霉(Thermophilic sporotrichum)液体发酵产聚半乳糖醛酸酶条件进行研究。得出最佳产酶培养基条件为：麸皮1.5%、(NH4)2SO4 0.5%、苹果皮粉3%、KH2PO4 0.1%、MgSO4·7H2O 0.025%,pH6.0;发酵条件为：装液量45mL/250mL 三角瓶,培养温度50℃,转速170r/min,培养时间96h。最佳条件下培养,酶比活力为2768.97U/mL。     

一株高产碱性聚半乳糖醛酸酶生产菌的分离与鉴定

从土壤中经分离筛选得到1株产碱性聚半乳糖醛酸酶活力较高的菌株,并从形态特征、培养特征、生理生化特征以及分子生物学方面进行了鉴定,结果表明该菌株属B.clausii。     

黑曲霉果胶裂解酶和聚半乳糖醛酸酶合成的发酵调控

通过对黑曲霉(Aspergillus niger)wz 003液态发酵过程的调控,制备了高活性的果胶裂解酶,并讨论了发酵过程中聚半乳糖醛酸酶活力的变化情况。实验表明,发酵产酶培养基组成为(g/L):麸皮60,玉米粉40,酵母膏20,胡萝卜12,CaCO_3 10。培养条件为:初始pH 6.5,30℃,接种量8%,培养2 d。此时果胶裂解酶活力为375.3 U/mL,为基础条件下的6.225倍,而聚半乳糖醛酸酶的合成得到了有效控制,酶活仅为29.4 U/mL。改变发酵条件,有利于聚半乳糖醛酸酶的发酵生产,此时酶活力为基础条件下的5.05倍。     

重组聚半乳糖醛酸酶PGB的生化特征及其酶解产物活性分析

解析重组聚半乳糖醛酸酶PGB的酶学性质,研究PGB制备的果胶水解物的基本成分和生物学活性。通过摇瓶发酵制备聚半乳糖醛酸酶酶液,研究其基本酶学性质。再在最优作用条件下对果胶进行水解,并考察水解产物的组成、抗菌活性和抗氧化活性。在摇瓶发酵水平,黑曲霉聚半乳糖醛酸酶PGB的酶活达到10790 U/m L;该酶的最适作用温度和p H分别为55℃和5.0;在40℃或p H4.0⁶.0条件下具有较好稳定性。Mg²⁺和Cu²⁺对其活性有促进作用,K⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、Co²⁺、Fe³⁺和Fe²⁺等对其活性均有不同程度的抑制作用;它对低酯果胶的K_m和V_max分别是0.756 mg/m L和9.225 mg/（m L·min）。高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）的分析表明,PGB对果胶的酶解产物是半乳糖醛酸单体和聚合度2⁴为主的寡聚半乳糖醛酸,它对金黄色葡萄球菌的生长有显著抑制作用,其最小抑菌浓度和抗氧化活性分别为0.64 mg/m L和6.125 U/m L。      

抑制剂对商品果胶酶中果胶酯酶和聚半乳糖醛酸酶酶活的影响

比较了高氯化铁,硫酸亚铁,甘氨酸,L-谷氨酸钠以及脲(尿素)5种化学试剂对商品果胶酯酶中果胶酯酶(PE)和聚半乳糖醛酸酶(PG)的酶活抑制效果,发现高氯化铁,硫酸亚铁,和L-谷氨酸钠对聚半乳糖醛酸酶酶活均具有明显且相似的抑制作用,在一定的浓度范围内,随着浓度的增加,其抑制效果逐渐增强,超过此浓度,其抑制能力不再增强。而甘氨酸并不具有很好的抑制能力,对于果胶酯酶来说,上述几种试剂对其都没有抑制作用。脲(尿素)对两种酶均有抑制作用,其对聚半乳糖醛酸酶酶活的抑制作用要强于果胶酯酶。     

动态高压微射流对聚半乳糖醛酸酶的影响

利用动态高压微射流(DHPM)处理聚半乳糖醛酸酶(PG),通过对酶活、圆二色谱、紫外光谱和巯基含量的测定,研究DHPM对PG酶活性和构象的影响.结果显示,经75,125,175 MPa的动态高压微射流处理后,PG酶的相对活性分别为93.2%、95.3%和91.2%;125 MPa分别处理2、3次后,PG酶的相对活性分别为97.4%、88.2%.分子构象分析表明,经不同压力DHPM处理后,PG酶的β-折叠含量有不同程度降低,PG 酶分子结构更为"松散",原来包埋在分子内部的TrP和Tyr残基部分暴露出来,分子表面的二硫键被打断形成巯基,但从分子整体来看,新的二硫键形成的量要多于被打断的量.     

壳寡糖修饰多聚半乳糖醛酸酶优化条件研究

以水溶性低分子量壳寡糖作为修饰剂对已纯化的多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰,通过单因素试验和正交试验探讨pH值、温度、修饰时间、壳寡糖的用量等因素对修饰效果的影响和最佳修饰条件的优化筛选.结果表明,通过正交试验筛选出最佳修饰反应条件为:80 mg活化的多聚半乳糖醛酸酶,反应体系中pH为4.0,反应温度为3℃,反应时间为12h,壳寡糖用量为150 mg,修饰效果最佳.利用此条件对多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰具有显著的激活作用,修饰后酶的比活力是340.10 U/mg protein,比修饰前提高了153.42％.     

高产阿魏酸酯酶菌株的筛选及其产酶条件优化

通过初筛、复筛从茯砖茶中筛选到了1株产阿魏酸酯酶活力较高的菌株,经个体形态和菌落特征初步鉴定其为冠突散囊菌;以阿魏酸酯酶酶活为衡量指标,选取黑毛茶含水量、接种量、培养温度、培养时间为因子,研究确定筛选出来的冠突散囊菌进行固态发酵黑毛茶的产酶条件。结果表明:黑毛茶固态发酵实验中,黑毛茶含水量26%,接种量1‰,温度30℃条件下培养4d,其酶活力最高可以达到142m U/g。     

高产阿魏酸酯酶菌株的筛选及其产酶条件优化

通过初筛、复筛从茯砖茶中筛选到了1株产阿魏酸酯酶活力较高的菌株,经个体形态和菌落特征初步鉴定其为冠突散囊菌;以阿魏酸酯酶酶活为衡量指标,选取黑毛茶含水量、接种量、培养温度、培养时间为因子,研究确定筛选出来的冠突散囊菌进行固态发酵黑毛茶的产酶条件。结果表明:黑毛茶固态发酵实验中,黑毛茶含水量26%,接种量1‰,温度30℃条件下培养4d,其酶活力最高可以达到142m U/g。      

复合诱变选育壳聚糖酶高产菌种及产酶条件优化

以具有产壳聚糖酶能力的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）G10为出发菌,利用紫外和微波对菌株G10进行复合诱变,选育壳聚糖酶高产菌株,并采用正交试验设计对突变株产酶条件进行优化。结果选育出一株产酶活相对较高的突变株W1-32,优化后的产酶条件为果糖1.3%,胶体壳聚糖0.5%,酵母粉2.0%,MgSO4·7H2O 0.3%,初始pH 7.2,温度28 ℃,转速200 r/min。在此优化条件下,菌株W1-32产壳聚糖酶活为11.82 U/mL,是出发菌株G10的6.9倍。该研究为菌种的选育和进一步研究应用提供理论依据。     

赊店老酒酒醅中高产纤维素酶菌种的分离鉴定及产酶条件优化

从赊店老酒酒醅中采用透明圈法筛选产纤维素酶的菌株,经过酶活力测定筛选出产纤维素酶能力最强的菌株,对其进行了形态学观察、生理生化试验和分子生物学鉴定,并通过单因素和响应面试验考察了不同条件对该菌株产纤维素酶能力的影响。结果表明,筛选得到产纤维素酶能力最强的菌株4-2,并被鉴定为特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）。在液体发酵培养基中,该菌株最优产纤维素酶的条件为淀粉添加量3.5%,酵母粉添加量0.6%,初始pH 5.8,培养时间5 d,培养温度34 ℃。此优化条件下,该菌株产纤维素酶活力达3 101.83 U/mL,是优化前的20.69倍。     

一株低产甲醇的果胶酶菌种选育及产酶工艺优化

红枣加工过程中,由于红枣较普通水果含果胶物质高,用普通果胶酶进行酶解后枣汁中的甲醇含量过高,对人体健康有害。实验筛选出产甲醇低的果胶酶产生菌黑曲霉A11,其产甲醇含量比市售果胶酶低3.63%,并通过响应面试验得到A11发酵产酶的最佳工艺条件为发酵液中果胶的添加量2.99%,pH值6.00,温度36℃,接种量为0.5%,发酵时间48h,酶活力7.72U/mL。     

纤维素降解芽孢菌的筛选及产酶条件优化

为筛选高效的纤维素降解芽孢菌,利用刚果红平板染色法初筛,纤维素酶活性（以滤纸酶活表示）为评价指标进行复筛,从腐木中分离筛选出2株高产纤维素酶菌株K1、K2;结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析,分别鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对培养条件进行单因素优化和正交试验优化,初步确定菌株K1最佳产酶条件为培养时间3 d,培养温度34 ℃、初始pH值7.0、接种量5%、装液量40%,在此优化条件下滤纸酶活为98.4 U/mL,是优化前的2.1倍。菌株K2最佳产酶条件为培养时间2 d,培养温度34 ℃、初始pH值7.0、接种量6%、装液量为30%,在此优化条件下,滤纸酶活为86.7 U/mL,是优化前的1.8倍。     

纤维素酶高产菌株产酶条件的优化

通过产酶培养基及产酶条件的优化,确定产纤维素酶菌株N-57的最佳产酶条件.利用液体发酵培养法探讨培养基起始pH值、培养温度、碳源、氮源对菌株N-57产酶的影响.在单因素试验的基础上,通过Box-Behnken响应曲面法筛选出产CMCase的最佳发酵条件:pH值为6;稻草粉浓度为0.30％;(NH4)2SO4浓度为0.30％.在最佳条件下培养,该菌株的CMCase的酶活达到459.54U.     

产中性植酸酶菌株的筛选及产酶条件的优化

对菌BA8的产酶条件进行了单因素和正交试验,探讨了碳源、氮源、磷源等培养基成分和温度、接种量、装液量等培养条件对产酶的影响.结果表明,每1000mL液体培养基最佳组成为可溶性淀粉40g、胰蛋白胨10g、亚硝酸钠8.6g、硝酸铵5.0g、磷酸氢二钾0.10g、氯化钾0.10g、氯化镁0.10g、氯化锰0.09g.摇瓶培养的最佳条件为初始pH值6.0,发酵温度30℃,装液量100mL,接种量7%.优化后酶活可达到241.1U/mL,比未优化前提高了2.21倍.     

产菊粉酶菌株的筛选及产酶条件优化

从盐碱地菊芋根际土壤中筛选出112株产菊粉酶菌株,并从中得到一株酶活较高的真菌A-6,经菌落观察以及采用真菌通用引物ITS1和ITS4 PCR扩增RNA基因序列,测序鉴定结果为烟曲霉Aspergillus fumigatus。对其产酶条件进行单因素分析结果显示,真菌A-6的pH耐受范围较广,且具有一定的耐盐性。经正交实验进行产酶条件优化,确定了A-6的最佳产酶条件为菊芋提取液（EJA）100g/L,酵母膏（YE）25g/L,NaCl为5g/L,NH4H2PO45g/L,pH为5,30℃,170r/min下振荡培养3d,酶活最高为13.29U/mL。      

青霉纤维素酶液体发酵工艺条件的优化

通过摇瓶液体发酵,对青霉生产纤维素酶的条件进行研究,确定该菌种的最适产酶培养基及最优产酶条件.结果表明,最佳培养基配方及培养条件为:稻草粉5％,碳酸钙0.2％,磷酸二氢钾0.1％,硫酸铵0.2％,硫酸镁0.05％,吐温-80 1000mg/L.装量50mL/500mL,自然pH值,30℃,200r/min发酵5d,接种量7％.CMC酶活最高达到785U/mL.