一株产漆酶真菌的筛选、鉴定及发酵研究

采用愈创木酚显色法筛得一株产漆酶周期较短的丝状真菌.通过形态学观察和分子生物学序列分析,鉴定其为棘孢木霉(Trichodermaasperellum),并对所获菌株进行了发酵条件优化.通过单因素试验和正交试验获得该菌的最佳发酵条件为:蔗糖25g/L、麸皮汁80g/L、酒石酸铵10g/L和豆粕18g/L,KH2PO4 2,MgSO4·7H2O 0.6,CaCl2·2H2O 0.8,Cu2+0.25(1mM),pH 5.5~6.5,其漆酶最高酶活水平为571.32U/L.     

一株海洋真菌Sw-25产胞外多糖发酵条件研究

通过对海洋真菌Sw-25发酵,研究不同碳源、氮源、培养基初始pH、温度及接种量、装液量对海洋真菌Sw-25产胞外多糖的影响.结果表明,最适培养基组成为：麦芽糖20 mg/L,酵母膏5 mg/L,海水400 mL/L,蒸馏水600 mL/L,培养基初始pH 6.0～6.5.最适发酵条件为：250 mL三角瓶装量80 mL,接种量为6%,24℃培养96 h.在此条件下,海洋真菌Sw-25产胞外多糖1.28 g/L.     

一株海洋真菌Sw-25产胞外多糖发酵条件研究

通过对海洋真菌Sw-25发酵,研究不同碳源、氮源、培养基初始pH、温度及接种量、装液量对海洋真菌Sw-25产胞外多糖的影响.结果表明,最适培养基组成为:麦芽糖20 mg/L,酵母膏5 mg/L,海水400 mL/L,蒸馏水600 mL/L,培养基初始pH 6.0～6.5.最适发酵条件为:250 mL三角瓶装量80 mL,接种量为6%,24℃培养96 h.在此条件下,海洋真菌Sw-25产胞外多糖1.28 g/L.     

一株具有杀松材线虫活性海洋真菌的筛选和初步鉴定

为了从分离得到的海洋真菌中筛选并鉴定具有杀松材线虫活性的菌株,本文采用稀释涂布平板法对采自青岛近海海域样品中的真菌进行分离,使用浸渍法对菌株的培养滤液和菌丝破碎液进行杀松材线虫活性测定,同时根据菌落形态、大小、色泽等特点的不同,经进一步纯化得到6个纯菌株,对这些菌株进行杀线活性测定,经初步筛选得到2株具有较强杀线活性的菌株,菌株HZ-1-1处理28h时杀线活性最高,其培养滤液和菌丝破碎滤液的线虫校正死亡率分别达到72.6%和84.1%;菌株HZ-1-2处理32h时杀线活性最高,其培养滤液和菌丝破碎滤液处理的线虫校正死亡率分别为46.3%和58.8%。选出活性表现最强的菌株HZ-1-1进行后续实验。实验结果表明,菌株HZ-1-1为轮枝孢属(Verticillium)的真菌。本研究对由松材线虫引起的松树萎蔫病的生物防治具有重要的理论意义。     

一株磷脂酶D高产菌的筛选及发酵条件优化

磷脂酶D可以催化合成磷脂酰丝氨酸,为了得到高活力的磷脂酶D,采用蛋黄平板法从油脂厂区的土壤中筛选出产磷脂酶D的菌株X1。通过摇瓶培养,用TLC薄层层析法测定酶活力,达到2 023U/L。对发酵培养基组分及发酵条件进行优化,结果表明,葡萄糖为碳源10g/L,蛋白胨为氮源15g/L,发酵温度为30℃,发酵液初始pH为7,摇床转速为180r/min的发酵条件,酶活力达到最大,为7 330U/L。     

一株海洋细菌产脂肪酶发酵条件研究

对分离自海泥中产脂肪酶海洋菌株L42进行产酶发酵条件研究,包括发酵时间、起始pH、装液量、接种量、发酵温度、摇床转速以及底物、碳源、氮源种类。结果表明,发酵24 h,起始pH=8.0,装液量75 mL(250 mL三角瓶),接种量4%(体积分数),发酵温度20℃,摇床转速150 r/min有利于产脂肪酶;最佳培养基组成为蛋白胨质量分数1%,葡萄糖质量分数0.5%,橄榄油体积分数1%。通过产酶条件的优化,酶活较起始提高了44.4%。     

一株适宜于Kefir发酵的优良酵母菌的筛选与鉴定

为制备开菲尔(Kefir)新型发酵剂,发掘一株产气适中、耐受性高、使发酵乳具有沙口感且风味独特的酵母菌,利用YPD培养基从甜瓜曲中分离纯化出4株产香酵母菌,分别编号为TN₁、N2、Z2、HX。通过耐酸、耐酒精及耐高温试验对4株酵母菌进行初筛、复筛,使用固相微萃取-气质联用色谱(SPME-GC-MS)对其中两株发酵乳香气物质成分进行主成分分析,并将最终得到的菌株进行分子生物学鉴定。结果表明：4株酵母菌中TN₁、N2耐受性高,生长迅速,发酵性能较佳;TN₁发酵牛奶产生的香气物质种类最多,典型味物质的含量适中,产生的香气更佳,更适合后续Kefir酸乳的开发;结合TN₁菌株的分子生物学分析结果,该菌株与NRRL Y-12632菌株同源性为100%,将TN₁鉴定为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。研究结果为开发Kefir发酵乳发酵剂奠定了基础。     

产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其发酵条件优化

从大连海域的海参肠道中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋细菌HS-A156,经形态学和16SrDNA序列分析初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(GenBank检索号KC166863)。对菌株HS-A156的酶学性质进行初步研究,结果表明该菌株所产蛋白酶最适作用pH为9.0,在pH 8.0~11.0性能稳定;最适作用温度为40℃,在25~45℃具有良好的热稳定性。同时对该菌株产酶发酵培养基和发酵条件进行优化,确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖1.5%、牛肉膏1.0%、酵母粉2.0%、CaCl20.05%;最佳发酵条件培养基初始pH 8.0、发酵温度30℃、接种量3%。经过优化后菌株HS-A156产碱性蛋白酶的酶活力达到538U/mL,比优化前的产酶量提高了3.7倍。     

一株产生广谱抗菌物质地衣芽孢杆菌的筛选与鉴定

采用异步培养法,从土壤样品中筛选到一株产抗菌物质活性较强的菌株F69．结合菌落形态、生理生化指标和16SrDNA序列分析对菌株F69进行菌种鉴定．菌株F69在系统发育上属于芽孢杆菌属,它和地衣芽胞杆菌菌株的16SrDNA序列相似性最高为99％,该菌株被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）．菌株F69可作为抗菌物质产生菌进行进一步深入研究．     

产生物表面活性剂细菌的筛选及发酵条件优化

利用变色圈法、排油圈法从土壤和污泥等样品中分离筛选出1株产生物表面活性剂的细菌菌株WB,并通过单因素实验及L9（3^4）正交实验对该菌株的培养基配方及培养条件进行优化．结果表明：在葡萄糖10g／L,麸皮25g／L,酵母粉0．9g／L,培养基初始pH值为7．2,250mL摇瓶装液量为50mL,发酵时间为72h的条件下,菌株WB的表面活性剂的产量可达3．6g／L．     

链霉菌TD-1菌株抑菌活性物质发酵条件的优化

利用正交设计法及均匀设计法对链霉菌TD-1菌株发酵条件进行了优化,研究不同发酵因子对链霉菌TD-1产抑菌活性物质的影响.结果表明,发酵培养基中影响抑菌活性大小的主要因素为葡萄糖、黄豆粉、硫酸亚铁、磷酸氢二钾及硝酸钾;抑菌活性物质较佳发酵条件为90 mL/250mL三角瓶,接种量的体积分数为0.06,发酵周期8 d,初始pH值为7.15.在此条件下,最终抑菌效率与原发酵液相比发酵液对串珠镰刀菌抑菌活性提高了53.38%.     

果胶酶高产霉菌的筛选及固体发酵条件的优化

实验利用平板菌落法从腐烂的南果梨中筛选果胶酶的生产菌株,以沉淀圈确定胞外果胶酶的存在;通过固态发酵培养,采用次碘酸钠滴定法测定比较果胶酶活力,筛选得到1株果胶酶高产霉菌,命名为As2,其菌丝为有隔多核菌丝,以分生孢子形式繁殖;同时对As2固态发酵生产果胶酶的条件进行优化,确定最适发酵培养基的组成为:47.5 g麸皮,苹果渣2.5 g,质量分数为2.5%(NH4)2SO4溶液50 mL,pH 4.0.最佳固体发酵条件为:128mL广口玻璃瓶装量50 g,接种比例20%,30℃恒温发酵96 h,干曲果胶酶活性可以达到6 635 U/g.     

抗菌活性粘细菌的筛选及鉴定

采用兔粪诱导法和酵母划线法,从淮安市采集的10份土壤样品中筛选次级代谢产物具有抗菌活性的粘细菌,并分离纯化。通过观察所筛选到菌株的营养细胞、粘孢子、子实体和菌落形态等特征,并对其进行生理生化试验,进行鉴定归属。共分离到13株粘细菌,经鉴定为粘球菌属、原囊菌属、孢囊杆菌属、多囊菌属和标桩菌属5个属。采用牛津杯法,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门氏菌、黑曲霉和酵母菌作为指示菌进行抗菌试验,13株菌的次级代谢产物均表现出不同程度的抗菌活性。     

分批补料乙酸发酵条件的优化

利用10L发酵罐进行乙酸分批补料发酵工艺条件的优化：发酵前8h采用发酵温度30℃、0．07VVM的通风量;8h后采用发酵温度32℃、0．10VVM的通风量,并采用间歇定量补料方式,发酵到12h,每隔4h补加0．5％的乙醇．     

产低温碱性脂肪酶菌株Acinetobacter johnsonii LP28的鉴定及发酵条件优化

从实验室保藏的49株碱性脂肪酶产生菌中筛选出产低温碱性脂肪酶菌株LP28,初步酶学性质研究表明,该脂肪酶的最适作用温度为30℃,最适作用pH为9．0,粗酶液在室温条件下处理48h仍具有93．78％的残余酶活．该菌经16SrDNA鉴定为约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）,同源性为99％．摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为（g/L）：淀粉10,牛肉膏20,K2HPO41,PvA-大豆油20．最高酶活为3．06U／mL．     

抗肿瘤海洋真菌的筛选及菌株HGQ6的初步研究

筛选抗肿瘤活性海洋真菌,鉴定活性菌株并初步研究其活性代谢产物的理化性质。从连云港近岸海域沉积物中共分离得到真菌31株,发现它们的培养物普遍具有抗肿瘤活性,其中4株真菌的培养物具有显著的细胞毒活性（抑制率〉80%）。对活性菌株HGQ6的研究表明,其发酵液对多种肿瘤细胞呈现显著的细胞毒活性,活性产物为极性中等、热稳定性较好和耐酸不耐碱的物质。根据菌株的形态学特征和ITS序列分析结果,将菌株HGQ6鉴定为产黄青霉（Penicillium chryso-genum）。     

高效表达AIM工程菌的发酵培养基及发酵条件优化

为了进一步提高工程菌的载脂蛋白AI米兰突变体（AIM）的表达量,降低发酵成本,通过碳氮源优化实验并结合正交实验筛选出该工程菌产A1M的最适培养基为（g／L）：蔗糖10,酵母粉10,硫酸铵6和NaCl10;最适发酵条件为：装液量30mL,接种量8％,诱导时机A600 1．0,诱导剂浓度0．8mmol／L,诱导时间6h．在此优化的条件下,A1M的表达量为2．26g/L,是未优化条件下的1．58倍．     

玉米黄素二葡萄糖苷的发酵条件优化

为优化噬夏孢欧文氏菌合成玉米黄素二葡萄糖苷的最佳发酵条件,通过单因素实验,分析了碳源、氮源、培养基初始pH值、培养温度以及培养时间对噬夏孢欧文氏菌的生长和玉米黄素二葡萄糖苷产量的影响,同时,为确定最佳培养条件又进行了正交实验及结果分析。实验结果表明,所确定的噬夏孢欧文氏菌发酵生产玉米黄素二葡萄糖苷的最佳培养条件为:葡萄糖质量浓度为25g/L,酵母粉质量浓度为20g/L,初始pH值6.0,培养温度为30℃。同时,按此优化条件培养噬夏孢欧文氏菌培养发酵48h,得到玉米黄素二葡萄糖苷的产量比优化前提高了163%。该研究为玉米黄素二葡萄糖苷的工业化生产奠定了基础。     

产脱落酸真菌的筛选及其发酵条件研究

利用马丁-孟加拉红培养基由20份土壤样品和2份植物病叶样品中分离出57株真菌，分别对其进行液体培养．通过各菌株发酵液抑制莴苣种子发芽的方法筛选得到-株脱落酸产生菌NX-53，通过L9（3^4）正交实验对其产酸条件进行优化，得到该菌株产脱落酸的培养基配方和培养条件：葡萄糖25g／L，维生素B1 1．25mg／L，谷氨酸单钠盐3．0g／L，MgSO4·7H2O 0．2g／L，KCl 0．5g／L，CaCO3 5g／L，KH2PO4 0．8g／L，FeSO4·7H2O 0．5mg／L，ZnSO4·7H2O 2．5mg／L，CuSO4·5H2O 4mg／L，250mL摇瓶装液量50mL，28℃、150r／min培养7d．优化条件下菌株NX-53的脱落酸产量可达276mg／L．