基因工程方法抗甜菜丛根病病毒育种的研究：（Ⅰ）甜菜坏死黄脉病毒外 …

采用含有甜菜坏互黄脉病毒外壳蛋白（ＢＮＹＶＶ ＣＰ）基因的农杆菌，分别以不同甜菜品系的叶柄、下胚轴及子叶为外植体材料进行基因转化研究。含有ＢＮＹＶＶ ＣＰ基因和卡那抗性筛选基因的农杆菌与甜菜组织不同外植体共培养后，经过诱导分化培养，在含有卡那霉素的培养基上，从叶柄及下胚轴分别直接诱导出抗卡那霉素再生芽，而从子叶上只诱导出紧密型绿色愈伤组织，未分化出不定芽。从叶柄及下胚轴诱导两生芽的诱导培养基分别为     

基因工程方法抗甜菜丛根病病毒育种的研究(Ⅰ)甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白基因转化甜菜及植株再生

采用含有甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白(BNYVV CP)基因的农杆菌, 分别以不同甜菜品系的叶柄、下胚轴及子叶为外植体材料进行基因转化研究.含有BNYVV CP 基因和卡那霉素抗性筛选基因(Kanr)的农杆菌与甜菜组织不同外植体共培养后,经过诱导分化培养,在含有卡那霉素(kanamycin)的培养基上,从叶柄及下胚轴分别直接诱导出抗卡那霉素再生芽,而从子叶上只诱导出紧密型绿色愈伤组织,未分化出不定芽.从叶柄及下胚轴诱导再生芽的诱导培养基分别为:MS+BA0.5+TIBA0.2+3%蔗糖+Kan200+Cb500、MS+BA0. 15+NAA0.2+3%蔗糖+Kan100+Cb500.甜菜再生植株诱导频率与甜菜品系、外植体类型、苗龄、温度、TIBA、预处理等因素有关.再生植株生根培养基为:MS+IBA2.0+2%蔗糖+Kan50.     

激素对烟草愈伤组织分化影响的研究

以烟草(Nicotiana tabacum)愈伤组织为材料,研究了不同激素配比及浓度对愈伤组织绿苗分化率、绿苗产量/玻璃苗产量(G/V)等分化指标的影响。试验结果表明:在 MS+IAA0.2mg/L+KT1mg/L 培养基上,可获得较高的绿苗分化率;在含IAA0.5mg/L+6-BA2mg/L 的 MS 培养基上,可获得较高的 G/V 值;当愈伤组织先在附加 IAA 和 KT 的培养基上培养20天,再转至附加 IAA+6-BA 的培养基上培养时,则既可得到较高的绿苗分化率,又可提高 G/V 值。     

基因型对油菜子叶外植体再生植株的影响

为了了解细胞核和细胞质基因在油菜再生中的作用，采用ＭＳ培养基附加不同的激素，对６个基因型相关材料的子地外植体进行了愈伤组织诱导及植株再生研究。愈伤组织诱导频率，生长速度以及不定芽的生根频率，主要受细胞核基因的影响，细胞质施加的影响不明显。     

二步培养和AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响

以甘蓝型油菜（Brassica napus L．）品种浙双758为材料,研究二步培养及添加AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含0．5—1．5mg／L2,4-D的MS培养基上预培养3d或7d诱导愈伤组织的产生,再转到含有3mg／LBA和0．15mg／LNAA及添加或不添加2．5mg／LAgNO3的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明,外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与2,4-D浓度、预培养时间和AgNO3密切相关;分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率;二步培养及添加AgNO3可使半子叶、完整子叶和下胚轴外植体芽再生频率分别达到了96．1％,96．7％和96．7％。     

拳参愈伤组织的诱导及增殖效应的研究

目的研究适宜拳参愈伤细胞的诱导、组织分化及快速生长的培养基成分。方法以拳参的幼嫩叶柄为外植体,接种于附加2,4-D、N A A、6-B A、K T及其组合的M S培养基上,观察拳参愈伤组织的诱导、分化及愈伤细胞的生长状态。结果MS 0.4 mg/L 6-BA 2.0 mg/L NAA对拳参愈伤组织的诱导效果最好。MS 0.2 mg/L 6-BA 2.0 mg/L 2,4-D增殖培养的愈伤组织较适合于器官的分化,MS 0.2 mg/L 6-BA 4.0 mg/L NAA增殖培养的愈伤组织较适合于做细胞悬浮培养的材料。结论建立拳参愈伤组织诱导,愈伤组织分化和愈伤细胞快速增殖体系,为进一步研究药用植物拳参细胞的分子机制及次生代谢等提供资料。     

葡萄幼嫩茎叶切块组织快繁脱毒技术

以葡萄幼嫩茎尖、茎叶切块组织为外植体，以改良ＭＳ为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素和生长素。诱导茎尖，茎叶切块组织，经愈伤组织形成丛生芽，获得大量愈伤组织再生植株，经指示植物鉴定，脱除了病毒。     

花生组织培养及高频率植株再生

以14个花生品种为材料,对花生组织培养及植株再生进行了研究。将花生成熟胚幼叶、子叶和下胚轴外植体接种到添加0—2mg／LNAA和0～10mg／LBAP的MSB,（MS无机盐＋B5有机）培养基上诱导愈伤,再转到添加0～10mg／LBAP的分化培养基上诱导不定芽。结果表明,诱导培养基中添加的激素及其浓度对以后在分化培养基上不定芽分化有重要作用,以添加1mg／LNAA和6mg／LBAP最利于不定芽分化;分化培养基中添加4mg／LBAP利于不定芽伸长及植株再生;幼叶外植体分化不定芽频率明显高于子叶和下胚轴;不同基因型不定芽分化率存在明显差异,白沙1016和花育23幼叶外植体获得了较高的不定芽分化率,分别达到91．8％和88．5％。再生苗经生根培养和驯化后,移栽花盆可正常开花结果。     

植物激素对百合鳞片愈伤组织生长的影响

在植物细胞全能性学说的基础上 ,采用单因子实验 ,分析比较了细胞分裂素 6- BA、生长素 2 ,4- D、生长素NAA等三种植物激素对路易圣特百合鳞茎愈伤组织生长的影响 ,得出诱导愈伤的最佳培养基为 :MS BA0 .0 5 2 ,4-D1 .0 NAA0 .1 ,6- BA浓度达到 1 .0时有利于芽的形成 ,NAA浓度为 0 .0 5时有利于形成小鳞茎。     

烟草雄性不育未受精胚珠离体培养和植株再生

为了探讨烟草未受精胚珠单倍体育种技术，以烟草雄性不育杂交种KRK26为材料，选取5种发育时期的胚珠，在基于H、HW和N6培养基而优化的CM1、CM2、CM3、CM4和CM5 5种培养基上培养，研究了未受精胚珠离体培养诱导单倍体技术。结果表明，在试验范围内胚囊发育越成熟，胚珠的增殖诱导效果越差，应选取发育较早的胚珠（即花朵的花冠即将露出花萼至花冠比花萼长1倍时期的胚珠）进行培养。在5种优化培养基中，以培养基CM1对胚状体的诱导效果最好，在CM1基础上将琼脂浓度调整到10 g/L利于抑制胚状体玻璃化；将胚状体转移到不含激素的H培养基上培养，能够避免胚状体褐化，利于再生芽诱导；将再生芽转移到加有IAA 10 mg/L的H培养基或N6培养基上培养，利于再生芽快速生根，获得大量的再生植株。流式细胞仪检测发现大部分再生植株为单倍体植株。据此，建立了从雄性不育烟草未受精胚珠诱导单倍体植株的培养体系。     

EMS诱变甘蔗愈伤组织的初步研究

为了探索EMS对甘蔗愈伤组织进行化学诱变的合适浓度和时间组合,以ROC22和粤糖93-159甘蔗愈伤组织为材料,研究了不同浓度(8、24、40μmol/L)、不同时间(2、4、6 h)诱变处理对愈伤组织的每克鲜重相对增重量和相对分化率的影响。并通过分化试验选择适合诱变后愈伤组织分化的培养基。结果表明,适合诱变处理后愈伤组织分化的培养基为:MS基本培养基+2 mg/L KT+2 mg/L NAA+3.0%蔗糖(W/V)+0.8%琼脂(W/V)。适合EMS诱变甘蔗的处理为:24μmol/L诱变处理2 h或8μmol/L诱变处理6 h。     

培养条件对紫苏下胚轴外植体再生的影响

以紫苏下胚轴为材料,研究紫苏外植体芽再生的影响因素。结果表明：苗龄、黑暗时间、激素浓度及配比对紫苏芽再生均有较大影响。取13d苗龄的下胚轴先在分化培养基（MS＋3.0mg/L BA＋0.3mg/L NAA）黑暗预培养8d后转为14h/d光照条件培养可获得较高的再生频率。诱导芽苗生根最佳培养基为1/2MS＋1.0mg/L BA＋0.3mg/L IAA。     

银杏愈伤组织培养及其黄酮生物合成的初步探讨

本文采用银杏果实和植株诱发的茎尖和叶尖为原料，筛选银杏愈伤组织生长和继代培养的最佳条件和激素组合；利用继代培养愈伤组织进行细胞悬浮培养并检测黄酮的生物合成量。结果表明：（1）银杏愈伤组织的诱导及继代培养以附加NAA3.0mg/L和BA1.0mg/L的MS培养基效果最好；（2）采用0.1%浓度的植酸可以抑制褐变，并对愈伤组织的生长有促进作用；（3）在培养基中添加5％的蔗糖时愈伤组织增长倍数最高；愈伤组织继代培养40－45d时增长倍数达到最大值；（4）银杏愈伤组织细胞悬浮培养时，细胞生长速度可达6.8倍，黄酮生物合成量为68.76mg/L。     

苦瓜愈伤组织的诱导及培养条件优化

利用不同的激素配比,对苦瓜幼苗的各个器官进行愈伤组织诱导,比较其生长情况。通过实验得出,IAA与6-BA搭配比2,4-D与6-BA搭配对苦瓜愈伤组织的诱导及生长要好。当6-BA质量浓度较高（4 mg/L）时,利于苦瓜愈伤组织的诱导。在优化培养条件时,在MS培养基的基础上添加103.125 mg/L的硝酸铵,100 mg/L的水解酪蛋白,蔗糖质量浓度为30 g/L,激素质量浓度为0.5 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L 2,4-D时,可使苦瓜愈伤组织快速增殖。     

小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化

该实验对5种不同小麦品种的成熟胚愈伤组织诱导和分化进行了研究,结果表明:在MS+2,4-D2.0mg/L培养基上,愈伤组织诱导率平均为96.6%;不同品种间诱导率差异不是很大,愈伤组织的质量与诱导率的高低无关;在MS+2,4-D0.5mg/L+1.5mg/L KT培养基上,分化率可达69.6%。     

葡萄等果树胚乳植株的诱导及幼胚上器官的再分化

山东农学院于一九七六年开始进行果树胚乳培养工作,现已在葡萄等八种果树上诱导出胚乳愈伤组织。在葡萄上获得两个小植株,其中一株具有2枚子叶,10个真叶和较发达的根系,植株生长正常。在苹果、杏和枣可以明显地看出,不定芽是从子叶部位长出外,其他分化的植株,不定芽或胚状体起源正在进行细胞分析鉴定。     

培养基和外源激素对银杏愈伤组织诱导、生长及叶绿素含量的影响

以银杏胚为外植体,通过应用MS、WS、White培养基和不同组合的外源激素研究对愈伤组织的诱导及其叶绿素的含量.结果表明:MS培养基诱导效果最好;外源激素对银杏愈伤组织叶绿素含量的影响程度为KT＞6-BA＞NAA＞2,4-D;1/4MS NAA2 mg/L KT 3 mg/L组合由于有很高的诱导率、较高的生长量、最高的叶绿素含量成为最适宜的培养基.     

烟草愈伤组织辐射诱变抗苯丙氨酸突变体筛选

以K326为材料,研究了L-苯丙氨酸的筛选浓度,γ射线剂量和愈伤组织活化时间对抗苯丙氨酸突变体筛选效果的影响。结果表明:L-苯丙氨酸浓度越高,愈伤组织培养过程中褐变比例越高,细胞活性越低;γ射线剂量和愈伤组织活化时间均对愈伤组织的致死率有较大的影响。综合分析后,采用活化1周的愈伤组织,40Gy的γ射线辐射,以附加3.00mmol/LL-苯丙氨酸的MS培养基为筛选培养基,经多次"筛选—回复"培养,筛选出了苯丙氨酸解氨酶含量显著提高的抗苯丙氨酸细胞系,并诱导分化出再生苗。烟草愈伤组织辐射诱变抗苯丙氨酸突变体筛选体系的建立,为高苯丙氨酸含量烟草材料的培育奠定基础。     

甘蔗组织培养的技术革新

用甘蔗茎锥、心叶等组织进行离体培养到形成绿色蔗苗。一般需经过诱导愈伤组织、诱导分化绿苗和绿苗长根等一次接种、两次转移培养的过程。此法存在的主要问题是:需时较长、工作量大、成本较高、发根力差和绿苗移栽成活率较低等。针对以上问题,本试验采用“MS”基本培养基附加NAA1毫克/升和IAA2毫克/升后,只需一次接种形成愈伤组织,不要再经转移培养,就可直接分化出根系旺盛的健壮蔗苗。我们将这种培养方法,叫做“一次培养成苗”法。它具有节约成本、减少     

糖甜菜(Beta Vulgaris L.)胚珠培养的研究

通过胚珠培养,获得甜菜(Beta Vulgaris L.)单倍体植株,采用MS或改良MS基本培养基,附加适量的2.4-D、KT、6BA、NAA和IBA等植物激素,成功地诱导出大量的甜菜单倍体植株。试验证明活性炭有提高诱导频率的作用。经细胞学鉴定证明,来自四倍体材料的幼苗其单倍体染色体数目为18,来自二倍体材料的幼苗其单倍体染色体数目为9,确实来源于大孢子的单倍体植株。