浅谈大学体育教学中的自主学习模式

目的:建立一种稳定高效获得广山药总DNA基因组的提取方法,为同科属及同类植物总DNA提取提供参考依据,便于应用分子生物学进行鉴定。方法:通过采用试剂盒法、改良CTAB法和SDS法对广山药的新鲜叶子、新鲜块茎、干燥块茎和新鲜嫩茎进行DNA提取,在进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法进行纯度检测。结果:3种方法均可以从不同的提取部位中提取到基因组DNA,但通过天根新型植物DNA提取试剂盒提取到的DNA纯度最高,CTAB法次之,SDS法最差。结论:利用市售总DNA提取试剂盒提取DNA,方法简便高效,所提DNA效果好。     

玫瑰花柱总RNA提取方法的比较研究

为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、Trizol法以及EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明:改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S条带亮度是18S条带亮度的2倍,将其反转录获得的c DNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述:EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。     

ET-1对高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用

目的：观察内皮素-1（ET-1）对高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用。方法将高血压大鼠和正常血压大鼠按加入 ET-1浓度的不同各分为6组：10％胎牛血清（对照组）；10％胎牛血清＋20μmol·L－1 ET-1（20μmol·L－1组）；10％胎牛血清＋40μmol·L－1 ET-1（40μmol·L－1组）；10％胎牛血清＋60μmol·L－1 ET-1（60μmol·L－1组）；10％胎牛血清＋80μmol·L－1 ET-1（80μmol·L－1组）及10％胎牛血清＋100μmol·L－1 ET-1（100μmol·L－1组）。使用细胞计数试剂盒计数各组细胞个数；采用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷（[3 H]-TdR）掺入法测定各组血管平滑肌细胞的 DNA 的合成量作为细胞增殖的指标。结果ET-1刺激高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞增生。高血压大鼠20、40、60、80及100μmol·L－1各组脑血管平滑肌细胞数量及 DNA 合成量较对照组均增加，以80 mol·L－1组细胞数量及 DNA 合成量增加最为明显（均 P ＜0．05）。正常血压鼠各组脑血管平滑肌细胞数量变化及 DNA 合成量增加不明显（P ＞0．05）。结论ET-1可明显促进高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖，提示 ET-1可能促进高血压诱发的脑血管重构。     

碲共沉淀分离富集——电感耦合等离子体质谱法测定地质样品中的超痕量贵金属元素

本文采用Na2O2碱熔分解试样后热水提取，盐酸中和并溶解沉淀，电热板低温蒸干使硅胶脱水，加酸溶解可溶盐类，过滤除Si，碲共沉淀分离富集后用浓硝酸溶解，电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定六种贵金属元素（Ru；Rh；Pd；Ir；Pt；Au）；并研究了碲共沉淀酸度及还原剂SnCl2用量对该贵金属回收率的影响；样品测定限（pg／g）分别为5（Ir），10（Pt），32（Pt），4S（Ru），62（Pd），94（Au）；回收率大部分在90％以上，方法的RSD在0．6％（Pt）-6％（Au）之间。经六种岩矿标准物质（Gpt2～5，7；DZE-1）验证，结果与参考值基本吻合。     

基于自主核酸提取方法分析单油井采出液微生物

近年来基于培养和非培养方法研究油藏微生物的报道已经不少,但鲜有基因组总DNA提取技术与微生物检出性的报道。文章通过对长庆油田Q2YG138140油井采出液进行现场分类分级处理,将原样本即时分为 油相及水相（分成4种孔径（10.00,1.00,0.22,0.10μｍ）膜滤）作为研究对象,结合自主原油基因组总DNA提取技 术对该油井采出液样本进行菌群分析。结果表明：油相样本共检出11门、25纲、43目、66科和78属,水相样本共检出17门、35纲、64目、105科和150属。该自主提取方法对油藏常见多种菌门及菌属基因组DNA的提取均具有 较好的适用性。油相中,检出11属为“其它”,相对丰度10.02％;水相中,检出26属为“其它”,相对丰度17.34％,6属为未分类,相对丰度0.40％,该方法针对未知微生物和生物量相对较低的极端环境微生物仍均具有一定的 检出能力。4种滤膜（10.00,1.00,0.22, 0.10μｍ）分别检出10门、8门、10门和13门,59属、65属、79属和82属。0.10μｍ滤膜检出的菌群多样性明显多,进一步表明该自主提取方法适用于油水微生物的多样性分析。     

线粒体 DNA 诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的实验研究简

目的：观察线粒体 DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）刺激肺泡巨噬细胞后炎症因子的动态变化,探讨mtDNA 对肺泡巨噬细胞的致炎效应。方法取 SD大鼠肝脏组织用改良的碱变性法进行 mtDNA 的提取、纯化。将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）分为mtDNA组（5μg·mL-1,A组）,mtDNA组（10μg·mL-1,B组）,空白对照组（C组）,分别在 A、B组中加入mtDNA 5μg·mL-1、10μg·mL-1,在0、3、6、12和24 h时相点收集各组细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和 IL-6的表达水平。结果 A组和B组在3、6、12和24 h TNF-α、IL-1β和IL-6的表达量显著高于C组（P＜0．01）,且在3、6、12和24 h 时B组的表达量高于 A组（P＜0．05）。结论 mtDNA 能够诱导肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β和 IL-6等炎症因子的表达,且呈剂量依赖性,推测mtDNA 具有促炎作用。     

开腹与腹腔镜直肠癌根治术后炎性反应的比较

目的：比较开腹与腹腔镜直肠癌根治术后患者全身和腹腔炎性反应的差异。方法2012年1月至2013年12月共治疗78例直肠癌患者,其中腹腔镜手术46例,开腹手术32例,比较2组的手术及炎性反应指标。结果2组患者的手术时间、术中出血量及术后第1天引流量比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。开腹组的切口长度、排气时间、住院时间、术后第4天引流量及并发症均长于或高于对照组,差异有统计学意义（P ＜0．05）。2组患者术前血液中各项炎性反应指标比较差异均无统计学意义（P ＞0．05）,术后第1天及第4天较术前均升高（P ＜0．05）。术后第1天腹腔镜组血液中各个炎性反应指标均低于开腹组,差异有统计学意义（P ＜0．05）;术后第4天腹腔镜组血液中各个炎性反应指标均低于开腹组,但差异无统计学意义（P ＞0．05）。术后第1天及第4天腹腔镜组腹腔引流物中各个炎性反应指标均低于开腹组,但是只有术后第4天的腹腔引流物 CRP、IL-6、IL-10及 TNF-α浓度比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）。结论腹腔镜直肠癌根治术患者术后早期的腹腔炎性反应与开腹手术相当,但是全身炎性反应比开腹手术轻。     

优选牵正膏薄层色谱鉴别方法

目的:优选牵正膏的薄层色谱鉴别方法。方法:运用不同的样品制备方法,比较薄层分离斑点的清晰度,从而确定更好的薄层色谱鉴别方法。结果:采用供试品4的制备方法制得的样品,薄层分离度高,斑点清晰。具体方法为10 g牵正膏置研钵中,加入适量硅藻土分散研碎,加入30 mL甲醇,2 mL盐酸,超声提取30 min,滤过,续滤液蒸干,加甲醇2 mL溶解残渣。结论:此方法简便、可靠、专属性好,可用作该制剂的质量控制方法。     

顶空气相色谱法测定三氯甲烷不确定度评定

采用《生活饮用水卫生规范》（2001）方法，利用顶空进样器进样取样检测，采用电子捕获检测器。无分度吸管吸取10．0mL水样到20mL样品瓶，加盖密封，恒温40mm后自动采集1mL气体样品进样测定。     

专利摘要

一种保温砖及其制备方法 一种新的保温砖及其制备方法。本发明保温砖的制备方法包括以下步骤：（1）按下述质量份称取各原料：膨胀珍珠岩或聚苯乙烯颗粒0．5～2份、石膏0．5～20份和酸化镁保温材料添加剂0．5～20份;（2）将上述原料混合均匀后,加入为混合物总质量0．8～1．2倍质量的水,运用传统制砖工艺压合制成砖,不进行煅烧干燥即得。     

一步法人类CYP2C19基因分型检测在临床中的应用及其意义

目的探索一步实时荧光PCR检测CYP2C19基因分型的方法。方法采用人类CYP2C19基因分型检测试剂盒(PCR-荧光探针法)对全血或人基因组进行一步法实时荧光PCR检测,同时采用焦磷酸测序和试剂盒进行对比。结果一步法检测结果准确性为100%。重复性检测显示,该法对各个基因型Ct值进行变异系数(CV值)的统计学分析,CV值均小于5%,对已知基因型的浓度的检测范围为0.2~125 ng,对杂合突变型基因组DNA(1 ng)和血液样本(十倍稀释)进行7次检测,变异系数(CV值)均小于5%,对特异性样品、EDTA抗凝样本、枸橼酸钠抗凝样本、乳糜血样本、血红素污染样本的基因型都有较好的检测效果。结论一步法检测方法准确性高,检测范围宽,重复性、特异性和灵敏度均能达到人基因组DNA样本的检测的水平,满足临床对人CYP2C19基因分型检测的目的。     

放疗联合化疗治疗中晚期子宫颈癌的疗效

目的探讨顺铂注射液与顺铂注射液联合多西他赛注射液化疗方案联合放疗治疗中晚期子宫颈癌的临床疗效。方法将60例中晚期子宫颈癌患者按随机数字表法分为2组：A组（顺铂联合放疗组）和B组（顺铂和多西他赛联合放疗组）,每组30例。2组患者均采用放疗治疗,包括体外照射和腔内后装治疗。在此基础上,A组采用顺铂注射液40 mg.m-2加入0.9%氯化钠注射液500 mL中静脉滴注,1次.周-1,治疗6周期。B组采用顺铂注射液70 mg.m-2加入0.9%氯化钠注射液500 mL中静脉滴注,第1天;多西他赛注射液70 mg.m-2加入0.9%氯化钠注射液500 mL中静脉滴注,第1天,3周后重复1次。共治疗3个疗程。结果 2组患者总有效率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。2组患者生存率、复发率、无进展生存率比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）,2组患者远处转移率比较差异无统计学意义（P〉0.05）,2组患者消化道反应、骨髓抑制、肾功能损害、变态反应发生率比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论采用顺铂注射液和多西他赛注射液化疗方案联合放疗可提高中晚期子宫颈癌患者的生存率,不良反应少,可作为一种中晚期子宫颈癌患者同步放、化疗最佳方案的选择。     

外切内注辅助改良 PPH 术治疗环状混合痔的临床研究

目的：探讨外切内注辅助改良 PPH 术治疗环状混合痔的近期疗效。方法将符合环状混合痔纳入标准的142例患者按不同术式分为2组,治疗组（70例）采用外切内注辅助改良 PPH 术,对照组（72例）采用内扎内注外切术。观察2组病例术后24 h 疼痛程度、出血情况,术后第3天肛缘水肿、肛门坠胀、肛门狭窄和尿潴留等并发症发生情况。记录术后住院时间、恢复正常生活或工作时间。结果2组患者术后24 h 疼痛评分、出血情况、术后3 d肛门水肿、肛门坠胀及术后住院时间和恢复正常工作或生活时间差异有统计学意义（P ＜0．01）,术后尿潴留发生率差异无统计学意义（P ＞0．05）。2组患者治愈率均为100％,术后近期均未发生肛门失禁、肛门狭窄及直肠阴道漏等严重并发症,远期疗效有待观察。结论外切内注辅助改良 PPH 在治疗环状混合痔疼痛程度轻,术后并发症少,恢复快,近期疗效优势明显。     

水解酵母提取物对断奶仔猪免疫功能和生长性能的影响

试验旨在研究啤酒酵母水解产物酵母衍生物(YD)添加到断奶仔猪日粮中对仔猪生长性能和免疫反应的影响。将120头猪随机分为20组,考虑到仔猪初始体重,再将其分成两组进行饲喂:对照组饲喂基础日粮和在基础日粮中添加YD 2 g·kg-1。该YD采用的是Progut(Hankkija Oy/Suomen Rehu公司,温凯,芬兰)。在第7和21天,每组半数的仔猪肌肉注射保存在无菌磷酸盐缓冲液(PBS)中20%绵羊红细胞(SRBC)溶液1 m L。在第0、14、21和28天,从被注射20%SRBC仔猪中提取血液样品,并测定仔猪急性期蛋白(Pig-MAP)、Ig M和Ig G同种型结合到血蓝蛋白(KLH)的天然抗体和SRBC凝集抗体效价。在整个试验期间,酵母衍生物提取物提高了饲料转化率(P=0.025),增加了Ig G(P=0.087)和Ig M(P=0.061)的血清结合KLH抗体,提高了绵羊红细胞凝集效价(P=0.037)。研究结果表明,添加YD日粮促进断奶仔猪免疫系统反应更加迅速且不影响动物体生长性能,这可能有利于克服疾病。仔猪断奶后28 d,饲喂Progut2 g·kg-1能够提高饲料转化率。     

二尖瓣置换术联合左心房减容术、改良迷宫Ⅲ型术治疗风湿性心脏瓣膜病并慢性心房颤动

目的探讨二尖瓣置换术联合左心房减容术、改良迷宫Ⅲ型术治疗风湿性心脏瓣膜病并慢性心房颤动（at-rial fibrillation,AF）的临床疗效。方法将60例左心房容积指数（LAVI）≥55mL.m-2的风湿性心脏瓣膜病并慢性AF患者按不同的治疗方法分为2组：二尖瓣置换术联合左心房减容术、改良迷宫Ⅲ型术组（LAVR组）,30例;二尖瓣置换术联合改良迷宫Ⅲ型术组（对照组）,30例。观察2组患者围术期的体外循环（CPB）时间、主动脉阻闭时间、呼吸机辅助时间、ICU时间、住院时间、胸瓶引流量和术后并发症发生率、病死率及术前、术毕,术后1、3、6、12个月窦性心律维持率、术前和术后12个月心功能NYHA分级、左心房内径（LAD）、左心房容积指数（LAVI）、左心室射血分数（LVEF）、心胸比（C/T）、术前和术后第1、7天,6个月血浆脑利钠肽（BNP）水平等情况。结果 2组患者CPB时间、主动脉阻闭时间、呼吸机辅助时间、ICU时间、住院时间、胸瓶引流量及术后并发症发生率、病死率比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。LAVR组患者术后1、3、6、12个月窦性心律维持率均明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。LAVR组患者术后12个月心功能NA分级明显好于对照组（P〈0.05）。LAVR组患者术后12个月LAD、LAVI、LVEF、C/T值与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）。LAVR组患者术后第1、7天,6个月血浆BNP水平与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论对LAVI≥55mL.m-2的风湿性心脏瓣膜病并慢性AF患者行二尖瓣置换术联合左心房减容术、改良迷宫Ⅲ型术治疗有较好的疗效,并可预防术后AF复发,长期维持窦性心率,进一步改善左心房、室主动收缩功能。     

一种空心保温砌块及其制备方法

本发明公开了一种新型空心保温砌块及其制备方法。本发明空心保温砌块主要由以下重量份的原料制成：酸化镁保温材料添加剂0.5-1.5份和膨胀珍珠岩1-3份。本发明空心保温砌块的制备方法包括以下步骤：（1）按下述重量份称取各原料：酸化镁保温材料添加剂0.5-1.5份和膨胀珍珠岩1-3份；（2）将上述原料混合均匀后，     

HPLC 法测定人肝微粒体中藏花酸的浓度

目的：建立一种测定人肝微粒体孵育体系中藏花酸浓度的 HPLC 内标法。方法在人肝微粒体温孵体系中加入藏花酸样品进行孵育反应,反应结束后用冰乙腈终止反应。经沉淀法处理样品后,采用 Diamonsil C18色谱柱（4．6 mm×150 mm,5μm）进行分离。流动相：甲醇-2％冰乙酸水溶液（7525,v／v）;流速：1．0 mL·min－1;柱温：30℃;紫外检测波长：440 nm;内标：吲哚美辛。结果藏花酸经孵育反应后质量浓度测定方法的线性范围为0．125～8μg·mL－1,线性关系良好（R 2＝0．9999）。藏花酸低、中、高质量浓度的提取回收率分别为：97．24％、96．58％、98．12％,其 RSD 均小于15％,批内、批间差异＜15％,准确度为85％～115％。结论该 HPLC 法简便、准确,符合生物样品测定的要求,能快速、可靠地检测人肝微粒体中藏花酸的浓度。     

甲亚胺-H酸分光光度法测定岩盐中总硼

沸水溶解岩盐样品,过滤除去水不溶物,分取部分滤液在pH值5．2～5．6乙酸铵缓冲液中,硼可与甲亚胺-H酸生成可溶性的棕黄色络合物,吸光度与硼的浓度成正比。其标准回收率为94．9％～102．4％,相对标准偏差为0．79％～1．26％（RSD,N=5）。建立的分析方法准确度、灵敏度、精密度高,方法简便、快速,适用于各类岩盐中总硼含量的分析研究。     

Rood技术联合运动想象疗法对脑卒中软瘫期患者NIHSS、FMA评分及ASS分级的影响

目的 观察Rood技术联合运动想象疗法对脑卒中软瘫期患者神经功能缺损评分以及运动功能的影响.方法 48例脑卒中软瘫期患者,随机分为2组：对照组24例采用常规药物治疗、关节活动度（ROM）训练和低频电刺激;治疗组24例在接受常规药物治疗、ROM训练、低频电刺激的同时再加上Rood技术和运动想象疗法.治疗前和治疗后的第2周以及第4周对患者进行神经功能缺损（NIHSS）和Fugl-Meyer评分（FMA）,并在4周后进行改良Ashworth评级（ASS）.结果 治疗2周后,2组患者的NIHSS评分都有所下降,但治疗组明显低于对照组（P＜0.05）,而FMA评分比较差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗4周后,治疗组的NIHSS评分与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,治疗组的FMA评分与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且治疗组Ashworth评级明显优于对照组（P＜0.01）.结论 Rood技术联合运动想象疗法可以促进脑卒中患者神经功能恢复,抑制软瘫期肢体痉挛,有效改善其运动能力.     

军团菌双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立一种特异、快速、敏感,同时能区分嗜肺和非嗜肺军团菌的荧光定量PCR方法,用于检测临床和环境样品。方法利用军团菌属特异性23S rRNA基因和嗜肺军团菌种mip基因的保守序列,设计引物和TaqMan探针。提取嗜肺军团菌标准菌株(LP1)DNA,分别构建2个含有目的基因的标准质粒作为阳性模板。优化荧光PCR反应条件和反应体系,对方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。并对环境水样及80份临床痰样进行检测。结果该方法检测灵敏度达10标准质粒拷贝数/反应,具有高度特异性、稳定性。整个过程约需2 h。对35份环境水样进行检测,检出3株嗜肺军团菌和3株非嗜肺军团菌,所有水样经传统分离培养法和普通PCR法检测均显示为阴性。对临床80份随机痰液标本进行检测,2份嗜肺军团菌阳性。结论 TaqMan探针荧光定量PCR双管检测是一种可同时区分嗜肺与非嗜肺军团菌的特异、敏感、稳定的方法,可用于基层医院对环境标本及临床痰样的检测。