黑曲霉液体发酵产木聚糖酶的研究

通过单因素实验及响应面方法对黑曲霉菌株产木聚糖酶发酵条件进行了研究,结果表明:当培养基为麸皮40g/L,(NH4)2 SO4 4g/L,KH2PO4 3g/L,MgSO4 0.8g/L,吐温80 1g/L;初始pH值5.0,接种量8.0%,培养温度30℃;此条件下发酵木聚糖酶酶活达1456.27IU/mL。     

细菌产β-葡萄糖苷酶发酵优化

从栀子果中分离到一株在较高温度下产β-葡萄糖苷酶的地衣芽孢杆菌,对其产酶条件进行了优化.通过单因素实验和正交实验确定该菌株产酶的最佳培养条件为:碳源(甘蔗渣粉∶麸皮=3∶1)5%,牛肉膏 0.5%,栀子甙 0.2%,KH2PO4 0.4%,MnSO4 0.04%,pH值9.0,装液量20 mL/250 mL,种子液接种量10%,45℃发酵24 h.优化条件下发酵液中的酶活可达到93.48 U·mL-1.     

拟青霉E7蛋白酶发酵条件及酶性质研究

针对产蛋白酶的淡紫拟青霉E7菌株发酵条件进行优化,得到利于产酶发酵培养基配方:以2%大豆粉为碳源、2%麦麸及1%硝酸铵为氮源,pH值7.0,28℃,150 mL三角瓶装液量为30 mL,培养时间72h.对该酶性质研究结果表明:蛋白酶在40 ℃热稳定性较好,最适pH值为10.5,在pH值9～11范围内具有较高的酶活与耐碱性.     

一株产普鲁兰酶芽孢杆菌的筛选鉴定及发酵条件优化

从甘肃定西某淀粉加工厂附近土壤中分离得到一株产普鲁兰酶酶源菌AI-1,通过形态学、生理生化试验及16S rRNA序列鉴定并对其进行系统发育分析,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),对其发酵培养基成分和发酵条件进行了优化。优化后的发酵培养基成分为:可溶性淀粉1.5%,酵母膏1%,蛋白胨1%,NaCl0.5%,K2HPO40.1%,MgSO4·7H2O 0.05%;最佳发酵条件为:培养温度36℃,发酵培养基初始pH 7.0,接种量8%(V/V),摇床转速150 r/min,发酵周期72 h。在此优化条件下,菌株AI-1发酵所产普鲁兰酶的酶活由最初的2.45 U/m L提高到了4.52 U/m L。     

一株产普鲁兰酶芽孢杆菌的筛选鉴定及发酵条件优化

从甘肃定西某淀粉加工厂附近土壤中分离得到一株产普鲁兰酶酶源菌AI-1,通过形态学、生理生化试验及16S rRNA序列鉴定并对其进行系统发育分析,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),对其发酵培养基成分和发酵条件进行了优化。优化后的发酵培养基成分为:可溶性淀粉1.5%,酵母膏1%,蛋白胨1%,NaCl0.5%,K2HPO40.1%,MgSO4·7H2O 0.05%;最佳发酵条件为:培养温度36℃,发酵培养基初始pH 7.0,接种量8%(V/V),摇床转速150 r/min,发酵周期72 h。在此优化条件下,菌株AI-1发酵所产普鲁兰酶的酶活由最初的2.45 U/m L提高到了4.52 U/m L。     

海洋微生物溶菌酶的发酵优化与中试生产

以海洋细菌S-12-86为试验菌株,采用摇瓶发酵优化的方式,研究培养基组分(碳源、氮源、碳源与氮源的比例、金属离子)与发酵条件(培养温度、接种体积分数、装液体积分数、起始pH值、产酶周期)对海洋微生物溶菌酶产量的影响,并进行中试放大试验。结果表明:该菌产酶最佳培养基组分为:葡萄糖10 g/L,蛋白胨5 g/L,MgSO45 g/L,CaCl22 g/L;最适发酵培养温度为30℃,接种体积分数为4.0%,装液体积分数为10.0%,起始pH值为8.0,发酵周期24 h。海洋细菌S-12-86发酵优化后的产酶量(25636.8 U/mL)较优化前的产酶量(14454.4 U/mL)提高了75.4%。海洋微生物溶菌酶中试发酵的产酶量达26697.87 U/mL。说明摇瓶发酵优化条件可以应用于海洋微生物溶菌酶中试生产上。     

落叶松附毛孔菌稻草液态发酵产漆酶条件优化

以木质纤维素类物质为主要基质,培养白腐真菌液态发酵产漆酶具有重要应用前景。筛选到一株漆酶高产菌,鉴定为落叶松附毛孔菌Trichaptum laricinum,优化培养条件的基础上,考察稻草和硫酸铜对该菌漆酶产量的影响。正交试验获得T.laricinum最适产漆酶条件为:麦芽浸粉为氮源,其浓度为7 g/L,硫酸铜浓度为80 mg/L,pH值4。液态发酵15 d时该菌漆酶产量达到19.2 U/mL;稻草作为主要营养基质可以显著提高该菌漆酶产量,稻草添加量为4.5 g/L时,漆酶量最大;发酵前期,无Cu~(2+)的培养环境有利于T. laricinum营养生长,在发酵中后期Cu~(2+)加入有利于漆酶分泌,第5 d加入Cu~(2+)效果最好,发酵15d时漆酶产量为23.5U/m L。T.laricinum可以利用稻草为主要基质发酵产漆酶,是一株具有潜在应用价值的漆酶工业生产菌株。     

棉布支架固定化米根霉联产果胶酶及用于处理烟梗

利用果胶酶处理烟梗纤维生产乳酸等对环境友好,而应用新的发酵组合方式和优化发酵条件是提高产酶量,降低成本的有效途径。本文采用实验室研发的棉布支架固定化米根霉细胞的技术,优化了底物为果胶或烟梗的发酵产果胶酶的培养条件,还优化了处理烟梗果胶的条件。底物为果胶的最佳产酶条件为:转速190r/min,装液量50mL/250mL,发酵温度30℃,初始pH值5,初始孢子浓度0.75×10⁶个/mL。底物为烟梗的最佳产酶条件为:初始pH值4.6、初始孢子浓度0.5×10⁶个/mL等。在优化处理烟梗果胶的条件下,固定化米根霉产果胶酶连续法比游离的果胶酶法降解烟梗果胶的效果好,果胶降解率提高18.5%,达到74.1%。棉布支架固定化米根霉利用果胶发酵产果胶酶量较高,利用烟梗发酵脱胶效果较好。     

青霉素酰化酶在新型复合载体上的固定化研究

在反应温度为45℃、反应时间为6 h、丙烯酰胺(AM)质量浓度为40 g/L、引发剂用量为单体质量1%的条件下制得PAM-SiO2复合载体,利用红外光谱表征了其化学结构,热失重法测定其接枝量为21%。在所制PAM-SiO2复合载体上固载青霉素酰化酶,其固载最适条件为:戊二醛用量0.1 mmol/L,pH值7.64,给酶量1%,温度42℃,时间11 h~12 h。此条件下所得固定化酶的活力为34000 U/mL;测得所制固定化酶的最适pH值为7.82,最适温度为45℃。     

添加甲萘醌促进嗜热子囊菌合成过氧化氢酶

研究了添加甲萘醌对嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)IFO9862合成过氧化氢酶(CAT)的影响. 结果表明,添加甲萘醌有助于促进CAT的合成. 在发酵的24或48 h分别添加1 mmol/L的甲萘醌,发酵终了CAT酶活比对照分别提高了11.0%和23.1%;而在发酵的36和48 h各添加1 mmol/L的甲萘醌,CAT酶活可提高32.5%. 在发酵0 h添加88 mmol/L的H2O2,同时在48 h添加1 mmol/L的甲萘醌,CAT酶活达到1725 U/mL,比对照(1074 U/mL)提高了60.6%.     

产壳聚糖酶菌株的筛选及其发酵产酶条件的研究

从采集的土样中分离得到一株产壳聚糖酶的菌株,对该菌株发酵产酶条件进行了初步研究.确定其最适的产酶培养基为(%):壳聚糖1.0,葡萄糖0.1,酵母提取物0.5,(NH4)2SO4 1.0,K2HPO4 0.07,KH2PO4 0.03,NaCl 0.5,MgSO4·7H2O 0.05,起始pH值6.0;最适产酶培养条件为:装液量为70 mL/250 mL,接种量3%,30℃、150 r·min-1培养72 h.在最适产酶条件下,该菌株发酵液中壳聚糖酶活力最高达到1.96 U·mL-1.     

黑毛茶中产单宁酶真菌的筛选及产酶条件研究

采用富含单宁酸的平板培养基对黑毛茶中产单宁酶的真菌进行筛选,经纯化后初步鉴定该菌为黑曲霉,并对其中一株黑曲霉WC-2产单宁酶的发酵条件以及发酵培养基的组成进行了优化。优化后的条件为:五倍子渣含量80%,外加碳源为α-乳糖、添加量1%,外加氮源为硝酸铵、添加量0.5%,发酵温度37℃,发酵时间72h。在此条件下,单宁酶活力最高达到27.06U·g-1。     

黑曲霉液体发酵制备 β- 葡萄糖苷酶的研究

研究了培养条件对黑曲霉液体发酵制备β-葡萄糖苷酶的影响及β-葡萄糖苷酶的表观酶学性质。麸皮是黑曲霉β-葡萄糖苷酶的较适诱导物。黑曲霉NL02以 40 g/L 麸皮为碳源,在 250 mL 三角瓶中装液 40 mL,接种量 8%,初始pH值5.5, 30℃、 170 r/min 下培养 10 d,β-葡萄糖苷酶活力为 19.12 IU/mL。β-葡萄糖苷酶最适温度为 65℃,40℃ 时稳定性较好;最适pH值为4.8,在pH值3.0～5.0之间稳定性较好。     

酶解法替代酸解生产右旋糖酐的新工艺研究

目的:右旋糖酐酶催化水解工艺替代右旋糖酐发酵工艺中的盐酸水解。方法:以药用右旋糖酐70(1)、右旋糖酐40(2)和右旋糖酐20(3)的含量为指标,采用HPLC测定指标成分含量,酶催化温度、pH、底物浓度、酶浓度、反应时间为考查因素,确定药用级右旋糖酐水解的酶催化工艺。条件与结果:制备右旋糖酐70(1)、右旋糖酐40(2)和右旋糖酐20(3)的酶催化工艺:底物浓度为7%,酶浓度为2 U/mL,于pH 5.0、200r/min、35℃条件下分别反应60~70min、70~80min、90~110min。结论:右旋糖酐酶法催化工艺简单可控,操作性强,适合大规模生产。     

毕赤酵母产重组木聚糖酶发酵条件的优化及其酶学性质

目的优化毕赤酵母工程菌GS115/xyn11A产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质。方法采用单因素试验和L(934)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响;并分析重组木聚糖酶的酶学性质。结果影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值>诱导时间>诱导温度>甲醇添加量,重组酵母产酶最佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5%,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35 IU/ml;酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH 4.5～7.5的范围内较稳定。结论优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据。     

香菇柄酶解糖化过程的研究

对以麸皮与香菇柄为原料、绿色木霉为菌种的固态发酵产酶进行了研究.结果表明:m(麸皮)∶m(香菇柄粉)为3∶2、料水比为1∶2.0、起始pH值为5.00时,所产纤维素酶水解香菇柄的得糖率最高.在此基础上进一步设计了4因素3水平正交实验,得到最佳水解工艺条件为:底物含量5%,酶量400FPA/100mL水,pH值5.00,温度50℃.在此条件下,香菇柄的得糖率达63.2%.     

生物酶法合成(S)-2-氨基-1-丁醇的研究

以粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶为催化剂,酶法拆分苯乙酰消旋底物转化生成(S)-2-氨基-1-丁醇。通过对催化过程中加酶量、底物浓度、反应温度、pH进行优化,确定最适酶催化条件是pH 9.0,40℃,底物浓度100 mmol/L,酶量2 U/mL,反应体积80 mL。在最适反应条件下,当消旋底物转化率达40%时终止反应可获得较高的产物光学纯度(ee>99%)。     

- 葡萄糖苷酶的研究

研究了培养条件对黑曲霉液体发酵制备β-葡萄糖苷酶的影响及β-葡萄糖苷酶的表观酶学性质。麸皮是黑曲霉β-葡萄糖苷酶的较适诱导物。黑曲霉NL02以 40 g/L 麸皮为碳源,在 250 mL 三角瓶中装液 40 mL,接种量 8%,初始pH值5.5, 30℃、 170 r/min 下培养 10 d,β-葡萄糖苷酶活力为 19.12 IU/mL。β-葡萄糖苷酶最适温度为 65℃,40℃ 时稳定性较好;最适pH值为4.8,在pH值3.0～5.0之间稳定性较好。     

一株聚乙烯醇降解酶产生菌的产酶条件优化

枯草芽胞杆菌WSH-062在摇瓶培养中能产生胞外的PVA降解酶。通过单因素及正交实验对其进行了发酵条件的优化。研究结果表明:该菌产生的PVA降解酶为诱导型酶;2 g/L的复合氮源(NaNO3和酵母粉的配比为1∶1)就能满足细胞生长和产酶的营养需要。正交实验分析得到最优的发酵培养基为:PVA 30 g/L,酵母粉12.2 g/L,NaNO3 10.1 g/L,MgSO4.7H2O 0.35 g/L,KH2PO4 3 g/L,pH值7.2。优化之后的PVA降解酶酶活达到5.00 U/mL,比优化前提高了4.75倍,并且重复性较好。     

过氧化氢-乙酸联合预处理对甘蔗渣酶解和发酵的影响

采用过氧化氢-乙酸(HPAC)对甘蔗渣(SCB)进行了联合预处理。以预处理后的甘蔗渣为原料,先进行酶水解,然后将水解液进行乙醇发酵,探讨预处理对甘蔗渣酶解和发酵的影响。实验结果表明：20 g甘蔗渣,加入150 mL过氧化氢水溶液(75 mL过氧化氢(30%)和75 mL水)和150 mL乙酸(99%),硫酸用量为过氧化氢-乙酸溶液体积的0.5%,在70℃反应2 h时,HPAC预处理脱除了88.85%的木质素,并使90.10%的纤维素保留在底物中。底物(HPAC/70-SCB-0.5)的酶可及度是80.30 mg/g,与相同条件下单独过氧化氢预处理(HP/70-SCB)和单独乙酸预处理(AC/70-SCB)相比,分别增加了38.26%和31.08%,甘蔗渣木质素的表面覆盖率从原料的0.66降低至0.22。酶解上清液在酶用量为5 FPIU/g(以底物计)条件下水解后,葡萄糖得率是87.63%,分别是HP/70-SCB和AC/70-SCB的6.89和20.62倍,发酵产乙醇质量浓度是7.57 g/L,分别是HP/70-SCB和AC/70-SCB的7.65和22.94倍。