一种食源性纤溶酶(纳豆激酶)酶学性质的研究

纳豆激酶是一种新型食源性纤溶酶 ,具有易于提取 ,无任何毒副作用 ,溶栓效果好 ,体内作用时间长等特点。实验以新鲜制备纳豆为原料 ,经生理盐水浸提 ,硫酸铵分级盐析 ,SephadexG -10 0层析获得纯纳豆激酶活性蛋白。实验表明 ,该酶分子量为2 80 0 0Da ,等电点为 9,在 6 0℃以下 ,pH 5～ 12均较稳定 ,其最适反应pH为 8,最适反应温度为 45℃ ,Mg2 和Co2 离子对酶活有激活作用 ,而Cu2 、Zn2 和Al3 等离子对该酶有明显的抑制作用。纳豆激酶酶学性质的研究对开发纳豆激酶成为新型溶栓制剂具有重要的实践意义     

豆豉纤溶酶研究进展及前景

对近年来豆豉纤溶酶的研究与开发进展进行了综述，重点介绍了产酶菌种的分离、培养、酶的分离纯化、酶的理化特性以及进一步研究开发的前景。     

纳豆激酶纤溶活性研究

通过制备纳豆提取液、纳豆激酶粗酶,对纳豆激酶纤溶活性进行研究。结果表明:纳豆激酶纤溶活性最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

纳豆激酶纤溶功能及其机理研究

以 2 0 %FeCl3制造兔颈动脉血栓模型 ,并将 18只日本大耳兔 ,随机分为 3组 ,即十二指肠注射NK高、低剂量实验组 (分别为 45 0 0UI/kg、2 5 0 0UI/kg)、生理盐水模型对照组。观察纳豆激酶粗酶液体外、体内溶解血栓的作用。体外试验表明 ,B N 12液体发酵粗酶液作用血凝块 10、2 2h后 ,溶解率分别为 78 2 3%、98 16% ,对照组分别为 2 1 43%、2 3 91% (P<0 0 5 ,P <0 0 1) ;动物试验表明 ,NK高剂量组给药 1、1 5h后 ,CT (P <0 0 5 )、PT (P <0 0 5 )、TT (P <0 0 1)和APTT (P <0 0 5 )均显著延长 ,给药 2h后ELT和Fig含量显著降低(P <0 0 1、P <0 0 5 ) ,FDP含量明显增高 (P <0 0 5 ) ,血浆D dimer呈阳性 ;低剂量组CT、PT和APTT各指标及Fig含量无显著变化 ,但ELT明显缩短 (P <0 0 5 ) ,FDP含量、TT值显著增高 (P <0 0 5 ) ,且血浆D dimer呈阳性。纳豆激酶在体内和体外均具有明显的溶栓效果 ,提高纤溶活性、增强抗凝作用是其溶栓机理之一。     

豆豉纤溶酶功能性研究

该文对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵及纤溶酶提取、活性测定、理化性质、动物溶栓药效试验进行综述并介绍纤溶酶应用前景。     

豆豉纤溶酶的研究进展

本文主要介绍了豆豉纤溶酶菌种的筛选、发酵、理化性质、提取、活性测定以及应用前景。     

纳豆纤溶酶--纳豆激酶的分离提纯及稳定性研究

实验采用硫酸铵分步盐析，Sepharose Butyl Fast Flow疏水层析，Sephamse CM Fast Flow离子交换层析和Superdex75凝胶层析，对纳豆浸提液进行分离纯化，得到电泳纯的纳豆激酶。并研究了纳豆激酶的稳定性，实验结果表明，温度对酶活影响显著；pH6—8范围内酶活相对稳定；Zn^2＋、亚硫酸钠对酶活有较大的抑制作用；Al^3＋、Cu^2＋苯甲酸钠对酶也有一定程度的抑制；Mg^2＋、Ca^2＋、甘油、明胶、蔗糖、香精是较好的酶活稳定剂和促进剂。     

豆豉纤溶酶的研究进展

从豆豉中筛选出的产豆豉溶栓酶的菌株分别有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtiilis）和解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。其发酵工艺有固体发酵和液体发酵。豆豉纤溶酶的酶学性质包括酶的分子量、酶的等电点、酶的稳定性、酶的最适反应温度和pH值、各种抑制剂对酶活性的影响等。酶的分离纯化要根据具体实际情况，对过滤、离心、盐析、超滤、凝胶过滤和层析分离等提取方法进行不同组合。酶活的测定包括琼脂糖—纤维蛋白平板法、纤维蛋白块溶解时间法、血清板法、肽底物法、酶联免疫吸附法。     

豆豉纤溶酶研究概况及进展

豆豉纤溶酶是从我国传统发酵食品豆豉分离得到一种具有强烈纤溶作用丝氨酸蛋白酶。该文对豆豉纤溶酶产生菌筛选与诱变、发酵工艺、酶分离纯化、理化性质、分子生物学研究进行综述;同时还简介豆豉纤溶酶活性测定方法和抗栓、溶栓作用,并对其应用前景进行展望。     

纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究

经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6～10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

豆豉溶栓酶液态发酵工艺研究

对豆豉中筛选到的1株溶栓酶产生菌-枯草芽孢杆菌HGD107,进行摇瓶和15L发酵罐液态发酵工艺研究。在最适发酵条件下,摇瓶发酵产豆豉溶栓酶酶活达到3643U/mL发酵液(尿激酶单位),15L发酵罐发酵产豆豉溶栓酶酶活达到2050U/mL发酵液(尿激酶单位)。     

豆豉纤溶酶冻干保护剂的研究

采用正交试验对豆豉纤溶酶冻干保护剂进行了优化。分别以脱脂乳、乳糖、明胶为正交试验因素,以不同添加量为水平。试验结果表明,影响豆豉纤溶酶冻干后残余酶活力的保护剂的主次顺序为15%脱脂奶粉>1%明胶>6%乳糖。豆豉纤溶酶冻干保护剂的最佳组合为A2B4C1,即15%脱脂奶粉与6%乳糖的体积比为1:3;纤溶酶与保护剂的体积比为1:2;残余酶活力超过90%。     

枯草芽孢杆菌MX-6产纳豆激酶特性分析

分离鉴定溶栓酶高产菌株,对其所产溶栓酶的类型、相对分子质量及发酵曲线进行特性分析。从中国豆豉中分离一株纤溶酶高产菌株MX-6,经个体形态、菌落形态及16S r DNA基因同源性比对,确定该菌株为枯草芽孢杆菌。应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)克隆到1 473 bp的纤溶酶编码基因apr N,根据推测氨基酸序列与同源序列的多序列比对及系统进化树结果显示该纤溶酶为纳豆激酶。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-polyacrylamide gels electrophoresis,SDS-PAGE)确定枯草芽孢杆菌MX-6所产纳豆激酶的相对分子质量约28 ku,与预测的相对分子质量27 712. 72 u相吻合。枯草芽孢杆菌MX-6所产纳豆激酶的发酵曲线结果显示在72 h达到纳豆激酶最大合成量,在纤维蛋白平板上的溶圈直径高达21. 60 mm。为更好地实现纳豆激酶的开发及应用提供一定的理论依据和方法参考。     

毛霉型豆豉和黄豆脂肪酸检测前处理方法比较研究

选取毛霉型豆豉和原料黄豆为材料,采用索氏抽提结合氢氧化钾-甲醇（KOH-CH3OH）、豆粉甲醇钠（CH3ONa）和豆粉KOH-CH3OH 3种甲酯化方法前处理样品,利用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）分析豆豉和黄豆的脂肪酸组分含量,并对3种样品前处理方法进行比较分析。结果显示,豆粉KOH-CH3OH甲酯化法前处理检测得到10种脂肪酸,其他两种方法预处理均只检测到5种脂肪酸。豆粉KOH-CH3OH甲酯化法前处理简便快捷,适合大量样品的快速检测,可以避免长时间加热对脂肪酸组分的影响,测定结果相对准确,对应用气相色谱法测定黄豆发酵前后脂肪酸种类及含量具有实际指导意义。     

纯种米曲霉发酵与自然发酵豆豉挥发性成分比较

采用气相色谱- 质谱的分析方法,对米曲霉纯种发酵制成的豆豉与传统自然发酵豆豉中挥发性成分变化进行比较分析。结果表明,共鉴定出包括酯类、吡嗪类、酮类、醇类、烷烃类、烯烃类、酸类、醛类、呋喃类、醛类等11 类51 个化合物。纯种发酵挥发性成分中含量较高的是酯类(58.53%)、酸类(23.98%)、烯烃类(10.07%)、酮类(5.56%),采用传统自然发酵制成产品中含量较高的是酸类(62.4%)、酯类(31.46%)、醛类(3.07%)、胺类(1.98%)。     

豆豉营养评价及其粗纤溶酶活性检测

试验检测了收集到的不同豆豉的蛋白质、水分、总糖含量等,了解各种豆豉的营养价值;并通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测定了各种豆豉纤溶酶的活性,分析了影响豆豉纤溶酶粗酶液活性的因素。结果显示,豆豉样品DC-H8的营养价值较高;试验确定豆豉纤溶酶粗酶液的提取方法:取一定量的豆豉,保持豆豉整粒,加5倍体积的生理盐水,于4℃浸提16h,离心、过滤后测定酶活,豆豉样品DC-H8的纤溶酶活性最高,为285.759 IU/mL。     

纳豆激酶的研究进展与展望

纳豆激酶主要是由枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）代谢产生的碱性丝氨酸蛋白酶,因其具有较强的溶栓能力而著称。与其他的大多溶栓剂相比,纳豆激酶具有安全性好、成本低、易吸收、副作用小等优点,因此可用于开发溶栓药物。该文对国内外纳豆激酶的溶栓功效、理化特性、发酵工艺、活性测定、纯化、改性和产品进行了综述,对其当前研究中的关键问题进行分析,并对未来纳豆激酶的研究方向进行了展望。     

纳豆激酶分离纯化方法的研究

采用硫酸铵二级盐析、330(OH)型树脂脱色、CM-52阳离子树脂离子交换层析三步法从发酵液中提取纳豆激酶。结果发现:(1)硫酸铵盐析采用20%~60%饱和度范围,纯化倍数为3.23,收率为72.36%;(2)330(OH)型树脂脱色,在脱色的同时可以除去杂蛋白,样品纯度达到电泳显示2条带;(3)CM-52阳离子交换树脂对纳豆激酶属于优吸型吸附,在pH6.0,0.01mol/L的PBS中交换效果最好,可以得到电泳纯的纳豆激酶,总收率为48.51%。     

豆豉的研究与探讨

综述豆豉的释名和功能,论证天然发酵的合理性和纯种发酵的局限性。指出用"淡豆豉"冠名和把制曲称为前发酵的不合理,探讨了豆豉研究的方向。